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无POU域八聚体结合蛋白基因的克隆及其在Hepa1-6细胞内的表达: 2010年; 目的构建小鼠无POU域八聚体结合蛋白(non-POU-domain-containing,octamer binding protein,NonO)真核表达载体并在小鼠Hepa 1-6肝癌细胞内表达,观察NonO胞内表达、定位及脂多糖(LPS)对其定位的影响。方法提取小鼠肝组织总RNA,RT-PCR扩增小鼠NonO基因的蛋白编码序列。采用基因重组技术将其亚克隆至pcDNA3-HA真核表达载体中,将该载体瞬时转染Hepa1-6细胞,通过细胞免疫荧光方法观察NonO的胞内表达及LPS对其定位的影响。结果酶切和DNA测序证明所构建质粒正确;细胞免疫荧光可见NonO在Hepa 1-6细胞内表达、分布于细胞核,LPS刺激后NonO分布无明显变化。结论成功构建NonO真核表达载体,为研究NonO在基因表达调控中作用及其生物功能提供了重要载体。进一步证实NonO为定位于细胞核的核蛋白。; 张秀娟王娟邓鹏姜勇; 关键词：蛋白表达蛋白定位

细菌脂多糖识别系统被引量：15: 2007年; 细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)可激活单核/巨噬细胞、内皮细胞合成和释放多种细胞因子,导致全身性炎症反应.LPS识别及跨膜信号转导是引起细胞效应的关键.在过去的几年中,有关LPS结合蛋白家族和受体系统及其作用机制的研究突飞猛进,大量研究表明LPS识别涉及复杂的蛋白质间相互作用.在此对LPS识别系统成员及其功能的最新研究进展进行综述,并详细介绍新近提出的"LPS受体激活簇"理论.; 丁宁姜勇; 关键词：脂多糖脂多糖受体脓毒症蛋白质-蛋白质相互作用

p38丝裂原活化蛋白激酶基因敲除对小鼠胚胎成纤维细胞增殖的影响: 2008年; 目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）基因敲除对小鼠胚胎成纤维细胞增殖的影响。方法用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测小鼠胚胎成纤维细胞中p38制^＋/＋和p380^-/-的表达；利用噻唑蓝（MTT）比色法绘制p38^＋/＋和p38^-/-细胞的生长曲线，用流式细胞仪检测细胞周期各时相所占百分比。结果绘制的生长曲线表明，p38^-/-细胞的生长速率明显下降，增殖受到抑制，细胞倍增时间延长，培养96h时，p380^-/-细胞数量较p38^＋/＋减少了15．5％，说明p38基因敲除明显抑制了G2／M的进程。流式细胞仪检测结果显示，p3^＋/＋。细胞中G0／G1期细胞占34．47％，G2／M期占10．81％，S期占54．72％；p380^-/-细胞中G0／G1期占48．49％，G2／M期占4．06％，S期占47．44％。与p38^＋/＋细胞相比，G1期的p380^-/-细胞增加了40．7％，S期则减少了13．3％，说明p38基因敲除抑制了G1／S的进程。结论p38基因敲除能够阻滞细胞周期进展，减慢细胞增殖速度。; 龚小卫魏洁李煜生程蔚蔚邓鹏姜勇; 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶基因敲除细胞增殖

带有负电荷的Hela细胞穿透肽内化机制及生物学功能的初步研究: 目的:细胞穿透肽是近年来发现的具有穿透哺乳动物生物膜功能,并能介导大分子物质跨膜转导的一类小分子肽段,大多含有较多的碱性氨基酸。生理状态下,穿透肽分子的正电荷残基可与细胞表面蛋白聚糖多糖链的负电荷发生作用,介导了穿透肽与...; 刘芸刘爱华吴向玲江力玮罗海华邓鹏姜勇; 关键词：细胞穿透肽负电荷; 文献传递

脓毒症单核巨噬细胞特异性结合肽的筛选被引量：6: 2007年; 利用噬菌体随机肽库展示技术,筛选出与脓毒症单核/巨噬细胞特异性结合的短肽,探索脓毒症治疗的新方法.分别以经过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的人外周血单核细胞株(THP-1)细胞作为筛选的靶细胞,以未经LPS处理的THP-1细胞作为非特异性噬菌体吸附细胞,对噬菌体随机环七肽库进行4轮"差减"筛选,经过细胞ELISA验证阳性噬菌体克隆,对获得的阳性克隆进行DNA测序及生物信息学分析,并进一步利用免疫荧光实验,鉴定噬菌体克隆与LPS处理THP-1细胞的结合特异性.4轮筛选后,随机挑取的噬菌体克隆,测序后得到可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合肽.对去冗余后的七肽进行Clustal W多序列比对分析和BlastP蛋白同源相似性分析,细胞免疫荧光检测确定获得的噬菌体展示七肽可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合.噬菌体随机肽库技术为脓毒症单核/巨噬细胞表面靶位的筛选提供了高效、快捷的筛选体系,实验获得的多肽基序具有高度保守性和细胞特异性,这些多肽的生物活性将是下一步的研究内容.; 丁宁刘承武李志杰刘靖华邓鹏姜勇; 关键词：噬菌体展示肽库脓毒症

