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国家生猪现代产业技术体系建设项目(NYCYTX-009)

作品数：13 被引量：140H指数：6
相关作者：童光志周艳君童武姜一峰虞凌雪更多>>
相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所华中农业大学上海交通大学更多>>
发文基金：国家生猪现代产业技术体系建设项目国家自然科学基金上海市科技人才计划项目更多>>
相关领域：农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 13篇中文期刊文章

领域

  • 13篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 11篇病毒
  • 6篇猪繁殖
  • 6篇繁殖
  • 5篇呼吸综合征
  • 5篇呼吸综合征病...
  • 4篇流行病
  • 3篇猪繁殖与呼吸...
  • 3篇猪繁殖与呼吸...
  • 3篇猪流行性腹泻
  • 3篇猪流行性腹泻...
  • 3篇流行病学
  • 3篇流行性
  • 3篇流行性腹泻
  • 3篇流行性腹泻病
  • 3篇流行性腹泻病...
  • 3篇繁殖与呼吸综...
  • 3篇繁殖与呼吸综...
  • 3篇腹泻
  • 3篇腹泻病
  • 3篇腹泻病毒

机构

  • 12篇中国农业科学...
  • 2篇华中农业大学
  • 1篇上海交通大学
  • 1篇中国农业科学...

作者

  • 13篇周艳君
  • 13篇童光志
  • 7篇童武
  • 7篇姜一峰
  • 6篇虞凌雪
  • 4篇于海
  • 4篇朱建平
  • 3篇刘光清
  • 3篇徐彦召
  • 3篇吴玉璐
  • 3篇张善瑞
  • 3篇王亚欣
  • 3篇程群
  • 3篇杨莘
  • 3篇王礞礞
  • 3篇王康
  • 2篇侯军委
  • 2篇李国新
  • 2篇陈焕春
  • 1篇刘欢欢

