国家质检公益性行业科研专项(201010020)
- 作品数：1 被引量：6H指数：1
- 相关作者：杜鹃陈孝煊朱旭高隆英刘荭更多>>
- 相关机构：华中农业大学深圳出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 传染性造血器官坏死病毒糖蛋白抗血清的制备及应用被引量：6
- 2012年
- 应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从传染性造血器官坏死病毒(Infectious hemato-poietic necrosis virus,IHNV)感染的细胞悬液克隆病毒的糖蛋白基因,将其亚克隆至原核表达载体pCWori,转化到大肠杆菌DH5α,通过发酵大肠杆菌制备病毒糖蛋白。经SDS-PAGE分析,诱导表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,使用Ni-NTA亲和层析柱在变性条件下进行纯化并透析复性,最终得到了较高纯度的可溶性糖蛋白,分子量约为57kDa。Western-blot分析结果显示,所表达的蛋白能够被IHNV病毒制备的兔抗IHNV血清识别。用复性后的蛋白免疫小鼠制备抗血清,ELISA显示抗体效价可达1∶64000。经制备的抗血清可以作为一抗建立ELISA检测方法,用于检测细胞悬液的病毒粒子,将抗血清稀释到1∶16000仍能与IHNV全病毒发生反应。本研究利用重组的IHNV糖蛋白成功制备了高效价的抗血清,并能够与IHNV全病毒发生特异性结合,为IHNV免疫学检测方法建立奠定了基础。
- 朱旭兰文升刘荭高隆英杜鹃陈孝煊
- 关键词：糖蛋白原核表达抗血清
