“十一五”国家科技支撑计划(2006BAD06A18)
- 作品数：10 被引量：68H指数：5
- 相关作者：朱玲郭万柱王琴范学政徐璐更多>>
- 相关机构：四川农业大学中国兽医药品监察所青岛农业大学更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技支撑计划长江学者和创新团队发展计划山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 沙门菌nirB基因启动子区域分子克隆及序列分析
- 2011年
- 为了给构建含沙门菌内源性诱导启动子基因疫苗表达载体奠定物质基础,试验从活化培养的猪霍乱沙门菌C500中提取细菌基因组DNA,运用PCR技术扩增nirB基因启动子区域,回收、纯化,将TA克隆到pUCX-T载体上,对阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果表明:成功扩增出nirB基因启动子区域,长约760 bp;成功构建了其TA克隆重组质粒pUCX-Pn irB;序列分析结果显示Pn irB与其他沙门菌相关序列核苷酸同源性较高,为96%～100%,其中与猪霍乱沙门菌SC-B67核苷酸同源性高达100%;NNPP分析结果显示Pn irB启动子基因区域有3个较强的启动子Promotor序列,具有启动基因表达的基本元件。说明成功获得了猪霍乱沙门菌C500 nirB基因启动子区域基因。
- 王小玉韩国全郭万柱林华张博王利娜任玉鹏
- 关键词：分子克隆
- 猪瘟病毒感染对猪外周血淋巴细胞免疫功能的影响
- 猪瘟病毒(classical swine fever vires,CSFV)属黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)成员。CSFV感染主要导致猪的高度传染性、致死性,给世界养猪业造成巨大的损...
- 周远成王琴范学政徐璐陈蕾汤波刘俊
- 文献传递
- 山东地区猪蓝耳病病原变异、诊断和防治技术
- 2009年
- 本研究拟开展山东省猪场猪繁殖与呼吸综合征PRRS流行病学调查，在一定时间跨度内完成一定数量PRRSV的分离，分析病毒遗传变异的分子机制。建立用于蓝耳病检测的核酸探针、免疫荧光、ELISA方法，应用DNA重组技术构建PRRSV传染性cDNA克隆和系列核酸疫苗，并优化生产工艺，研制PRRSV油乳剂灭活疫苗。在对PRRS系统研究的基础上，对已建立的诊断技术和研制的疫苗进行组装和集成，形成一整套对蓝耳病系统防治行之有效的技术体系，为我国养猪业的健康发展提供有力保障。
- 吴家强李俊任慧英徐龙涛温建新周顺朱向福张乐萃宋春阳禚宝山张秀美王金宝
- 人工接种猪瘟病毒对猪外周血白细胞的影响被引量：2
- 2009年
- 为研究CSFV强毒感染对猪外周血白细胞的影响,本研究用猪瘟病毒石门株（CSFV SM）感染60日龄仔猪后,分析外周血中CSFV核酸载量动态变化、白细胞亚群变化和白细胞SLAⅠ和SLAⅡDR分子的表达情况。实验结果显示：实验仔猪经CSFV感染后48小时体温升高并可以在血液中检测到CSFV核酸,核酸载量持续升高,在感染后6日（DPI）达到最大值,为2 DPI时核酸载量的104.84±0.98倍;WBC、LYM、PLT数量持续降低,WBC在1DPI和2DPI分别降至65.87%和50.00%,LYM在1~3DPI分别降至70.68%、47.88%和23.29%,PLT数量持续降低,6DPI时仅为初始值的34.59%;NK、γδT、Tc、Th、CD3＋CD4＋CD8＋和CD3-CD4-CD8-淋巴细胞在感染后均不同程度的减少,其中NK细胞在1DPI时减少78.49%,而后变化与1DPI比较差异不显著,γδT、Tc、CD3-CD4-CD8-、CD3＋CD4＋CD8＋在3DPI时分别降至41.74%、43.83%、15.87%和32.96%,Th细胞在感染后持续下降,在6DPI时减少至42.95%;感染后淋巴细胞中表达SLAⅠ分子的细胞数量显著下降,其中CD3-SLAⅠ＋细胞含量在1DPI和2DPI分别降至23.07%和15.38%,CD3＋SLAⅠ＋细胞在2DPI时降至39.19%,表达SLAⅠ分子的粒细胞数量持续升高,在3DPI时由1DPI的92.20%升高至98.30%;粒细胞中SLAⅡ＋细胞数量在3DPI时达到最大值,52.76%的粒细胞表达SALⅡ分子,在4DPI时下降至12.54%,在5DPI时仅存4.06%。本研究结果揭示CSFVSM株感染能够通过抑制宿主的早期非特异抗病毒免疫而逃避宿主免疫监视,从而导致免疫抑制发生。
