四川省科技支撑计划(2010SZ0048)
- 作品数：6 被引量：35H指数：4
- 相关作者：韩小伟冯刚陈竹白亦光赵明更多>>
- 相关机构：南充市中心医院川北医学院川北医学院第二临床学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省科技支撑计划南充市应用技术研究与开发资金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 穿刺抽吸法诱导兔椎间盘退变模型被引量：12
- 2013年
- 目的:实验通过纤维环穿刺抽吸法建立兔椎间盘退变模型,并通过病理组织学、影像学检测分析此种方法的特点。方法:取10月龄健康日本大耳白12只,雌雄不限,利用21 G穿刺针分别在兔L3～4、L4～5、L5～6节段刺入纤维环并抽吸髓核约8～10 mg;L1～2、L2～3及L6～7节段只暴露不做穿刺抽吸。造模完毕后,实验兔分别于术后4、8、12、16周各取3只进行指标检测MRI检查,然后处死实验动物获取椎间盘,利用病理组织学观察。结果:L3～4、L4～5、L5～6椎间盘髓核MRIT2WI信号强度在术后随时间延长呈现逐渐降低趋势,髓核面积逐渐缩小,椎间隙高度也逐步下降,从术后4周开始两组差异有统计学意义(P<0.05)。随着时间的进展,番红"O"染色显示纤维环穿刺组髓核内细胞外基质含量逐渐减少。结论:纤维环穿刺法可成功建立椎间盘退变模型,比较真实地模拟了人类椎间盘损伤后的退变过程。
- 白亦光韩小伟张旭乾陈华平赵明刘康陈竹杨泽龙倪伟冯刚
- 关键词：椎间盘退变动物模型
- 应用AdEasy-1腺病毒载体系统构建人GDF-5基因重组腺病毒被引量：4
- 2014年
- 目的应用AdEasy-1腺病毒载体系统构建人生长分化因子-5(GDF-5)基因重组腺病毒载体,并在HEK293细胞中扩增制备重组腺病毒。方法将PCR获取的GDF-5基因插入到质粒pMD19-T中,基因测序鉴定后将目的基因克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV,HindⅢ酶切鉴定。重组质粒经PmeⅠ酶切使之线性化并去磷酸化处理,电转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠埃希菌BJ5183,使其在细菌内发生同源重组,卡那霉素筛选,HindⅢ酶切鉴定阳性克隆,扩增重组腺病毒质粒,并转染HEK293细胞,包装成重组腺病毒Ad-GDF-5,分别采用Western blot、TCID50法对Ad-GDF-5进行蛋白鉴定和滴度测定。结果经PCR扩增得到的GDF-5大小约为1.7kb,基因测序结果证实该基因与GENBANK中人GDF-5基因序列相同。pShuttle-CMV-GDF-5、pShuttle-CMV-GDF-5-AdEasy-1经HindⅢ酶切后均得到大小约为1.7kb的片段,与GDF-5大小相符。Western blot证实Ad-GDF-5感染HEK293细胞后大量表达成熟GDF-5蛋白。研究结果表明成功地构建了携带人GDF-5基因的重组腺病毒载体,并制备出5.6×109 PFU/mL的重组腺病毒。结论利用AdEasy-1腺病毒载体系统成功构建了携带人GDF-5基因的重组腺病毒载体,并制备出高滴度值的重组腺病毒Ad-GDF-5,为进一步研究GDF-5的生物学功能及其相关疾病的基因治疗奠定了基础。
- 罗栩伟罗栩伟陈竹刘康韩小伟陈竹冯刚
- 关键词：腺病毒科生长分化因子-5基因治疗
- 兔骨髓间充质干细胞的分离培养及鉴定被引量：12
- 2013年
