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广东省自然科学基金(7001536)
作品数:
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相关作者:
段何江
翁建平
顾慧敏
沈云峰
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相关机构:
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作者
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严朝霞
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2011
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小型猪骨髓间充质干细胞超顺磁氧化铁、增强型绿色荧光蛋白双标记及体外磁共振成像示踪的研究
2011年
目的探讨超顺磁氧化铁(SPIO)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)体外双标记、磁共振成像(MRI)示踪1型糖尿病(T1DM)小型猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)的可行性和标记方法。方法采集T1DM小型猪骨髓,密度梯度离心和贴壁培养法分离BMSCs。选用携带EGFP慢病毒(LV)颗粒转染BMSCs。选用SPIO和左旋多聚赖氨酸(PLL)复合物标记LV—EGFP转染的BMSCs。对SPIO标记细胞进行普鲁士蓝染色、透射电镜观察和体外MRI。结果LV-EGFP与BMSCs转染复数(MOI)为30:1转染后96h荧光表达最强,阳性转染率43.2%。Fe^3+标记浓度为25mg/LBMSCs阳性标记率93.1%。透射电镜检测发现,SPIO粒子密集于BMSCs细胞质,次级溶酶体内多见。MRI显示,Fe^3+标记浓度为25mg/L、1×10^4/ml细胞浓度标记后3周和6周在快速自旋回波序列(TSE)T1WI、TSET,WI及快速小角度激发成像(FLASH)T2WI信号强度变化率(ASI)依次为12%、41%、63%和7%、28%、46%,均为后二者大于前者(分别P〈0.01和P〈0.05),提示SPIO该标记浓度和细胞密度标记后3周和6周在T2WI及T2WI呈现较明显的信号变化。结论采用体外EGFP和SPIO双重标记的方法,结合MRI和细胞化学染色法可以稳定地对T1DM小型猪BMSCs进行体外示踪。
唐宽晓
沈云峰
杨旭斌
顾慧敏
段何江
严朝霞
翁建平
关键词:
间质干细胞
小型猪
细胞示踪
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