传媒

  • 7篇中国动物传染...
  • 4篇中国预防兽医...
  • 1篇中国农业科学
  • 1篇中国兽医科学

年份

  • 2篇2014
  • 2篇2013
  • 3篇2012
  • 4篇2011
  • 1篇2010
  • 1篇2009
共 13 条 记 录，以下是 1-10
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排序方式：
猪流行性腹泻病毒RT-PCR鉴别诊断方法的建立被引量：12
2013年
【目的】利用RT-PCR技术建立一种在临床上便于区分猪流行性腹泻病毒(PEDV)自然感染与疫苗免疫毒株的方法。【方法】根据GenBank公布的PEDV ORF3基因序列,在其存在基因缺失区两端的保守区域设计特异性引物,对近两年采集的仔猪腹泻样品进行检测,分析流行毒株的ORF3基因,选择部分阳性样品利用鉴定引物进行RT-PCR扩增,优化其反应体系、Tm值等条件,进行鉴别诊断方法的特异性、敏感性试验,并对大量临床样品进行检测验证。【结果】从新发仔猪腹泻临床样品中克隆获得了11株PEDV的ORF3基因,序列分析显示新分离的9株ORF3基因不存在缺失,属于自然感染野毒,其与疫苗株的核苷酸同源性为95.8%—97.1%。建立的鉴别诊断方法可以特异性扩增PEDV的ORF3基因,其中获得的PEDV自然感染毒株基因片段大小约300 bp,而弱毒疫苗株则为250 bp左右;该鉴别诊断方法与其他猪源病毒无交叉扩增,其敏感性可达到100TCID50/0.1mL,对仔猪腹泻临床样品检测结果显示,PEDV自然感染的阳性率为65.4%。【结论】初步建立了基于PEDV ORF3基因的RT-PCR鉴别诊断方法,该方法可以用于区分自然感染的野毒和弱毒疫苗免疫毒株,为PEDV的疫情诊断和流行病学监测提供了一种特异、快速的检测方法。
吴玉璐程群虞凌雪侯怡轩王康刘光清童光志周艳君
关键词：猪流行性腹泻病毒ORF3基因RT-PCR
表达猪瘟病毒E2蛋白重组猪繁殖与呼吸道综合征病毒的研究被引量：3
2012年
为构建表达猪瘟病毒(CSFV)E2蛋白重组猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV),本研究首先利用高致病性PRRSV弱毒疫苗HuN4-F112株的感染性分子克隆作为平台,构建了一个在nsp2区有缺失的感染性分子克隆,命名为pHuN4-F112-△480-620。以pHuN4-F112-△480-620作为载体,采用突变PCR的方法将CSFV的主要保护性抗原E2基因1 bp～9 99 bp,1 bp～600 bp,1 bp～330 bp及256 bp～330 bp基因片段分别插到nsp2中aa 480～aa 620位氨基酸缺失编码区域。结果显示,插入完整E2基因或较大E2基因片段的重组PRRSV cDNA质粒均未能拯救出病毒,只有插入较小的E2基因片段(256 bp～330 bp)的重组病毒cDNA质粒成功地拯救出了重组病毒rPRRSV-F112-E2(256-330),拯救的病毒能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变,而且生长速度明显高于其亲本病毒,间接荧光检测表明该重组病毒能够表达外源基因。
童武周艳君徐彦召姜一峰王亚欣张善瑞朱建平虞凌雪孙晶陈焕春童光志
关键词：猪繁殖与呼吸道综合征病毒猪瘟病毒感染性分子克隆重组病毒
高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株感染性分子克隆的建立及拯救病毒的鉴定被引量：5
2011年
为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性克隆,本实验根据 PRRSV HuN4 株基因组序列设计并合成 PRRSV 特异性引物,应用 RT-PCR 技术分6段扩增了 PRRS VHuN4 株全基因组 cDNA。将扩增的各个cDNA部分重叠片段分别克隆于 pBlueScriptⅡSK(+)载体中构建了感染性重组质粒 pHuN4。并在病毒 cDNA5'末端引入 sp6 启动子序列便于后期的体外转录获得病毒的转录本,在3'末段 Poly(A)尾引入 NotⅠ酶切位点用于线性化 pHuN4;此外,将 HuN4 基因组第14680位的A沉默突变为G产生一个 MluⅠ酶切位点作为鉴定拯救病毒的分子标记。pHuN4 通过酶切线性化后经体外转录及转染BHK细胞,并在 Marc-145 细胞中救获病毒。结果显示:救获的病毒能够在 Marc145 细胞引起明显的细胞病变;间接免疫荧光检测以及分子标记验证结果表明病毒拯救成功,而且拯救的病毒与亲本强毒生长曲线没有显著差异。利用拯救的第5代克隆病毒株对本动物进行致病性试验,结果显示实验猪在感染后第3d开始出现体温升高、厌食、消瘦等临床表现,发病率达100%,在感染后20d内陆续死亡,表明拯救的病毒保持了与亲本病毒株相一致的致病特征,以上研究证实我们成功的构建并获得 PRRSV 强毒 HuN4 株感染性克隆,为从基因水平上研究 PRRSV 的致病机制提供了技术平台。
张善瑞周艳君朱建平童武姜一峰童光志
