博士科研启动基金(43555014)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：邵红伟黄树林王俊伟张巨峰张文峰更多>>
- 相关机构：广东药学院中山大学暨南大学更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 共表达TcRα12-2和TCRVβ7.1重组腺病毒载体的构建及其杀伤肝癌细胞作用的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:构建共表达TCRα12-2和TCRVβ7.1重组腺病毒载体Ad.TCRα12.2-IRES-Vβ7.1,并研究其杀伤肝癌细胞的作用。方法:提取外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)总RNA,用RT-PCR的方法得到TCRα12-2基因。TCRVβ7.1基因由pCDN3.1-Vβ7.1扩增获得,将这两个基因以IRES相连克隆入腺病毒穿梭质粒pDC315中。穿梭质粒和腺病毒骨架质粒共转染HEK293细胞,包装出可同时表达TCRα12-2和TCRVβ7.1的重组腺病毒。然后提取病毒基因组DNA,对外源目的基因进行PCR鉴定;病毒感染宫颈癌细胞(HELA),48小时后提取细胞总RNA,通过RT-PCR鉴定目的基因表达;最后病毒感染PBMC,用流式细胞仪检测目的蛋白的表达。对鉴定正确的病毒进行大量扩增并测定滴度。用MTT比色法检测Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染的PBMC对肝癌细胞HEPG2和BEL-7402的杀伤作用。结果:从重组病毒基因组中扩增出目的基因TCRα12-2和TCRVβ7.1,RT-PCR和流式细胞仪检测表明目的基因可以有效的表达。Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1感染PBMC组对肿瘤细胞的杀伤率明显高于PBMC组和Ad-GFP感染组。结论:成功构建了双表达TCRα12-2和TCRVβ7.1基因的重组腺病毒载体Ad.TCRα12-2-IRES-Vβ7.1,且其感染后的PBMC可有效的杀伤肝癌细胞。
- 王俊伟张巨峰张文峰牟艳芳邵红伟黄树林
- 关键词：TCR
- 人TCA-12-2/TCB-7.1真核双表达载体的构建与表达被引量：2
- 2008年
- 目的:将T细胞抗原受体基因TCA-12-2和TCB-7.1共同构建在真核表达载体pDC315,用于哺乳动物细胞293转染研究。方法:将分离得到的淋巴细胞总RNA反转录合成cDNA,以此为模板进行PCR扩增得到TCA-12-2基因;以实验室保存含TCB-7.1基因的质粒为模板,扩增得到TCB-7.1基因。随后酶切,连入载体pIRES2-AcGFP1,通过亚克隆连入载体pDC315,得到重组质粒pDC315-TCA-12-2-TCB-7.1。重组体质粒经酶切鉴定后,并对插入的TCA-12-2和TCB-7.1基因片段进行测序,将鉴定好的阳性重组质粒用脂质体介导转染293细胞,并通过RT-PCR和流式细胞仪检测TCA-12-2和TCB-7.1基因的表达情况。结果:TCA-12-2和TCB-7.1可以同时构建在载体pDC315上,RT-PCR和流式细胞仪检测发现TCA-12-2和TCB-7.1基因可以成功在293细胞上表达。结论:成功构建了含TCA-12-2和TCB-7.1基因的双表达载体。
- 张文峰张巨峰邵红伟王俊伟牟艳芳黄树林
- 关键词：受体抗原T细胞
- 重组SARS-CoV S1蛋白抗原表位分析及抗原性检测被引量：1
- 2008年
- 目的对严重急性呼吸系统综合征冠状病毒（SARS—CoV）刺突蛋白（Spike，S）S1段进行原核重组表达，并检测表达产物的抗原性。方法对S1中的HLA抗原表位进行预测分析，根据分析结果选定用于重组表达的区段，利用pET21b载体进行原核表达，将产物纯化后利用SARS抗血清进行抗原性检测。结果抗原表位分析表明，S1中包含有多个能够被HLA分子有效提呈的抗原表位，综合考虑表位肽的分布、重组表达的效率、重组蛋白的空间构象以及引物设计的优化等因素，选取S1中的关键区域259～565aa进行原核重组表达，得到了包涵体形式的重组蛋白，经过纯化和复性，获得了纯度较高的可溶性S1蛋白；用SARS抗血清对此重组蛋白进行免疫学鉴定，表明该蛋白具有SARS特异的抗原性。结论重组表达的S1蛋白具有较强的抗原性，为进一步的疫苗研究和抗体筛选奠定了基础。
- 邵红伟蓝东明陈尚武刘泽寰黄树林
- 关键词：SARSS1蛋白抗原表位
- Hela细胞Survivin克隆及HLA-A2限制性CTL表位预测研究被引量：2
- 2007年
- 目的:从Hela细胞中克隆凋亡抑制因子Survivin的编码序列,进行测序,并由此预测其HLA-A*0201限制性CTL表位。方法:设计人Survivin基因序列特异引物,通过RT-PCR扩增Survivin编码序列,构建至pGEM-T载体后,测序分析,并对其进行了HLA-A*0201限制性CTL表位抗原表位相关预测。结果:从Hela细胞中克隆得到的Survivin和Survivin-ΔEx3两种剪接体,其中Survivin-ΔEx3发生1个同义突变和三个错义突变,预测其抗原表位抗原性发生了变化。结论:寻找抗原性强、结合力高的表位,对于今后抗肿瘤多肽疫苗的研究具有重要的意义。
- 孙裕昌沈娟沈晗邵红伟黄树林
- 关键词：SURVIVIN克隆CTL表位错义突变
