广东省自然科学基金(04300218)
- 作品数：14 被引量：47H指数：5
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- 接种Aβ_(42)全肽疫苗恒河猴的特异性体液免疫应答被引量：8
- 2005年
- 目的: 观察恒河猴接种Aβ42肽疫苗后的特异性抗体的产生。方法: 将 5只雄性恒河猴分别在 0、2、6、10、14、18、22wk肌内注射Aβ42肽疫苗; 用ELISA法检测恒河猴血清抗Aβ42抗体水平及IgG亚类; 用Westernblot检测血清抗Aβ42抗体的特异性; 免疫组化染色法观察抗血清对Tg2576转基因小鼠脑组织中Aβ斑的识别。结果: 疫苗接种后第 8周, 恒河猴血清中出现明显的抗Aβ42抗体, 抗体水平随着接种次数的增加而升高, 第 24周达 1∶4 320, 以后抗体水平开始下降。产生的抗Aβ42抗体以IgG1和IgG2为主 (IgG2 /IgG1 >1)。血清抗Aβ42抗体具有高度特异性, 可识别Tg2576转基因小鼠脑组织中的Aβ斑。结论: Aβ42肽疫苗可有效地诱导恒河猴产生特异性体液免疫应答。
- 李少兵汪华侨林贤徐杰姚志彬
- 关键词：阿尔茨海默病Β淀粉样肽体液免疫应答恒河猴
- 阿尔茨海默病的免疫治疗被引量：1
- 2006年
- 阿尔茨海默病(AlzheimerIsdisease,AD)是一种中枢神经系统退行性疾病,不仅导致患者的认知、行为、生活能力的全面障碍,严重影响生活质量,也为家庭和社会带来沉重的负担。迄今为止,AD一直缺乏有效的治疗方法。1999年出现的免疫治疗为AD病人带来了希望,本文综述了AD免疫治疗的方法,机制和不同阶段的认识,展望了免疫治疗的进一步发展。
- 吕晓汪华侨姚志彬
- 关键词：阿尔茨海默病Β淀粉样蛋白疫苗免疫治疗
- Aβ_(42)重组多价DNA疫苗的构建及诱导Aβ抗体的产生被引量：7
- 2005年
- 目的:构建β-淀粉样蛋白(Aβ42)的多价重组DNA疫苗,确定是否诱导较高滴度Aβ抗体的产生.方法:PCR法从Tg2576转基因鼠基因组DNA中扩增人Aβ42基因片段;在Aβ42基因的5′端引物延伸连接IgGк轻链信号肽序列;利用GSGGSGlinker基因串连两段Aβ42基因片段;将产物克隆入pcDNA3.1表达载体,分别构建pcDNA3.1Aβ42,一价分泌型pcDNA3.1-sAβ42,二价分泌型pcDNA3.1-s2×Aβ42载体;转染COS-7细胞,免疫印迹检测Aβ42的表达;im接种BALB/c鼠,ELISA法测定抗体效价;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗体与Tg2576鼠脑切片中的老年斑的结合.结果:测序证实所构建的pcDNA3.1-Aβ42,pcDNA3.1s-Aβ42,pcDNA3.1-s2×Aβ42载体插入序列正确;WesternBlotting证实在COS-7细胞中表达相应的蛋白.经6轮,22wk加强免疫后,pcDNA3.1-Aβ42疫苗不能产生Aβ抗体、pcDNA3.1sA-β42接种后产生较低的Aβ抗体(<1∶1000),pcDNA3.12×Aβ42第1次加强免疫后即产生抗体,抗体滴度随接种次数增多而升高,22wk时抗体平均滴度达1∶5000以上,可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑结合,并能被Aβ42肽抗原特异性中和.结论:二价分泌型pcDNA3.1-s2×Aβ42疫苗,可在动物体内产生高效价的特异Aβ抗体.
