吉林省科技厅科研基金(20060416)
- 作品数：2 被引量：9H指数：2
- 相关作者：张永胜胡小平王丽颖吴柒柱陈宇杰更多>>
- 相关机构：吉林大学内蒙古民族大学更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组小鼠IFN-β原核表达载体的构建及包涵体溶解条件的筛选被引量：5
- 2013年
- 目的:通过重组小鼠干扰素β(IFN-β)原核表达载体的构建及对包涵体溶解条件的筛选,建立IFN-β原核表达模型,为筛选适合的包涵体溶解条件提供实验依据。方法:小鼠新鲜肝组织中提取DNA,传统方法构建小鼠IFN-β原核表达载体并命名为IFN-β′。SDS-PAGE检测以传统方法、pH环境、溶解液成分、干菌与溶解液比例、溶解温度和溶解时间的改变对包涵体溶解效果的影响。结果:IFN-β′成熟蛋白鉴定结果与预测结果吻合,诱导表达正常。改变pH值、在溶解液中加入DTT对包涵体溶解效果无影响,包涵体经洗涤液洗涤后亦不能被溶解液所溶解,温度对包涵体溶解几乎无影响,溶解液的比例由1g菌∶5mL溶解液增加为1g菌∶20mL溶解液时能溶解部分IFN-β′蛋白包涵体。结论:成功构建重组小鼠IFN-β原核表达载体,其蛋白以包涵体形式存在,且不易被溶解,在筛选的包涵体溶解条件中仅溶解液比例为影响包涵体蛋白溶解条件。
- 苏雅拉图张永胜陈宇杰胡小平王丽颖万敏吴柒柱
- 关键词：干扰素Β原核表达包涵体
- 一种重组口蹄疫疫苗的原核表达、纯化及其活性检测被引量：4
- 2009年
- 目的:利用原核表达系统诱导表达一种可以作为口蹄疫疫苗的重组蛋白J11-G,并对这种蛋白进行纯化以及活性检测。方法:对已经构建的表达载体PET28a-J11-G进行酶切鉴定,将鉴定后的重组载体PET28a-J11-G转化入大肠杆菌BL21,在BL21细菌细胞中诱导表达目的蛋白,用改良的镍亲和层析法纯化目的蛋白,以ELISA检测纯化所得蛋白的活性。结果:长期冻存的重组载体PET28a-J11-G结构完整,其在大肠杆菌BL21中经1mmol/LIPTG诱导后表达出相对分子质量(Mr)约为47000的目的蛋白,经纯化后获得了产率和纯度均很高的重组蛋白J11-G,ELISA检测证明该蛋白活性良好。结论:成功地对重组蛋白J11-G进行了诱导表达,改良法有利于蛋白产率和纯度的提高,纯化蛋白具有较好的免疫活性。重组蛋白J11-G将可能成为一种抗口蹄疫疫苗。
- 董博翰王华胡小平房明丽张永胜张培因王丽颖
- 关键词：口蹄疫疫苗重组蛋白纯化活性检测
