广东省自然科学基金(04300227)
- 作品数：6 被引量：8H指数：2
- 相关作者：那晓东李树浓张秀明赵自平姜树晶更多>>
- 相关机构：中山大学中山大学附属第三医院广东省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
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- flk-1基因在胎肝造血细胞增殖中的调控作用被引量：1
- 2009年
- 【目的】探讨flk-1基因在胎肝造血细胞体外扩增中的调控作用。【方法】体外培养E14胎肝造血细胞,应用Western-Blot检测flk-1配基VEGF及其抑制剂SU5416对E14胎肝造血细胞flk-1蛋白表达水平的影响,通过细胞计数、氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入实验及细胞周期分析观察flk-1配基VEGF及其抑制剂SU5416对E14胎肝造血细胞增殖的影响,造血集落CFU-GM(colony-forming unit-granulocyte/macrophage粒-巨噬细胞系集落形成单位)培养检测造血祖细胞的功能状态。【结果】VEGF或VEGF加SU5416均可促进胎肝造血细胞的增殖,细胞数目分别为对照组的108%和142%,并且集落数量也显著增加,分别为对照组的159%和151%(P<0.01);单独应用SU5416使造血细胞的数目较对照组减少了8%,但集落产率与对照组无显著性差异。Western blot结果经统计学分析,SU5416组和VEGF加SU5416组flk-1蛋白表达强度分别为对照组的165%(P<0.01)和57%(P<0.05),与对照组相比有显著性差异。【结论】VEGF受体flk-1和flt-1均参与介导VEGF对胎肝造血细胞增殖的调控作用。SU5416阻断flk-1信号转导可上调flk-1的蛋白表达,Flt-1活化可下调flk-1的蛋白表达。
- 张钰姜树晶那晓东陈晓勤郑芹
- 关键词：ENDOTHELIALGROWTHFLK-1
- 诱导人卵黄囊间质干细胞向成骨细胞及神经细胞定向分化
- 2005年
- 目的:分离纯化及体外定向诱导人卵黄囊间质干细胞(hYS -MSC)分化为成骨细胞及神经细胞。方法:卵黄囊细胞经贴壁培养、传代纯化得到hYS -MSC ,检测其表面抗原表达、对其进行核型分析、细胞周期检测并测定AKP活性;采用地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素C作成骨诱导剂、β-巯基乙醇或复方丹参注射液作为神经诱导剂诱导hYS -MSC向成骨细胞及神经细胞定向分化。组织化学方法作成骨检测;免疫组化方法检测NSE、NF及GFAP在经神经诱导hYS -MSC中的表达。结果:hYS -MSC易于纯化,在培养过程中保持正常核型,具有较大增殖能力。hYS -MSCCD2 9、CD4 4、CD16 6及CD10 5表达阳性,CD34、CD4 5和CD86为阴性;AKP弱阳性。hYS -MSC经成骨诱导AKP强阳性,诱导两周后形成钙盐沉积形成的矿化区。hYS -MSC经神经诱导可见NSE、NF或GFAP阳性细胞,符合神经元及胶质细胞的生物学特征。结论:hYS -MSC在体外培养过程中具有较大增殖能力并保持正常核型,与成体MSC表型一致,在体外可以诱导分化为成骨细胞、神经元及胶质细胞。
- 那晓东余伟华赵自平朱美玲钟小英雷俊霞宋新民黄春浓张秀明李艳项鹏李树浓
- 关键词：干细胞胎儿发育分化成骨细胞神经元
- 胶原表面改性CPC对小鼠卵黄囊间质干细胞体外生长与BMP-2表达的影响被引量：1
- 2005年
- 目的 观察胶原表面改性磷酸钙骨水泥 (CPC)对小鼠卵黄囊间质干细胞体外生长与骨形态发生蛋白 2 (BMP 2 )表达的影响。方法 分离、纯化及传代培养小鼠卵黄囊间质干细胞 ,用0 .5 %Ⅰ型胶原对CPC进行表面改性 ,检测胶原表面改性CPC对卵黄囊间质干细胞增殖分数的影响 ,扫描电镜观察卵黄囊间质干细胞在胶原表面改性CPC表面的黏附生长情况 ,逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)检测与胶原表面改性CPC共培养卵黄囊间质干细胞BMP 2mRNA的表达。结果 胶原表面改性CPC有利于卵黄囊间质干细胞黏附生长 ,共培养 6d ,卵黄囊间质干细胞的增殖分数为 1.12 9,并可检测到BMP 2mRNA的表达。结论 胶原表面改性CPC能支持小鼠卵黄囊间质干细胞体外生长 ,并促进其BMP 2mRNA的表达。
- 赵自平那晓东蔡道章周江南
- 关键词：间质干细胞胶原卵黄囊BMP-2体外生长
- 胚胎干细胞来源造血细胞的细胞表型和功能分析被引量：3
- 2009年
