广东省自然科学基金(05004730)
- 作品数：16 被引量：31H指数：3
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- 晚期糖基化终末产物受体存在异常定位并能促进前列腺癌细胞的增殖
- 目的研究人晚期糖基化产物受体(Receptor for Advanced Glycation End Products,RAGE)在前列腺癌细胞中的亚细胞定位及其与前列腺癌细胞增殖的关系,为进一步研究RAGE在前列腺癌发...
- 陆斌赵善超邓鹏姜勇
- 关键词：细胞穿透肽负电荷
- 文献传递
- 一种用于上调内源性人SOD1表达多肽筛选的随机文库及细胞系的构建
- 2010年
- 目的以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为示踪物,建立一种简便、经济、有效的随机多肽文库,为进一步筛选出可上调内源性人SOD1表达多肽的药物奠定基础。方法采用点突变技术,在pET-14b-His-Tat-EGFP载体多克隆位点XhoI之后插入12个随机多肽的36个随机碱基序列。用阳离子脂质体LipofectamineTM2000包裹已构建的重组质粒pDsRed1-1-SOD1p后,转染NIH/3T3细胞,荧光显微镜观察SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的表达。用G418筛选稳定表达SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的细胞系,荧光显微镜检测红色荧光蛋白的表达及定位。结果在示踪载体的基础上构建的随机多肽文库理论上至少包含了107个独立克隆,且几乎所有克隆插入的随机片段都是36个碱基。稳定转染3个月后,重组质粒转染的细胞质及细胞膜上均有携带SOD1启动子的红色荧光蛋白的表达。结论成功建立随机多肽表达文库,获得了稳定表达SOD1启动子驱动的红色荧光蛋白的NIH3T3细胞系。
- 宋方丽史晓兰黄劭刘亚伟姜勇
- 关键词：肽库点突变转录启动子
- 基于TAP技术的TAT-PTD相互作用膜蛋白的筛选与鉴定
- 目的:基于串联亲和纯化(tandem affinity purification,TAP)技术的原理,利用硫酸乙酰肝素的类似物—肝素进行干预,筛选与人类Ⅰ型免疫缺陷病毒(HIV-1)的反式转录激活因子(trans-act...
- 邓鹏冯国开刘芸吴向玲姜勇
- 文献传递
- 细胞氧化应激过程中MK2调控磷酸化蛋白的鉴定
- 目的:氧化应激反应(oxidative stress response)是当细胞内的活性氧簇水平高于细胞的抗氧化能力时产生的适应性反应。在真核细胞中,应激激活的蛋白激酶(stress-activated protein ...
- 王蔚刘芸康瑞霞陈丽夏高晓邓鹏姜勇
- 关键词：活性氧簇磷酸化蛋白DIGE
- 文献传递
- 植烷酸氧化酶真核表达载体的构建及其细胞内定位
- 2010年
- 目的构建小鼠植烷酸氧化酶(Phyh)真核表达载体,并观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过RT-PCR扩增得到Phyh编码序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3上;对阳性克隆进行PCR、酶切和测序鉴定,利用脂质体转染方法转染NIH3T3细胞;使用细胞免疫化学技术对重组质粒pcDNA3/HA-Phyh在NIH3T3细胞中的表达及蛋白定位进行分析。结果 PCR、双酶切和测序鉴定表明,pcDNA3/HA-Phyh真核表达质粒构建正确;转染实验发现,该质粒能够在NIH3T3细胞中表达,表达产物主要定位在细胞质中。结论成功构建了带HA标签的小鼠Phyh真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究Phyh的细胞内生物学功能提供了一个重要的工具。
- 孙明晶胡水旺夏高晓姜勇
- 关键词：蛋白定位
- 人p53不同突变体的构建、表达及其对亚砷酸盐诱导细胞凋亡的影响被引量：1
- 2008年
- 目的构建人p53的不同突变体,并在真核细胞中表达,研究这些突变体对应激刺激诱导细胞凋亡的影响。方法采用PCR方法扩增人p53 cDNA序列,使用常规酶切、连接方法将其重组至pcDNA3/HA载体中,对阳性克隆进行酶切和PCR鉴定。将阳性重组体的第15位和第46位丝氨酸突变为丙氨酸,并转染NIH3T3细胞,观察其在NIH3T3细胞内的表达情况。转染不同突变体的NIH3T3细胞用Annexin V-FITC和碘化丙啶双标后,利用流式细胞术检测亚砷酸盐刺激前后的凋亡情况。结果构建的pcDNA3/HA-p53(WT)、pcDNA3/HA-p53(S15A)和pcDNA3/HA-p53(S46A)是正确的,且能在NIH3T3细胞内有效表达。流式细胞术检测表明,p53(WT)的表达使亚砷酸盐诱导的细胞凋亡增加,p53(S15A)的表达使细胞凋亡减少,而p53(S46A)没有明显影响。结论p53的第15位丝氨酸在其介导亚砷酸盐诱导的细胞凋亡中具有重要作用。
