吉林省科技发展计划基金(20100222)
- 作品数：4 被引量：7H指数：1
- 相关作者：李建华张西臣杨举李赫宫鹏涛更多>>
- 相关机构：吉林大学长春市农业科学院吉林农业大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金公益性行业科研专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 新孢子虫NcSAG4基因克隆及原核表达
- 为构建新孢子虫NcSAG4基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。本研究根据新孢子虫NcSAG4基因序列设计特异性引物,以新孢子虫总核酸为模板PCR扩增目的片段,与pMD-18-T相连构建克隆载体pMD...
- 梁茂茂丁鹤刘畅宫鹏涛李建华王伟利杨举李赫张国才张西臣
- 文献传递
- 新孢子虫NcSAG4基因克隆及原核表达被引量：1
- 2012年
- 目的构建新孢子虫NcSAG4基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达。方法根据新孢子虫NcSAG4基因序列设计特异性引物,以新孢子虫总核酸为模板PCR扩增目的片段,与pMD-18-T连接,构建克隆载体pMD-NcSAG4,经双酶切后回收目的片段,与表达载体pGEX-T连接,构建原核表达载体pGEX-NcSAG4,用IPTG诱导,通过SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。结果成功构建了新孢子虫NcSAG4基因原核表达载体pGEX-Nc-SAG4;SDS-PAGE电泳显示,在IPTG诱导下阳性菌高效表达了分子质量单位为18.79ku的蛋白质;Western blot显示表达产物可被抗新孢子虫的多克隆血清识别。结论成功构建了NcSAG4基因原核表达载体,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,为建立经济、实用的诊断新孢子虫病的ELISA方法奠定了基础。
- 李赫丁鹤李建华刘畅宫鹏涛王伟利杨举张国才张西臣
- 关键词：新孢子虫克隆原核表达
- 检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法的建立及其应用被引量：1
- 2015年
- 目的建立检测鹿新孢子虫感染的双抗夹心Dot-ELISA方法,并进行初步应用。方法以双抗夹心ELISA方法的A490值对应Dot-ELISA方法显色结果的方式,建立双抗夹心Dot-ELISA方法检测结果判定标准,确定HRP标记的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1H11、包被抗体(抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体1A1)、待测血清的最佳工作浓度,并对该方法的特异性、重复性及灵敏度进行验证。用建立的方法检测79份鹿血清,并与双抗夹心ELISA方法进行比较。结果确定该方法 HRP-H11抗体的最佳稀释度为1∶100,包被抗体最适工作浓度为0.3μg/片,待测血清稀释度为1∶8。自然感染犬新孢子虫的鹿阳性血清的敏感性稀释度为1∶64,与弓形虫阳性血清无交叉反应,敏感性、特异性较强;自然感染新孢子虫的鹿阳性血清3次检测结果重复性较好。该方法检测的76份鹿血清中,阳性12份,阳性率为15.2%,与双抗夹心ELISA方法检测结果一致。结论建立的双抗夹心Dot-ELISA方法可用于检测鹿群感染新孢子虫循环抗原,为新孢子虫病的诊断提供了新的方法。
- 田来明杨滨僮李智鹏张桐嘉宫鹏涛李建华王全楷杨举李赫张西臣
- 关键词：新孢子虫
- 抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体的制备及鉴定
- 2014年
- 目的制备抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体,并进行鉴定。方法用重组蛋白p GEX-MIC6作为抗原免疫BALB/c小鼠,收集脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,对融合后的杂交瘤细胞进行筛选后,经腹腔注射BALB/c小鼠,制备腹水,鉴定单抗的亚类。采用辛酸-硫酸铵法结合蛋白亲和层析柱纯化腹水,SDS-PAGE分析抗体的相对分子质量,间接ELISA法检测抗体效价及特异性,BCA蛋白浓度检测试剂盒测定抗体浓度。结果最终获得两株能稳定分泌新孢子虫MIC6蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A1和1H11,分泌的抗体分别属于Ig G1和Ig G2b亚类。纯化后的腹水经SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约为50 000的重链和25 000的轻链条带,纯化效果较好;1A1和1H11的腹水效价分别为5.12×104和1.024×105,浓度分别为0.935和2.010 mg/ml,两株单抗均能特异性识别新孢子虫,与弓形虫无交叉反应。结论制备的抗犬新孢子虫MIC6单克隆抗体特异性较强,为进一步研究新孢子虫MIC6的生物学功能及建立特异敏感的新孢子虫检测方法奠定了基础。
- 田来明杨滨僮张桐嘉宫鹏涛李建华王全楷杨举李赫王伟丽张西臣
- 关键词：新孢子虫单克隆抗体
- 新孢子虫病检测方法研究进展被引量：5
- 2011年
- 新孢子虫病是一类新发现的、严重危害畜牧业的原虫寄生虫病,能引起母畜流产和死胎,新孢子虫病也是导致奶牛流产的主要病因之一,给各国奶牛业造成巨大的经济损失。目前,尚没有防治本病的有效药物或疫苗,因此及时检出病牛是预防本病的有效方法。本文主要对新孢子虫的病原学诊断方法,免疫学检测方法及分子生物学检测方法的研究进展进行了综述。
- 徐晓芳邢沈阳李建华张西臣
- 关键词：新孢子虫病
- 犬新孢子虫nested-PCR检测方法的建立及应用
- 由于新孢子虫和弓形虫有相近的形态学和引起相同的疾病和病变,新孢子虫经常误诊为弓形虫。因此找到有效的特异诊断方法极为重要。本研究以弓形虫速殖为驱动子,新孢子虫速殖子为试验子建立SSH cDNA文库,经blast、expas...
- 贺鹏飞宫鹏涛张西臣杨举张国才李赫李建华
- 关键词：新孢子虫SSHNESTED-PCR
- 文献传递
