国家自然科学基金(31160408)
- 作品数：11 被引量：38H指数：5
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- 相关机构：延边大学沈阳农业大学延边朝鲜族自治州农业科学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 桦褐孔菌菌株遗传多样性的ISSR分析被引量：9
- 2012年
- 应用ISSR(inter-simple sequence repeat)分子标记技术对21株不同来源的桦褐孔菌(Inonotusobliquus)菌株进行DNA指纹图谱分析,结果表明:从60条引物中筛选出11条ISSR引物对桦褐孔菌基因组DNA进行了ISSR-PCR扩增,共扩增出DNA谱带183条,其中多态性谱带169条,多态位点百分率为92.3%,遗传相似系数变化范围为0.605～0.880。在遗传相似系数为0.763时,可将21个桦褐孔菌菌株划为6大类群,菌株聚类结果与菌株的地理分布有关。
- 闫可尹勇刚傅常娥郭晓帆陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌ISSR
- 桦褐孔菌漆酶基因片段的克隆与序列分析被引量：2
- 2014年
- 通过简并引物克隆得到了桦褐孔菌及同属真菌共11个菌株的漆酶基因片段,并对其结构与同源性进行了分析。结果表明:11个目的扩增产物均含有2个内含子,且内含子位置保守,推导的氨基酸序列中均包含有保守的铜离子结合位点;DNA序列与氨基酸序列的相似度都颇高,基于2类序列构建的NJ系统进化树均能将除俄罗斯采集的桦褐孔菌菌株外归为1组,该漆酶基因片段可用于鉴定桦褐孔菌。
- 尹勇刚隋飞飞陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌漆酶基因结构
- 桦褐孔菌不同生长时期胞外酶活性变化被引量：5
- 2011年
- 以桦褐孔菌(Inonotus obliquus)菌株JL01为试验材料,研究其在代料栽培期间9种胞外酶活性的变化规律。结果表明,羧甲基纤维素酶、滤纸纤维素酶和半纤维素酶活性在菌丝生长阶段较低,菌核形成及菌核成熟阶段较高;漆酶、愈创木酚氧化酶、邻苯二酚氧化酶和过氧化物酶活性在菌丝生长阶段高于菌核形成阶段;蛋白酶和淀粉酶活性在菌丝生长时期及菌核成熟时期相对较高。
- 赵丽尹勇刚傅嫦娥陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌代料栽培胞外酶
- 桦褐孔菌β-葡萄糖苷酶基因的克隆与定量表达分析被引量：5
- 2015年
- 利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术从桦褐孔菌(Inonotus obliquus)菌核中克隆了β-葡萄糖苷酶基因的全长DNA序列,命名为IO-BGL。该DNA序列全长3382bp,其中开放阅读框(ORF)长度为2583bp,含有13个内含子和14个外显子,编码860个氨基酸,相对分子量为93.4kD,等电点为5.57,编码的氨基酸序列与地中海嗜蓝孢孔菌(Fomitiporia mediterranea)相似性最高(85%)。采用实时荧光定量PCR技术研究IO-BGL基因在菌核发育过程中的表达量变化,结果表明,IO-BGL基因在菌核的发育过程中,表达量呈先上升后下降趋势。
- 隋飞飞陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌内切葡聚糖酶菌核
- 桦褐孔菌酸性蛋白酶基因的克隆及其生物信息分析被引量：5
- 2016年
- 采用RACE法对桦褐孔菌JL01菌株的蛋白酶基因的cDNA全长序列进行克隆,并对其进行生物信息学分析。结果表明:本研究中克隆的目的基因的cDNA序列全长为1 178bp,包含990bp开放阅读框(ORF),编码由329个氨基酸组成的蛋白(IO-AP);IO-AP属于胃蛋白酶超级家族的天冬氨酸蛋白酶家族,具有天冬氨酸类型蛋白内切酶活性,是一种酸性蛋白酶。IO-AP与鲍姆桑黄菌(Sanghuangporus baumii)的酸性蛋白酶(AP)的氨基酸序列一致性为88%,进化关系最近;与地中海嗜蓝孢孔菌(Fomitiporia mediterranea)的氨基酸序列一致性为85%;与其他来源AP的序列一致性均小于75%。