细胞氧化应激过程中MK2调控磷酸化蛋白的鉴定: 目的:氧化应激反应（oxidative stress response）是当细胞内的活性氧簇水平高于细胞的抗氧化能力时产生的适应性反应。在真核细胞中,应激激活的蛋白激酶（stress-activated protein ...; 王蔚刘芸康瑞霞陈丽夏高晓邓鹏姜勇; 关键词：活性氧簇磷酸化蛋白 DIGE; 文献传递

脂多糖对S100A8和S100A9在Hepa 1-6细胞内定位的影响: 2010年; 目的观察S100钙结合蛋白A8(S100A8)和S100钙结合蛋白A9(S100A9)在细胞内定位及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激对其细胞内定位的影响。方法将带有血凝素(HA)标签的S100A8或S100A9真核表达载体瞬时转染至小鼠Hepa1-6肝癌细胞,通过细胞免疫荧光方法观察S100A8、S100A9的胞内表达、定位及LPS对其定位的影响。结果静息状态下,S100A8、S100A9在细胞浆和细胞核都有分布;LPS刺激细胞2h后,S100A8移位入核,而S100A9在细胞内分布无明显变化。结论LPS刺激后S100A8、S100A9在细胞内的差异分布,提示两者在炎症反应中的作用不同,S100A8可能参与LPS诱导的基因表达调控。; 张秀娟王娟伍丽琼邓鹏姜勇; 关键词：脂多糖蛋白定位

细胞酶联免疫吸附试验在检测噬菌体阳性克隆中的应用和改进被引量：4: 2008年; 目的:通过对影响细胞ELISA的关键条件和步骤进行优化和改进,以降低实验假阳性率,提高敏感性。方法:THP-1细胞接种96孔培养板,分别用脂多糖(LPS)刺激或不刺激作为处理组和对照组,将通过噬菌体展示技术筛选获得的噬菌体分别与处理组及对照组细胞作用,洗脱未结合的噬菌体,加入HRP标记的抗M13单克隆抗体,分别用酶标仪和Kodak IS 2000R数码成像系统检测细胞与短肽的结合情况。并针对细胞的特性,在细胞的准备、固定、孵育和洗涤等关键步骤进行改进。结果:酶标仪和数码成像系统检测分别得到6个和8个可与细胞高亲和力结合的阳性噬菌体克隆,经过免疫荧光实验证实数码成像系统检测得到的8个阳性克隆均与细胞结合,并且数码成像系统多次测量值具有很好的重复性。结论:本方法为蛋白质与完整细胞的亲和活性研究提供了有效的实验方案,具有较好的应用前景。; 丁宁刘承武李志杰刘靖华邓鹏姜勇; 关键词：细胞酶联免疫吸附测定噬菌体展示

髓样相关蛋白8真核表达载体的构建及其细胞内定位: 2010年; 目的:构建小鼠髓样相关蛋白8(MRP8)的真核表达载体,观察其在NIH3T3细胞中的表达定位情况。方法:提取BALB/c小鼠肝脏组织的总RNA,通过逆转录-聚合酶链反应扩增得到MRP8编码序列,并将其克隆到带有血凝素(HA)标记的载体pcDNA3-HA上,随后将重组质粒瞬时转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察结果。结果:重组质粒经聚合酶链反应、酶切和测序鉴定证明构建正确,并且该质粒能够在NIH3T3细胞的胞浆、胞核中广泛表达,表达产物主要定位在细胞核中。结论:成功构建带有HA标签的MRP8真核表达载体。该载体能在哺乳动物细胞中有效表达并正确定位,为进一步研究MRP8作用细胞的信号通路提供了一个重要的工具。; 伍丽琼吴翠玲王娟徐佳邓鹏姜勇; 关键词：血凝素类转染细胞内定位

晚期糖基化终末产物受体存在异常定位并能促进前列腺癌细胞的增殖: 目的研究人晚期糖基化产物受体(Receptor for Advanced Glycation End Products,RAGE)在前列腺癌细胞中的亚细胞定位及其与前列腺癌细胞增殖的关系,为进一步研究RAGE在前列腺癌发...; 陆斌赵善超邓鹏姜勇; 关键词：细胞穿透肽负电荷; 文献传递

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国家自然科学基金(30670828)

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