- 张革邹俊涛汪华侨李国营姚志彬
- 关键词：淀粉样Β蛋白疫苗DNA
- 以β-淀粉样蛋白为靶的单价及二价真核表达载体的构建和表达被引量：2
- 2006年
- 目的构建以β-淀粉样蛋白为靶单价及二价真核表达载体pcDNA3.1-Aβ1-42、pcDNA3.1-Aβ42×2,并在真核细胞中表达目的蛋白。方法PCR法扩增编码β-淀粉样蛋白的目的基因,利用基因克隆技术构建单价及二价真核表达载体;应用酶切及测序鉴定真核表达载体构建成功后,用Westernblot和细胞免疫组化染色检测其在真核细胞中的表达。结果相应的双酶酶切能够获得插入的目的基因片段(分别为137bp和269bp),测序未发现突变;Westernblot结果可见两条约为4ku和8ku的条带,细胞免疫组化染色可见阳性细胞。结论单价及二价真核表达载体构建成功;真核表达载体能在真核细胞中表达出目的蛋白。
- 王烈峰汪华侨张革邹俊涛谢瑶袁群芳姚志彬
- 关键词：老年性痴呆Β-淀粉样蛋白重组质粒真核表达载体
- Fmoc固相直接法合成Aβ_(1-15)肽疫苗及其免疫活性被引量：5
- 2006年
- 【目的】探讨实验室合成Aβ1-15肽疫苗的方法,并对其进行鉴定。【方法】选取Aβ42主要包含B细胞抗原决定簇的片段Aβ1-15,采用8分支多重抗原肽系统,以Fmoc固相直接法合成MAPAβ1-15;用MAPAβ1-15疫苗免疫接种C57BL/6小鼠,ELISA检测血清特异性抗Aβ抗体。【结果】用Fmoc法直接合成方法成功制备MAPAβ1-15疫苗,质谱检测其主要离子峰的相对分子质量为15458,与理论相对分子质量15451十分接近,但还有其它不同分子质量的离子峰存在。以合成的MAPAβ1-15免疫C57BL/6小鼠后,可产生高滴度的特异性抗Aβ42抗体,第3次接种后抗体平均滴度为1:467±196,第5次免疫接种后,平均滴度为1∶4367±1120。对照组的血清抗体检测基本无明显变化。【结论】Fmoc固相直接法可成功合成出MAPAβ1-15,合成出的MAPAβ1-15具有很好免疫活性。
- 杨学森汪华侨袁群芳谢瑶姚志彬叶小舟吴继明邹爱国
- 关键词：阿尔茨海默病
- 淀粉样β蛋白42及其亚单位疫苗预防接种对APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的保护作用(英文)被引量：9
- 2005年
- 背景:研究表明,淀粉样β蛋白42疫苗接种可以诱导阿尔茨海默病转基因小鼠产生特异性抗淀粉样β蛋白42抗体,清除其脑内的淀粉样β蛋白沉积,改善其学习记忆能力,在对阿尔茨海默病的防治中具有良好的应用前景。目的:研究淀粉样β蛋白42及其亚单位肽疫苗预防接种对APPSWE转基因小鼠学习记忆能力的影响。设计:以动物为研究对象,完全随机分组实验。单位:一所大学医学院人体解剖学教研室脑研究室。材料:实验于2003-04/2004-02在中山大学实验动物中心和人体解剖学教研室脑研究室进行。5月龄APPSWE转基因小鼠32只,购自美国Taconiccompany,在本室繁育成功。实验随机分成对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组,每组8只。干预:淀粉样β蛋白42及其亚单位疫苗配伍MF59佐剂,基础接种采用皮下注射,加强接种采用鼻黏膜免疫,共接种8个月。疫苗接种前用Y迷宫作行为学测试,接种后用Morris水迷宫作行为学测试。主要观察指标:空间学习记忆能力,平均逃避潜伏期,穿过平台次数,第一象限游泳距离百分率,20%边缘区游泳距离百分率。结果:疫苗接种前对照组、淀粉样β蛋白42组、淀粉样β蛋白1-15组和淀粉样β蛋白36-42组APPSWE转基因小鼠Y迷宫作行为学测试10次中正确反应的次数分别为7.50±0.81,7.06±0.
