江苏省自然科学基金(B2007079)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
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- 巨型艾美球虫配子体gam82基因的克隆表达与免疫原性分析被引量：5
- 2010年
- 提取巨型艾美球虫(Eimeria maxima)南通株(NT株)配子体总RNA,应用RT-PCR技术对gam82基因进行克隆,并对其核苷酸及氨基酸进行序列分析。结果表明,克隆的基因全长为1791个核苷酸,具有一个完整的开放阅读框,编码596个氨基酸,与GenBank中发表的Houghton株gam82基因同源性为100%。根据对推导的氨基酸序列的二级结构和抗原表位分析的结果,筛选免疫原性良好的区域,命名为gam82-Y,进行原核表达。重组菌经过IPTG诱导后,通过SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,gam82-Y基因片段在大肠杆菌中得到了融合表达,相对分子质量约为53000。可溶性分析表明,融合蛋白主要以包涵体形式存在。以E.maxima高免血清为一抗进行Western-blot检测,显示重组抗原gam82-Y具有免疫原性。
- 彭昊陶建平许金俊刘丹丹李建梅任春芝
- 关键词：巨型艾美球虫克隆
- 巨型艾美耳球虫gam82基因核酸疫苗的构建与免疫原性分析
- 2011年
- 以重组质粒pGEM-T-gam82为模板,构建巨型艾美耳球虫gam82基因核酸疫苗。采用MTT法与ELISA对该核酸疫苗接种鸡体后淋巴细胞增殖与抗体水平的变化进行检测,结果显示,该核酸疫苗具有一定的免疫原性。
- 彭昊许金俊刘丹丹李建梅陶建平
- 关键词：巨型艾美耳球虫核酸疫苗免疫原性
- 巨型艾美球虫重组蛋白Gam82-Y和重组质粒pcDNA-gam82的免疫保护效果研究被引量：2
- 2011年
- 为研究巨型艾美球虫NT株重组蛋白Gam82-Y和重组质粒pcDNA-gam82对鸡的免疫保护效果,本研究以平均增重、相对增重率及卵囊减少率等作为评价指标,检测结果显示:中剂量重组蛋白佐剂组(0.5 mg-FCA)和中剂量重组蛋白组(0.5 mg)的免疫保护力均低于卵囊免疫组(p<0.05),但比其他各免疫组高(p<0.05);重组质粒(pcDNA-gam82)免疫组的平均增重、相对增重率、卵囊减少率等方面与重组蛋白免疫组相同,两者均优于未免疫攻虫组(p<0.05),但仍未能够达到卵囊免疫组的免疫保护水平(p<0.05)。
- 彭昊许金俊刘丹丹李建梅陶建平
- 关键词：巨型艾美球虫重组蛋白免疫保护力
- 巨型艾美球虫株间差异表达基因消减文库的构建和分析被引量：1
- 2009年
- 为分离鉴定巨型艾美球虫上海株与南通株间免疫原性的差异表达基因,分别以巨型艾美球虫上海株孢子囊cDNA为驱动组,以南通株孢子囊cDNA为试验组,或相反,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过2轮杂交和2次PCR分别构建了2个抑制性消减文库。随机从2个消减文库中分别挑取96个克隆产物,经PCR鉴定上海株和南通株孢子囊消减文库的重组率分别为91%和94%,差异基因片段大小为250～1 000 bp。从每个文库中随机挑取30个阳性克隆测序,并进行同源性比较分析,结果表明:从上海株cDNA消减文库中获得了19个单一有效序列,其中15个为未知序列;从南通株cDNA消减文库中获得了16个单一有效序列,其中13个为未知序列。这些结果将为分离巨型艾美球虫新功能基因和进一步探索球虫抗原变异相关的分子机理奠定基础。
- 孙文瑶许金俊陶建平吴海清李金贵彭昊张艳姜慧婕
- 关键词：巨型艾美球虫消减文库