- 刘爱华龚小卫魏洁明小燕王达安邓鹏罗深秋姜勇
- 关键词：P53定点突变基因表达细胞凋亡亚砷酸盐
- SOD2启动子的克隆及转录活性的检测
- 2009年
- 目的:克隆小鼠锰超氧化物歧化酶基因(MnSOD,SOD2)5非编码区启动子序列,通过报告基因技术检测在静息或脂多糖(LPS)、亚砷酸钠(NaAsO2)等刺激下该段启动子的转录活性。方法:提取小鼠肝组织基因组DNA,PCR扩增小鼠SOD2启动子序列(-1554～+48);采用基因重组技术构建由SOD2启动子驱动的红色荧光蛋白报告基因载体,将该载体瞬时转染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),荧光显微镜下观察静息或NaAsO2、LPS、佛波酯(PMA)刺激下红色荧光蛋白表达。结果:正确扩增出小鼠SOD2启动子(-1554～+48)片段;成功构建其红色荧光蛋白报告基因载体,证实该质粒转染MEF细胞后静息状态下仅可见少量而微弱的红色荧光,经NaAsO2、LPS、PMA刺激后,红色荧光强度和亮度明显增加。结论:小鼠SOD2启动子(-1554～+48)在静息状态下即具有转录活性,炎性、氧化应激刺激后SOD2表达增强;该启动子的成功克隆和其报告基因载体的构建,为研究SOD2的基因表达调控机制提供了重要基础和工具。
- 张秀娟王娟刘铮王达安刘芸姜勇
- 关键词：锰超氧化物歧化酶启动子基因
- 带有负电荷的Hela细胞穿透肽内化机制及生物学功能的初步研究
- 目的:细胞穿透肽是近年来发现的具有穿透哺乳动物生物膜功能,并能介导大分子物质跨膜转导的一类小分子肽段,大多含有较多的碱性氨基酸。生理状态下,穿透肽分子的正电荷残基可与细胞表面蛋白聚糖多糖链的负电荷发生作用,介导了穿透肽与...
- 刘芸刘爱华吴向玲江力玮罗海华邓鹏姜勇
- 关键词：细胞穿透肽负电荷
- 文献传递
- 串联亲和纯化标记的HMGB1细胞因子诱导片段1融合表达载体构建和蛋白纯化及其功能初步探讨
- 2009年
- 目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)中细胞因子诱导片段1(CIF1)与串联亲和纯化(TAP)系统中纯化标签链霉亲和素结合肽(SBP)和钙调蛋白结合肽(CBP)序列相融合的原核表达载体,观察重组蛋白对小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为HMGB1参与炎症反应作用机制的研究以及CIF1结构域细胞膜表面受体蛋白的获得和鉴定奠定基础。方法:采用PCR方法分别扩增出CBP-SBP和CIF1的编码序列,构建表达质粒pET-14b/CBP-SBP-CIF。利用Ni-NTA亲和树脂纯化融合蛋白,纯度达85%以上。采用纯化后的蛋白诱导小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞RAW264.7,利用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测RAW264.7细胞释放TNF-α的水平变化。结果:表达载体构建正确,CIF1重组蛋白表达量高,纯度好。当蛋白浓度大于0.5ng/μl时,CIF1重组蛋白诱导细胞TNF-α的分泌量与对照组相比差异具有显著性(P<0.05),并且在CIF1蛋白浓度0～2.5ng/μl范围内,TNF-α的分泌量与CIF1重组蛋白的浓度呈显著的剂量依赖关系。结论:原核表达纯化了His-CBP-SBP-CIF1融合蛋白,该融合蛋白可以有效地作用于巨噬样细胞内的信号转导过程,介导了炎症因子TNF-α的分泌表达。
- 刘芸邓鹏刘铮徐佳吴向玲姜勇
- 关键词：高迁移率族蛋白B1
- 小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组的提取和双向电泳分离
- 2009年
- 目的提取小鼠肝细胞核磷酸化蛋白并利用双向凝胶电泳分离小鼠肝细胞核磷酸化蛋白。方法提取小鼠肝细胞核蛋白并利用金属磷酸盐亲和层析树脂纯化出磷酸化蛋白后,进行一维等电聚焦分离和二维聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并挑选其中一个蛋白斑点进行质谱分析。结果成功提取了肝细胞核磷酸化蛋白,通过双向凝胶电泳分离技术成功建立了小鼠肝细胞核磷酸化蛋白质组图谱。质谱鉴定结果证实被挑选蛋白斑点是小鼠核磷酸化蛋白。结论磷酸化蛋白纯化技术结合二维凝胶电泳分离技术是研究肝细胞核磷酸化蛋白质组的有效方法,为进一步全面研究和鉴定小鼠肝细胞核磷酸化蛋白的功能打下了基础。
- 夏高晓李红梅陈丽赵明哲胡水旺王继刚孙明晶邓鹏刘靖华姜勇
- 关键词：磷酸化蛋白质组双向凝胶电泳肝脏质谱