- 周远成王琴范学政徐璐徐志文郭万柱刘俊陈蕾汤波
- 关键词：猪瘟病毒外周血白细胞
- 四川省规模化猪场猪瘟的流行病学调查被引量：3
- 2010年
- 为了研究四川省的猪瘟流行病学情况,随机采集13个规模化猪场经产母猪、后备母猪、公猪以及仔猪的扁桃体和血样共862份进行猪瘟抗原和抗体的检测。结果表明：13个猪场扁桃体猪瘟抗原阳性率为1.78%～14.50%,平均阳性率为6.62%;经ELISA检测,猪瘟抗体平均阳性率为68.10%,阳性率最高为86.70%,最低为20.00%。说明各场免疫水平相差较大,平均阳性率低于70%的国家标准,猪瘟带毒现象在四川省省内规模化猪场普遍存在。
- 华丽朱玲郭万柱徐凯王小玉
- 关键词：猪瘟流行病学
- 猪瘟病毒载量在猪体内各器官动态分布规律的研究
- 本研究采用荧光PCR(FQ-PCR)方法对猪瘟病毒感染试验用猪进行了体内外的动态分布规律研究。参考GenBank中34条CSFV全基因组序列及多条BVDV、BDV全基因组序列,设计了一套CSFV特异的引物和探针;同时参考...
- 刘俊王琴徐璐范学政周远诚
- 文献传递
- 猪瘟病毒急性感染对猪外周血淋巴细胞的影响
- 为研究CSFV感染对猪外周血淋巴细胞的影响,本研究运用荧光定量PCR技术、血常规技术和流式细胞技术分析60日龄断奶猪感染CSFV SM株后外周血中CSFV核酸含量、外周血白细胞、T细胞亚群的变化,淋巴细胞SLAⅠ和SLA...
- 周远成王琴范学政徐璐徐志文郭万柱
- 关键词：CSFV外周血淋巴细胞荧光定量PCR流式细胞分析技术
- 文献传递
- 不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫的免疫效力及疫苗残留检测
- 用1200RID、6000 RID和24 000 RID三种不同剂量的猪瘟活疫苗单次免疫9头30日龄的断奶仔猪,检测试验用猪抗体的消长和疫苗毒核酸在猪体内的存在时间,并用6头猪进行攻毒保护试验。结果表明:不同免疫剂量的试...
- 熊丁杰范学政徐璐王琴徐志文郭万柱刘俊陈蕾汤波
- 关键词：免疫剂量抗体水平
- 文献传递
- 用RT-PCR方法检测猪瘟细胞苗中污染牛病毒性腹泻病毒被引量：34
- 2010年
- 参考GenBank中牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和猪瘟兔化弱毒病毒（HCLV）序列，设计和建立了一种PCR检测方法，通过试验证明，所建方法能够对HCLV和BVDV进行鉴别诊断；用此方法对23个批次的猪瘟细胞苗进行检测，发现有5批疫苗污染BVDV，均为BVDVI型，污染率为21．74％。测定序列与BVDVOregonC24V株（AF091605）的核苷酸相似性为83．2％～83．5％，与NADL株（M31182）的核苷酸相似性为86．4％～86．7％。
- 范学政宁宜宝王琴徐璐沈青春
- 关键词：BVDVCSFVRT-PCR方法
- 猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救被引量：6
- 2009年
- 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题组成功构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中聚集大量的病毒抗原;经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17～20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性及致病机理研究打下了基础。
- 李俊时建立于周徐绍建丁鹏程凯慧王金宝
- 关键词：猪圆环病毒2型感染性克隆