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性分子克隆
猴源天然免疫限制性因子SAMHD1单克隆抗体的制备与鉴定被引量：3
2014年
为制备具有广谱反应性的SAMHD1单克隆抗体,通过提取Marc-145细胞的总RNA,采用RTPCR将SAMHD1全长编码基因定向克隆至pCold-TF原核表达载体中,成功构建了重组质粒pColdmSAMHD1。重组质粒转化大肠杆菌Rosseta感受态细胞,经IPTG诱导表达并通过纯化获得了可溶性的重组SAMHD1蛋白。以纯化的重组SAMHD1蛋白为抗原,免疫8周龄BALB/c小鼠,通过间接ELISA和5次杂交瘤细胞亚克隆,筛选出1株针对SAMHD1蛋白的单克隆抗体,遂被命名为M2D9。Western-blot分析显示,M2D9能够与SAMHD1真核表达蛋白以及细胞内源性SAMHD1蛋白发生特异性反应,且具有很好的免疫沉淀效价。交叉反应性鉴定结果显示,M2D9抗体能够与人、鼠源细胞内SAMHD1蛋白发生特异反应。本研究成功获得了具有特异性和广谱反应性的猴源SAMHD1单克隆抗体,可用于ELISA检测、Western-blot分析和免疫沉淀试验,为SAMHD1蛋白功能的深入研究奠定了基础。
杨莘周艳君姜一峰童武郭亦非刘飞童光志
关键词：单克隆抗体
2008～2011年中国部分地区猪圆环病毒2型的分子流行病学调查被引量：34
2012年
为了解2008－2011年中国部分地区猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）分子流行病学变化趋势,本实验室共采集福建省、江西省、广东省、安徽省、浙江省、河南省、河北省、广西壮族自治区、内蒙古自治区、上海市、江苏省和山西省共12个省（市、区）的健康猪群和发病猪群共452份样品,对其进行病原学检测,并通过扩增、克隆和测序共获得31株PCV2 ORF2基因编码序列。结果显示,452份样品中,有354份样品检测为PCV2阳性,感染率高达78.3%。对31株ORF2基因序列的分析和比对结果表明,31株PCV2均为PCV2b基因型,其中有21株归类于PCV1A/1B基因亚群,而10株为PCV1C亚群;对31株PCV2 ORF2编码氨基酸序列比对分析表明PCV2基因亚型具有其特异的氨基酸变异位点,这对于临床上区别PCV2亚型具有一定的指导意义。从基因水平上来说,自2008年以来中国以PCV 1A/1B亚群为主要流行致病株,但值得我们关注的是,PCV 1C亚群毒株从无到有并有逐渐增多的趋势,将来可能在PCV2的流行毒株中占据主要地位。
李玲李国新周艳君童武王礞礞童光志
关键词：猪圆环病毒2型ORF2流行毒株
我国猪群中TTV的鉴定及其分子流行病学分析被引量：48
2009年
为了确定Torque teno virus(TTV)在我国猪群中是否存在及其感染情况,本研究利用套式PCR方法首次检测了来自广东、福建和江西等7个省份的258份血液样品和组织样品。结果表明猪群中TTV1和TTV2感染总阳性率分别为37.6%和82.6%。两者的混合感染率为38.4%。挑选部分阳性样品用套式PCR引物扩增出TTV1和TTV2的部分非编码区(UTR)片段,并将扩增出的部分UTR基因与已报道的TTV1和TTV2病毒UTR序列进行比较分析,同时我们选择了8份阳性样品进行了TTV1和TTV2的全长基因的扩增和克隆。分析结果显示TTV可分为TTV1和TTV2两大分支,其中我们分离获得的TTV1和TTV2之间的UTR核苷酸同源性分别为80.8%～98.5%和94.2%～100%,而与参考株相比同源性分别为82.7%～100%和95.5%～99.1%。本研究首次证实在我国猪群中存在TTV感染,提示我们对猪群感染的TTV是一个不容忽视的新病原。
王礞礞周艳君陈宗艳于海李国新阎丽萍姜一峰侯军委童光志
关键词：TTV
猪圆环病毒2型与猪TTV混合感染的流行病学调查被引量：10
2010年
根据GenBank上发表的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)基因组序列和TTV(Torquetenovirus)1、2型的UTR序列设计合成引物,建立了分别用于检测PCV2和TTV1、TTV2的PCR及巢式PCR方法。应用建立的PCR方法对送检的广东、福建和江西等7个省份258份血液和组织样品进行了PCV2、TTV1和TTV2的检测,确定猪群中PCV2与TTV1和/或TTV2混合感染情况。结果表明,94份样品表现为PCV2和TTV1的混合感染,占样品总数的36.4%;193份样品表现为PCV2和TTV2的混合感染,占74.8%;另外,还有一些样品为三重感染,占34.5%。由此可以看出,猪群中PCV2和/或TTV1和/或TTV2的混合感染很普遍。
王礞礞周艳君侯军委童光志
关键词：猪圆环病毒TTV共感染
猪流行性腹泻病毒N基因的表达及抗原性分析被引量：10
2013年