- 目的:探讨一种简便可行的兔骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)体外分离培养方法。方法:通过全骨髓贴壁分离法体外分离、扩增兔骨髓间充质干细胞,观察其增殖和生长特性,绘制生长曲线;倒置相差显微镜观察细胞形态;并向软骨细胞诱导分化,采用番红快绿染色和甲苯胺蓝染色鉴定。结果:经全骨髓贴壁法得到的骨髓间充质干细胞性状稳定,为纺锤状,呈克隆样生长;成软骨诱导培养的骨髓间充质干细胞,表现出软骨细胞的形态特征和生物学特征。结论:采用全骨髓贴壁分离法操作简便,是培养兔骨髓间充质干细胞的理想方案,在适当的条件下BMSCs能多向分化。
- 刘康白亦光陈竹韩小伟杨泽龙赵明宋桂芹冯刚
- 关键词：骨髓间充质干细胞
- 椎间盘组织工程学髓核种子细胞的研究新进展被引量：3
- 2013年
- 椎间盘退行性变是临床的常见病,其病因尚不明确,可引起的一系列疾病如腰椎间盘突出症、颈椎病、椎间盘源性疼痛、椎管狭窄症以及脊柱节段不稳等,是导致腰腿痛和影响患者生活质量的常见原因之一。目前临床上的各种治疗办法或多或少存在着许多难以克服的问题,随着椎间盘髓核细胞组织工程学研究的不断深入,为椎间盘退行性变的治疗带来了新的希望,但其种子细胞的来源和鉴定等方面仍有许多问题亟待解决。
- 杨泽龙冯刚
- 关键词：椎间盘退行性变髓核细胞干细胞
- 人退行性变髓核细胞体外分离培养及鉴定被引量：1
- 2016年
- 目的观察体外分离培养的人退行性变髓核细胞形态学表现,并分析其生物学特性。方法收集人退变髓核组织,胰酶联合Ⅱ型胶原酶消化分离出髓核细胞行平面培养并传代,倒置显微镜观察细胞形态及生长情况,并分别在1w、2w、3w三个时间点通过硫酸化的糖胺聚糖含量测定、免疫组化染色、Safranin-O染色、Real-time PCR对髓核细胞进行生物学特性分析及鉴定。结果髓核细胞呈星形、多角形、梭形,部分胞浆突起,伸出伪足,与软骨样细胞形态相近,传代后细胞形态体积较原代大。髓核细胞能合成大量硫酸化的糖胺聚糖,细胞中富含蛋白多糖、Ⅱ型胶原,免疫染色呈阳性,随着培养周数的增加,其着色深度无明显强化。Safranin-O染色将细胞核染成红色,胞浆淡染,随着培养日期的延长,其红色强度无明显加深。Real-time PCR检测到Aggrecan、CollagenⅡ两基因在1w、2w、3w均持续稳定的表达,各观察点间无统计学差异(P>0.05)。结论胰酶联合Ⅱ型胶原酶消化法操作简单,培养效率高,传代培养的髓核细胞增殖速度快,经鉴定具有典型的类软骨细胞表征及良好的生物学特性,能持续稳定的表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原。
- 罗栩伟李艳刘康冯刚陈竹
- 关键词：髓核细胞生物学特性
- 纤维环穿刺抽吸法和纤维环切开法建立兔椎间盘退变模型的比较被引量：10
- 2013年
- [目的]通过纤维环穿刺抽吸法和纤维环切开法建立兔椎间盘退变模型,分析此两种方法的可行性及特点。[方法]取10个月龄健康日本大耳白兔24只,随机分为2组,其中A组为纤维环穿刺抽吸组,利用18 G穿刺针分别在兔L3、4、L4、5、L5、6椎间盘刺入并抽吸髓核8～12 mg;B组为纤维环切开组,利用手术刀分别在兔L3、4、L4、5、L5、6椎间盘纤维环上做水平位切口;造模完毕,两组兔分别于术后4、8、12、16周进行MRI检查,病理组织学观察和免疫组化染色观察。[结果]A、B两组退变椎间盘MRI T2加权像信号随时间延长呈现持续减弱趋势,术后4、8周纤维环穿刺组T2加权像信号强度评分较纤维环切开组低(P<0.05),组织学观察发现造模组髓核细胞逐渐减少;免疫组化染色观察Ⅱ型胶原和蛋白聚糖表达含量随时间延长逐渐降低,且B组含量明显低于A组。[结论]两种方法均能建立兔椎间盘退变模型,但纤维环切开法椎间盘的退变程度较纤维环穿刺法出现较早且较为剧烈。
- 白亦光韩小伟张旭乾陈华平赵明刘康陈竹杨泽龙倪伟冯刚
- 关键词：椎间盘退变