- 胡金家李国营汪华侨李少兵袁群芳谢瑶姚志彬
- 关键词：淀粉样Β蛋白疫苗免疫性小鼠转基因
- 阿尔茨海默病患者血清中抗淀粉样蛋白抗体的免疫耐受被引量：2
- 2007年
- 目的:研究阿尔茨海默病(AD)血清中抗Aβ抗体与淀粉样蛋白结合的特性。方法:以AD患者和健康老人的血清作一抗,①用组织淀粉样斑块免疫反应(TAPIR)观察与Tg2576鼠脑内老年斑结合能力;②Western blot检测与Aβ42-GST融合蛋白的结合能力;③将Aβ42与PC12细胞培养,加入健康老人和AD患者的血清后,MTT法观察PC12细胞存活率。结果:AD患者的血清中抗Aβ抗体与成熟老年斑和Aβ42-GST融合蛋白的结合能力较弱;加入AD血清后,PC12细胞的A值较健康老人血清相比下降明显(P<0.01)。结论:AD血清中抗Aβ抗体对淀粉样蛋白可能存在着免疫耐受。
- 杨志勇汪华侨徐杰谢瑶袁群芳姚志彬
- 关键词：阿尔茨海默病免疫耐受性
- β淀粉样蛋白亚单位疫苗免疫反应的量效关系
- 2006年
- 目的探讨Aβ亚单位疫苗诱发体液免疫反应的量效关系和时程。方法采用C57BL小鼠,依据滴入Aβ15的量将其分为50、25、12.5μg3个组,每周1次经鼻粘膜滴入Aβ15亚单位疫苗,观察1年之中鼠血清中抗Aβ抗体水平的变化;取脾细胞培养,加入不同浓度的Aβ15,用MTT法观察脾细胞增殖情况。结果3组小鼠的外周血内均有抗Aβ抗体产生。25μg组和12.5μg组产生抗体较50μg组早,3组峰浓度抗体水平分别为1∶6720、1∶6222和1∶3565。脾细胞增殖实验表明0.5μg和5μg的Aβ15具有较强的刺激脾细胞增殖的作用,而50μg的Aβ15对脾细胞增殖的刺激作用反而下降(P=0.042;P=0.021)。结论Aβ15亚单位疫苗诱导体液免疫反应的能力因接种的剂量不同而异。高浓度的Aβ15可以引起免疫耐受,使抗Aβ抗体产生减少。
- 杨志勇汪华侨谢瑶袁群芳姚志彬
- 关键词：阿尔采末病疫苗
- Aβ_(1-15)多价DNA疫苗的构建及其对体液免疫的效果被引量：6
- 2005年
- 【目的】构建Aβ1-15多价DNA疫苗,研究其诱导体液免疫的效果。【方法】基因合成和PCR技术扩增以多个甘氨酸连接的Aβ1-15二价基因片段;在N端引物延伸加上IgGκ轻链信号肽序列;GSGGSGlinker再串连两段Aβ1-15二价基因片段,克隆入pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-s4×Aβ15真核表达质粒;质粒转染COS-7细胞,Westernblot检测4×Aβ15的表达;质粒肌肉注射接种BALB/c鼠,共6次,18周加强免疫,ELISA法检测抗体效价以及抗体分型;免疫组织化学和Aβ42肽抗原的中和实验检测抗血清与转基因鼠Tg2576脑切片中老年斑的特异结合。【结果】测序证实所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15载体序列正确,在COS-7细胞中表达分子质量约8ku的分泌型4×Aβ15蛋白。pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗于第2次加强免疫后产生Aβ抗体,随加强免疫次数增多,抗体滴度增加,在19周,抗体平均滴度为1︰6400,抗体以IgG1型为主,且可以与转基因鼠Tg2576脑切片中的老年斑免疫结合并被Aβ42肽抗原的中和。【结论】所构建的pcDNA3.1-s4×Aβ15疫苗可在小鼠体内产生高效价的Aβ抗体,为下一步免疫老年性痴呆转基因动物的研究提供条件。
- 张革汪华侨邹俊涛李国营袁群芳林贤姚志彬张革
- 关键词：多价DNA疫苗体液免疫COS-7细胞BALB/C鼠LINKERBLOT检测
- 阿尔茨海默病人外周血中抗淀粉样蛋白抗体的特性被引量：3
- 2005年
- 目的比较AD病人和健康老年人外周血中的抗Aβ抗体特性。方法随机选择AD患者45例和健康老年人51例,①用间接ELISA法测定血清中的抗Aβ抗体滴度,②免疫组织化学ABC法观察AD病人和健康老人血清中的抗Aβ抗体与Tg2576鼠脑内老年斑的结合情况;③不同抗体水平的AD病人和健康老人的血清分别与PC12细胞培养,用MTT法检测PC12细胞的存活率。结果①AD病人和健康老人血清中的抗Aβ抗体分别为(119.78±84.50)μg/ml和(200.44±216.78)μg/ml,差异有显著性意义(P<0.05);②免疫组化发现用AD病人血清作一抗,抗Aβ抗体不能很好地显示已经形成的老年斑;③虽然AD病人血清中抗Aβ抗体较高,对PC12细胞的保护作用反而下降,且与Aβ42的剂量无相关性;而健康老人的血清仍能表现出较强的PC12细胞保护作用。结论AD病人血清中抗Aβ抗体滴度下降,与老年斑结合能力和对细胞的保护能力也下降。
- 杨志勇汪华侨徐杰谢瑶黄绍宽袁群芳成林平姚志彬
- 关键词：阿尔茨海默病外周血老年斑
