NSFC-河南人才培养联合基金(U1204327)
- 作品数：3 被引量：9H指数：2
- 相关作者：刘畅卢清侠张改平郭官鹏邓瑞广更多>>
- 相关机构：河南省农业科学院河南农业大学郑州大学更多>>
- 发文基金：NSFC-河南人才培养联合基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测被引量：2
- 2013年
- 为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE显示VP1蛋白以包涵体形式获得高效表达,蛋白分子质量约为29ku。通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,结果表明,在37℃条件下,IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导表达6h后,VP1蛋白的表达量最大。Western-Blot分析表明,VP1重组蛋白能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别。ELISA检测结果显示,VP1包涵体蛋白经洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后具有较高的活性。
- 刘畅卢清侠杨继飞王世红王寅彪郭官鹏邓瑞广张改平
- 关键词：A型口蹄疫病毒VP1蛋白蛋白纯化活性鉴定
- 口蹄疫病毒3D蛋白C端Th表位的重组表达及免疫功能鉴定被引量：1
- 2013年
- 为获得含有口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D蛋白C端多个Th表位的重组表达蛋白,根据口蹄疫3DC端160个氨基酸序列,设计优化并人工合成相应的核酸序列,将其克隆至pET28a,构建原核表达质粒pET28a-C160,并将重组质粒转化BL21(DE3),0.5mmol/L IPTG诱导后,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。结果显示,在25ku处有一条明显的蛋白表达条带,且重组蛋白能与豚鼠抗O型口蹄疫病毒阳性血清发生特异性反应。对表达产物进行可溶性分析,结果显示,表达蛋白全部以包涵体形式存在,经变复性后获得较高质量浓度的纯化蛋白。可见:用纯化的3DC160蛋白作为Th佐剂与口蹄疫主抗原混合制成疫苗,免疫后能刺激猪体产生较高水平的口蹄疫抗体。
- 王世红张改平卢清侠金前跃刘畅常咏哲王爱萍
- 关键词：口蹄疫病毒TH表位原核表达蛋白纯化
- A型口蹄疫病毒VP1蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2014年
- 以原核表达经纯化复性制备的A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白代替传统病毒抗原包被,建立快速、安全、有效的A型FMDV抗体ELISA检测方法。对前期制备的A型VP1蛋白进行Western-Blot检测,结果表明,VP1蛋白能够特异性识别A型FMDV阳性牛血清,可作为检测抗原建立检测A型FMDV抗体的方法。以最佳质量浓度1mg/L VP1蛋白为检测抗原,方阵滴定法确定最佳检测血清稀释度为1∶50[V(血清)∶V(封闭液)],最佳的酶标二抗稀释度为1∶2 000[V(酶标二抗)∶V(封闭液)],建立A型FMDV抗体ELISA检测方法。该方法的敏感性为94.32%,特异性为99.09%,批内与批间重复试验变异系数均小于8%。采用该方法检测201份临床血清,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达92.54%。研制的VP1-ELISA试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便,可用来监控A型口蹄疫抗体水平。
- 卢清侠刘畅郭官鹏邢广旭刘运超邓瑞广张改平
- 关键词：A型口蹄疫病毒VP1蛋白间接ELISA
