高等学校科技创新工程重大项目(7060)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：汪铭书程安春钟小容张瑶陈斌更多>>
- 相关机构：动物疫病与人类健康四川省重点实验室四川农业大学四川省兽医防疫检疫总站更多>>
- 发文基金：教育部“新世纪优秀人才支持计划”高等学校科技创新工程重大项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭疫里默氏杆菌Ⅰ型磷酸二酯酶基因的发现及其分子特征分析
- 2008年
- 以兔抗鸭疫里默氏杆菌(RA)阳性血清对 RA 血清1型 CH-1株表达型 DNA 文库中已通过蓝白斑筛选的一个阳性克隆进行了原位杂交筛选。经过5次免疫筛选后,阳性斑经过体内删除,噬菌粒经酶切分析和序列测定,得到一段4434bp 的插入 DNA 片段。运用 NCBI 的 BLASTN、BLASTP、ORF Finder、Conserved Domains、EMBL 的 FASTA 等程序对该片段中的一个命名为 ORF1689的开放阅读框架进行了全面的生物信息学分析。结果显示ORF1689起始密码子上游存在核糖体结合位点,完整 ORF 含1689bp,编码562个氨基酸,其编码蛋白的理论分子量为59.5kD,等电点为5.82。ORF1689具有 phosphodiest 蛋白家族的保守区域,与丙杆菌属的 Caulobacter sp.K31、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.)、Sphin-gopyxis alaskensis 和 Novosphingobium aromaticivorans 的Ⅰ型磷酸二酯酶基因的氨基酸序列同源性分别为49.283%、38.716%、38.693%和38.313%,表明该基因是一种新的Ⅰ型磷酸二酯酶基因。该研究结果对阐明Ⅰ型磷酸二酯酶的生物学功能和 RA 的生理特性与致病机理提供了理论基础和实验数据。
- 陈虹程安春汪铭书朱德康
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌分子特征分析
- 鸭IFN-α成熟肽基因的原核表达、复性及其抗病毒活性研究被引量：4
- 2008年
- 为获得鸭α-干扰素(DuIFN-α)并研究其生物学功能,将DuIFN-α成熟蛋白基因与原核表达载体pET32a+连接后转化到BL21(DE3)获得工程菌BL2l(DE3)/pET32a+-DuIFN-α,对其表达产物的纯化和复性关键技术及其抗水疱性口炎病毒(VSV)、鸭瘟强毒(DPV)活性进行研究。结果表明:BL2l(DE3)/pET32a+-DuIFN-α经0.4mmol/L IPTG诱导获得高效表达,表达的重组蛋白相对分子质量约37 ku,以包涵体形式存在;重组蛋白经镍金属螯合介质(Ni-MIAC)进行纯化和复性后获得理想效果,其抗VSV活性的比活力达到12 800 U/mg;利用定量PCR检测到15 U/mL的重组DuIFN-α对鸭瘟强毒表现出抑制作用,为重组DuIFN-α的临床应用提供试验数据。
- 龚永强程安春汪铭书杨梅张瑶陈斌钟小容
- 关键词：成熟肽基因原核表达色谱复性抗病毒活性