- 李健张宇婷安丹丹陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌酸性蛋白酶RACE克隆
- 桦褐孔菌纤维素酶基因真核表达载体构建被引量：1
- 2017年
- 根据已知的内切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶基因ORF全长序列,分别设计1对带有粘性末端酶切位点EcoRI和NotI的特异性引物,PCR克隆得到桦褐孔菌内切葡聚糖酶(endo-l,4-β-D-glucanase,EG)和β-葡萄糖苷酶(beta-glucosidase,BGL)ORF基因全长,将酶切后的目的片段分别与真核表达载体pPICZαA连接,构建出真核表达载体pPICZαA-EG和pPICZαA-BGL,并成功转化到毕赤酵母GS115中,为下一步纤维素酶的表达和功能验证奠定了基础。
- 张宇婷曲柏宏宁云山安丹丹李健陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌内切葡聚糖酶Β-葡萄糖苷酶真核
- 桦褐孔菌菌株遗传多样性分析方法的比较被引量：5
- 2013年
- 以菌丝培养特性和ISSR分子标记对采自不同国家和地区的21株桦褐孔菌菌株进行了遗传多样性分析,并对2种方法的聚类结果进行了比较分析。结果表明,菌丝培养特性标记的聚类结果与ISSR分子标记聚类结果基本一致,均与地理分布有较强的相关性,但ISSR分子标记结果与纬度相关性较大,菌丝培养特性标记的聚类结果与生态环境相关性较大。因此,建议在桦褐孔菌的遗传多样性分析和种质鉴定中采用分子标记,并辅之以其他标记的研究方法。
- 傅常娥郭晓帆隋飞飞闫可陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌分析方法
- 桦褐孔菌不同菌株培养特性及人工栽培比较被引量：7
- 2011年
- 以来自不同国家及地区的21个桦褐孔菌菌株为试材,比较菌丝长势、长速、干重及多糖产量,并分别对每个国家的1个菌株进行人工栽培比较.结果表明,不同国家的桦褐孔菌菌株菌丝培养特性及菌核形成特性明显不同,其中,中国菌株JL01菌丝长势最强,长速最快,达3.62 mm/d;中国、芬兰和朝鲜菌株均产生菌核,但中国菌株的菌核干重、生物学效率及多糖产量显著高于其它2个菌株,生物学效率达27%.
- 闫可朴松洙傅常娥陈艳秋冉丽萍
- 关键词：桦褐孔菌菌株筛选栽培比较
- 桦褐孔菌内切葡聚糖酶基因的克隆与表达分析被引量：5
- 2016年
- 利用RACE技术首次从药用真菌桦褐孔菌中克隆得到了与菌核形态发育相关的内切葡聚糖编码(EG)基因。结果表明:桦褐孔菌内切葡聚糖酶基因(IO-EG)的cDNA全长为1 315 bp,其中编码区占1 233 bp,具有13个内含子和14个外显子,共编码410个氨基酸。系统进化树分析表明,桦褐孔菌EG与嗜蓝孢孔菌EG在分子进化关系上最相近。实时荧光定量PCR分析表明,随着菌核的生长发育,IO-EG基因的表达量不断升高,初步证明内切葡聚糖酶基因的表达量与桦褐孔菌菌核的产量相关。
- 隋飞飞李健安丹丹陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌内切葡聚糖酶菌核
- 桦褐孔菌酸性蛋白酶的基因克隆及其在菌核中的表达被引量：1
- 2018年
- 根据桦褐孔菌(Inonotus obliquus)酸性蛋白酶(Acid protease,AP)基因(IO-AP)序列密码子的偏好性优化选择酶切位点和载体,成功构建pGEX-4T1-IO-AP原核表达载体;用热激法将该载体转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,构建桦褐孔菌酸性蛋白酶(IO-AP)重组菌。以此重组菌表达的IO-AP以包涵体形式存在,重组蛋白分子质量约为60kDa。以获得的较高纯度的重组IO-AP作为免疫原,采用传统3-2-2-2免疫方式免疫4只Balb/c小鼠,通过间接ELISA法测定抗血清效价,4免之后,4只小鼠抗血清效价均大于121500,成功制备了IO-AP多克隆抗体。Western Blotting检测表明,IO-AP在桦褐孔菌菌核形成过程中的表达呈现先上升后下降的趋势,以第二个时期(栽培130d,菌核长至1.33g时)AP蛋白表达量最高。
- 李健王鑫胡志强亢学平杜忠伟王旭陈艳秋
- 关键词：桦褐孔菌ELISA法WESTERN