- 【目的】分析经卵黄囊(YS)、胎肝(FL)和骨髓来源(BM)的基质细胞条件培养液(SCCM)诱导产生的胚胎干细胞(ES)来源造血细胞的细胞表型与功能差异。【方法】制备YS-SCCM、FL-SCCM及BM-SCCM,将3种基质细胞条件培养液分别加入ESE14.1细胞分化培养体系培养7d,通过对分化ESE14.1细胞造血发育表面标志FLK-1、Integrin-α4(整联蛋白-α4)、Sca-1(干细胞抗原-1)、CD34的检测、体外高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)分析及体内脾集落形成单位(CFU-S)检测,评价3种基质细胞条件培养液对ESE14.1细胞体外造血发育的调控作用。【结果】经FL-SCCM诱导的EB细胞Flk-1+、Integrinα4+和Sca-1+细胞均高于YS-SCCM和BMSC-CM诱导组,分别为3.03%、2.9%和13.74%;经BMSC-CM诱导产生的CD34+细胞比例最高,为1.07%。经FLSC-CM或BMSC-CM诱导产生的造血细胞其HPP-CFC产率明显高于对照组,分别为7.4个/105细胞(P<0.01)和5.8个/105细胞(P<0.05);经FLSC-CM或BMSC-CM诱导产生的造血细胞其CFU-S产率亦明显高于对照组,分别为8.5个/5×105细胞和6.75个/5×105细胞(P<0.001)。【结论】YS-SCCM、FL-SCCM及BM-SCCM均可诱导ESE14.1向造血细胞分化,FL-SCCM和BM-SCCM造血定向诱导效率较高,所产生的细胞具备造血细胞的正常功能,FL-SCCM诱导产生的造血细胞原始程度高于BM-SCCM诱导产生的造血细胞。
- 陈晓勤那晓东余伟华李树浓张秀明曾有健林承光郑芹蒋涛
- 关键词：胚胎造血
- 内皮生长因子和胎盘生长因子对小鼠胎肝造血干细胞髓系分化的作用被引量：3
- 2011年
- 【目的】观察VEGF(内皮生长因子)和PlGF(胎盘生长因子)对小鼠胎肝造血干细胞髓系分化的影响,并探讨其调控机制。【方法】体外培养E13胎肝造血细胞,培养造血集落CFU-GM,观察VEGF和PlGF对胎肝造血干细胞髓系分化的作用,应用Western-Blot检测不同处理条件对胎肝造血细胞Akt蛋白以及p-Akt蛋白表达水平的影响,用MTT法来评估不同浓度的LY294002(PI3K/Akt抑制剂)对胎肝造血细胞增殖的影响,通过CFU-GM观察LY294002对VEGF和PlGF调控胎肝造血作用的影响。【结果】VEGF和PlGF均可促进胎肝造血干细胞髓系分化,集落数分别为对照组的141%(P<0.01)和123%(P<0.05);PlGF可上调胎肝造血细胞p-Akt蛋白表达,其表达水平为对照组的143%(P<0.05);VEGF及其与PlGF联合应用对胎肝造血细胞p-Akt蛋白表达水平无明显影响。LY294002可抑制胎肝造血细胞的增殖,并具有明显的剂量依赖关系(r=0.9647,P<0.01),在LY294002存在的条件下加入VEGF或PlGF,其CFU-GM产率与单独应用LY294002相比无明显差异(P>0.05)。【结论】VEGF和PlGF均能促进胎肝造血干细胞的髓系分化;PlGF可通过上调胎肝造血细胞Akt的磷酸化水平调节胎肝造血细胞的髓系分化;LY294002可通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制VEGF和PlGF对胎肝造血干祖细胞髓系分化的调控作用。
- 肖菲喆信文君姜树晶庞瑞萍李永勇那晓东刘先国
- 关键词：PLGFP-AKT
- 人卵黄囊间质干细胞多向分化潜能的实验研究被引量：1
- 2005年
- 【目的】分离纯化及体外观察人卵黄囊间质干细胞(hYS-MSC)的多向分化潜能。【方法】卵黄囊单细胞悬液经贴壁培养、传代纯化得到 hYS-MSC,并从细胞表型及生物学特性等方面对其进行鉴定;采用地塞米松、β-甘油磷酸钠、维生素 C 作成骨诱导剂、β-巯基乙醇或复方丹参注射液作为神经诱导剂、地塞米松、消炎痛、胰岛素作为成脂诱导剂诱导 hYS-MSC 向成骨细胞、神经细胞及脂肪细胞定向分化。组织化学方法作成骨检测;免疫组化方法检测 NSE、NF 及 GFAP 在经神经诱导 hYS-MSC 中的表达;油红 O 染色检测中性脂肪。【结果】hYS-MSC 易于纯化,在培养过程中保持正常核型,具有较大增殖能力。hYS-MSC CD29、CD44、CD166及 CD105表达阳性,CD34、CD45和 CD86为阴性;AKP 弱阳性。hYS-MSC 经成骨诱导 AKP 强阳性,诱导两周后形成钙盐沉积形成的矿化区。hYS-MSC 经神经诱导可见 NSE、NF 或 GFAP 阳性细胞,符合神经元及胶质细胞的生物学特征。hYS-MSC 经成脂诱导转化为大小不等的园形或椭圆形细胞,胞浆内可见脂滴形成,胞核被挤于细胞的一侧,经油 O 染色脂滴染橘红色,符合脂肪细胞的生物学特征。【结论】hYS-MSC 与成体 MSC 表型一致,具有较大增殖及多向分化潜能,在体外可以诱导分化为成骨细胞、神经元、胶质细胞及脂肪细胞。
- 那晓东赵自平张秀明朱美玲黄春浓宋新民李树浓
- 关键词：间质干细胞胚胎发育分化
