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“首都临床特色应用研究”专项(z121107001012139)
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1
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房艳辉
李雪梅
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陈丽萌
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2013
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低密度脂蛋白促进腹膜间皮细胞转分化及细胞外基质蓄积
被引量:1
2013年
目的探讨高糖作用下低密度脂蛋白(LDL)对人腹膜间皮细胞(HPMC)转分化及细胞外基质(ECM)蓄积的影响。方法(1)将HPMC随机分为对照组、LDL组(100mg/L)和LDL(100mg/L)+LDL受体阻断剂乳铁蛋白(100mg/L)组,共培养24h。细胞免疫荧光法观察HPMC细胞上LDL受体的表达;油红O染色法观察HPMC对LDL的摄取情况。(2)将HPMC分别加入不同浓度LDL(0、25、50、100mg/L)培养24h,倒置相差显微镜下观察细胞形态的改变,细胞免疫荧光法观察细胞内OL平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达。(3)将静止细胞分为对照组(5.6mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(M,2.18%甘露醇)、低糖组(LG,30mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,120mmol/L葡萄糖)和高糖+LDL组(HG+LDL,120mmol/L葡萄糖+100mg/LLDL),共培养48h。实时定量PCR法检测d.SMA、E,cadherin和1型纤溶酶原激活物抑制物(PA1-1)mRNA的表达;Western印迹法检测α-SMA蛋白表达;ELISA法检测细胞培养上清中I型胶原(Col I)和PA1-1蛋白含量。结果(1)免疫荧光观察到LDL可以刺激HPMC细胞表达LDL受体。油红O染色法观察到HPMC能摄取LDL进入细胞内,加入乳铁蛋白能抑制LDL进入细胞内。(2)倒置相差显微镜下观察到,随LDL浓度增高,细胞问连接逐渐趋于松散,细胞呈现明显梭形成纤维细胞样形态;胞质内α-SMA荧光强度逐渐增强。与对照组相比,HG+LDL组α-SMAmRNA和蛋白表达显著上调(均P〈0.05),E-cadherinmRNA表达显著下调(P〈0.05)。上述指标在HG组与HG+LDL组、HG组与对照组之间表达量差异无统计学意义。(3)ELISA法检测结果显示,与HG组和对照组相比,HG+LDL组细胞上清中Col I蛋白含量[(19.27±0.17)μg/L比(14.09±0.30)μg/L、(14.81±0.91)μg/L,均P〈0.05]及PAI-1含量[(498.24±76.91)ng/L比(342.19±30.43)μg/L、�
房艳辉
蒋兰萍
陈丽萌
李雪梅
李学旺
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脂蛋白类
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人腹膜间皮细胞
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