国家高技术研究发展计划(N02001AA215161)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
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- siRNA干扰胰岛新生相关蛋白表达对胰岛细胞株INS-1细胞增殖的抑制作用
- 2010年
- 目的探讨靶向胰岛新生相关蛋白(INGAP)基因RNAi对胰岛细胞增殖的抑制效应。方法设计合成siRNA,通过脂质体转入胰岛细胞株INS-1中,研究其对靶基因的抑制效应,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞仪、Western-blot法分别检测转染后的INS-1细胞中INGAP mRNA和蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法来检测细胞的增殖。结果 siRNA6序列对细胞增殖有明显的抑制效应,INGAP mRNA及蛋白表达明显降低,INS-1细胞增殖受到抑制(P<0.05)。结论干扰INGAP基因的表达能有效抑制胰岛细胞的增殖,INGAP有可能成为治疗β细胞严重减少或损害的重要新靶点。
- 沙建平薛耀明陈炫罗祥蓉关美萍曾展军何飞英王玲毛睿睿
- 关键词：RNAI胰岛新生相关蛋白
- 重组葡激酶对重症急性胰腺炎大鼠胰腺组织缺血的影响被引量：3
- 2007年
- 目的观察大鼠重症急性胰腺炎（SAP）时血中内皮素-1（ET-1）、血管性假血友病因子（vWF）、6-酮-前列腺素-F1α（6-keto-PGF1α）、血栓素B2（TXB2）、血小板最大聚集率（PAGm）水平及胰腺组织血流量的变化，评价重组葡激酶（r—Sak）对其的干预作用。方法81只SD大鼠被随机分为假手术组、SAP模型组和r—Sak治疗组，每组27只。采用质量分数为5％的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立SAP模型。于制模后6、12和18h检测下列指标：用组织血流仪检测胰腺组织的血流量；用放射免疫法检测血中ET-1、TXB2和6-keto-PGF1α含量；用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定血中vWF含量；用全自动血小板聚集仪检测胶原和花生四烯酸诱导的PAGm。结果术后6、12和18h SAP模型组大鼠胰腺组织血流量呈逐渐下降趋势，各时间点胰腺组织血流量均较假手术组显著下降（P均〈0．05），且术后各时间点PAGm及血中ET-1、vWF、TXB2含量均较假手术组显著升高，6-keto-PGF1α显著降低（P均〈0.05）；与SAP模型组比较，r—Sak治疗组术后各时间点PAGm、ET-1、vWF、TXB2含量均显著降低，6-keto-PGF1α则显著升高（P均〈0.05）。结论r—Sak可明显改善SAP大鼠胰腺的微循环，增加胰腺组织的血流量，对SAP大鼠具有积极的治疗作用。
- 沙建平薛耀明陈炫祝彼得张新胜陈卫银冯本华赵艳
- 关键词：重组葡激酶内皮素-1血管性假血友病因子血栓素B2
- 重组葡激酶对急性坏死性胰腺炎大鼠心肌细胞凋亡调节基因表达的影响
- 2007年
- 目的观察SAP心肌功能损害时心肌细胞凋亡基因的表达及重组葡激酶对其的干预作用。方法63只SD大鼠随机分为假手术组、ANP6h、12h、18h组和葡激酶干预6h、12h、18h组（干预组），每组9只。采用5％的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射法建立ANP模型。观察心肌的病理变化，免疫组化法检测心肌Bel-2、Bax及N卜KB的表达。结果ANP组心肌片状坏死，NF-κB表达增加，为35．0～59．5；干预组心肌的病理变化减轻，NF-κB表达为10．5～17．0，较ANP组明显减少（P〈0．05）。ANP12h、18h组Bcl-2表达较假手术组显著减少（0．12～0．08υs0．31，P〈0．05），而Bax表达显著增加（1．48～2．83υs0．68）；干预12h、18h组Bcl-2表达较ANP组明显增加，达0．34～0．36（P〈O．05），而Bax表达明显减少，为1．06～1．10（P〈0．05）。结论ANP大鼠心肌NF-κB和Bax表达增加，Bcl-2表达减少；葡激酶干预后NF-κB及Bax的表达被抑制，Bcl-2的表达上调。
- 沙建平薛耀明祝彼得蒋俊明张新胜陈卫银赵艳胡蓉冯本华
- 关键词：急性坏死性葡激酶心脏损伤
- 急性坏死性胰腺炎大鼠心肌核因子-κB激活及重组葡激酶的干预作用
- 2006年
- 目的研究重症急性胰腺炎(SAP)心肌功能损害时心肌核因子-κB(NF-κB)的活化及葡激酶的干预作用。方法63只SD大鼠随机分为假手术组(n=9)、ANP组(n=27)、葡激酶干预组(n= 27),ANP模型采用5％的牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射方法建立。干预自造模前2 d腹腔注射葡激酶1．5 mg／kg体重,一天2次,共4次。ELISA法测定制模后6 h、12 h、24 h各时点血TNF-α、IL-6含量;RT- PCR检测心肌NF-κB mRNA的表达;免疫组化法检测心肌NF-κB蛋白的表达,常规观察胰腺及心肌组织的病理变化。结果ANP组术后6 h大鼠心肌NF-κB mRNA及NF-κB蛋白表达异常增高,TNF-α、IL-6呈进行性升高,干预组胰腺及心肌组织的病理变化减轻。心肌NF-κB mRNA及蛋白表达下词,血TNF-α、IL-6明显下降,与ANP组比较,差异均显著(P<0．05)。结论ANP大鼠的心肌损伤可能与循环中TNF-α、IL-6水平升高导致的心肌NF-κB活化有关。葡激酶对SAP并发的心肌损伤具有防治作用。
- 沙建平邹全明张新胜祝彼得陈卫银陈永峰赵艳胡蓉冯本华
- 关键词：葡激酶
- 人胰岛新生相关蛋白基因的克隆及在毕赤酵母中的表达
- 2008年
- 目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人胰岛新生相关蛋白(rhINGAP),用于INGAP的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增INGAP基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αINGAP重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒INGAP/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因INGAP,甲醇诱导rhINGAP的表达,SDS-PAGE和Westernblotting鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒INGAP/pPIC9K,筛选得到3个阳性转化子,表达产物具有良好的抗原活性。结论实现了rhINGAP在毕赤酵母中的高效分泌性表达。
- 沙建平薛耀明陈炫曾展军魏民罗祥蓉何飞英王玲卓凤婷
- 关键词：胰岛新生相关蛋白毕赤酵母分泌表达