为深入了解仔猪腹泻的病因,本研究在不同发病猪场采集了115份临床样品,通过RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(PEDV)进行检测,结果显示总阳性率为81.7%。进一步从部分样品中对PEDV的N基因进行克隆和序列分析,结果显示采集的临床样品中各分离株之间的氨基酸同源性高达99%以上,与代表性病毒株CV777的氨基酸同源性为97.4%～98.1%,表明目前流行的PEDV其N基因仍然相对保守的。同时,构建了重组表达载体pGEX-N,经诱导表达显示该重组蛋白呈可溶性表达,重组蛋白大小约为81 ku,western blot分析结果表明该重组蛋白能够被PEDV阳性猪血清特异性识别。将纯化后的重组N蛋白作为包被抗原,对20份已知背景的临床猪血清抗体进行ELISA检测,结果显示有9份血清为抗体阳性,11份血清呈抗体阴性,与应用RT-PCR方法鉴定抗原的结果符合率为85%。本研究表达的重组N蛋白具有良好的抗原性,可以将其作为PEDV血清学诊断的候选抗原。
吴玉璐朱建平杨莘王亚欣徐彦召虞凌雪于海刘光清童光志周艳君
关键词：猪流行性腹泻病毒重组N蛋白抗原性分析
2010年国内部分省份猪场常见病毒性疾病的病原学调查被引量：18
2011年
随着规模化养猪业的发展,传染性疾病越来越多,混合感染或多重感染十分普遍,给疾病的诊断和预防带来很大困难。本文将我们实验室2010年分别采自福建、广西、河南、上海、内蒙、浙江、江苏和山西等地发病猪场的185份病料,通过RT-PCR和PCR方法对其进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)、猪繁殖障碍的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)、猪圆环病毒2(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、细环病毒2(Torque teno virus 2,TTV2)等病毒检测。结果表明在所检的病料中PRRSV、PCV2和TTV2的阳性率比较高,分别为49.2%、62.2%和95.1%。有些地方TTV2的阳性率高达100%;同时,还存在很普遍的PRRSV与PCV2、PRRSV与TTV2、PCV2与TTV2等混合感染,混合感染率分别为27.6%、45.4%、58.4%;以及PRRSV、PCV2与TTV2的三重感染率为24.9%。同时对部分PRRSV阳性病料的PRRSV GP5和nsp2基因分别进行测序,分析测序结果表明病料中的PRRSV的GP5和nsp2序列与PRRSV HuN4株的相应序列的亲缘关系分别在98.2%和96.2%以上,且在nsp2区域都存在30个不连续氨基酸的缺失,说明现在临床中所流行的PRRSV可能仍是与高致病性PRRSV基因型相似的病毒。通过本文可以及时了解当前养猪场的病毒性疾病的流行情况,为猪场病毒性疾病的防控提供依据。
童武周艳君肖少波童光志陈焕春
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒流行病学
高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒SHxx13/2013株的分离与鉴定被引量：1
2014年
2013年初上海某猪场保育猪群中出现高热、呼吸障碍等临床表现,导致大部分发病猪死亡,为了确定此次猪群中爆发疫病的病原,本研究从发病猪群中随机采集了15份血液样品,利用RT-PCR方法对本次疫病病原进行了检测。结果显示,有11份临床样品呈现猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)强阳性,且与高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly pathogenic Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)对照大小相一致。随后从阳性样品中选取SHxx13/2013在Marc-145细胞中进行病毒的分离与鉴定,结果显示SHxx13/2013在细胞接种后第1代即出现明显的细胞效应(cytopathic effect,CPE),其病变特征与高致病性PRRSV强毒HuN4株一致。对SHxx13/2013第5代细胞分离毒进行RT-PCR和IFA等特异性鉴定,结果显示该毒株为PRRSV分离株,其蚀斑形态和生长特性与强毒HuN4株相似。分段克隆该毒株全长基因进行测序和序列分析,结果显示,新分离的流行毒SHxx13/2013株全长基因组为15 319 bp,其Nsp2基因特征与HP-PRRSV一致,在第482位和第534~562位发生两处共30个氨基酸的不连续缺失,且该毒株与高致病性PRRSV代表毒株HuN4亲缘关系较近,全长基因的核苷酸同源性为99.6%。本研究结果表明新分离的SHxx13/2013株属于高致病性PRRSV分离株,据此我们推测今年年初上海某猪场爆发的疫情主要是由HP-PRRSV感染所致。
程群姜一峰虞凌雪王康杨莘李丽薇高飞于海童武童光志周艳君
关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒PCR
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