广西省自然科学基金(0832069)
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 相关作者：陈秀荔李咏梅陈晓汉蒋伟明马春霞更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所广西水产研究所更多>>
- 发文基金：广西省自然科学基金国家科技支撑计划广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 对虾WSSV病毒VP281基因的siRNA筛选研究
- 2011年
- 构建一个对虾WSSV VP281基因的siRNA筛选体系,获取有效siRNA,为进一步开展siRNA抗WSSV研究建立基础。根据已报道的VP281基因编码序列,设计并合成一对引物,扩增出带双酶切位点的VP281。对VP281和质粒pEGFP-C1分别酶切后进行连接,获取表达载体pEGFP-VP281。利用专业软件设计3对靶向VP281的siRNA(VP281-siRNA1﹑VP281-siRNA2﹑VP281-siRNA3),并合成siRNA,将3种siRNA分别与pEGFP-VP281共转染PK细胞。采用Western blot方法检测GFP-VP281融合蛋白的表达,半定量RT-PCR方法检验siRNA抑制VP281基因转录的效果。结果显示,pEGFP-VP281可在BHK细胞正常表达融合蛋白GFP-VP281。3对siRNA对GFP-VP281的mRNA转录均有不同程度的干扰效果,siRNA2的干扰效果最为显著。构建针对WSSV-VP281基因的siRNA筛选体系,初步验证了该系统的有效性,为开展siRNA抗WSSV研究建立了基础。
- 黎铭陈晓汉陈秀荔彭金霞马春霞蒋伟明彭敏赵永贞杨春玲李咏梅
- 关键词：对虾WSSVRNA干扰
- 对虾白斑病毒VP15基因的RNA干扰体外研究
- 2010年
- VP15是南美白对虾WSSV病毒的一个核衣壳蛋白基因。采用体外干扰实验筛选对VP15具有针对性的siRNA。实验构建了真核表达载体pEGFP-VP15,并将设计的siRNA以及pEGFP-VP15共转染BHK细胞。采用Western blot方法检测GFP-VP15融合蛋白的表达,半定量RT-PCR方法检验siRNA抑制VP15基因转录的效果。实验结果表明,pEGFP-VP15在PK细胞正常表达,设计的3对siRNA对GFP-VP15的mRNA转录均有不同程度的干扰效果;其中,siRNA1的干扰效果最为显著。实验结果为下一步对虾体内干扰WSSV病毒复制研究以及筛选更多的特异siRNA建立基础。
- 黎铭陈晓汉马春霞蒋伟明马宁熊建华彭金霞陈秀荔彭敏曾地刚李咏梅
- 关键词：WSSVRNA
