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胃癌组织中PD-L1的表达及其与预后的关系被引量：5: 2005年; 为探讨共刺激分子PD-L1在胃癌组织中的表达及其临床意义。用免疫组织化学方法检测102例胃癌和10例胃腺瘤PD-L1的表达,并对其表达与患者年龄、性别、胃癌部位、肿瘤大小、组织类型、肿瘤浸润深度、分化程度、淋巴结转移等进行相关分析。结果:胃腺瘤组织和正常胃组织不表达PD-L1分子,胃癌组织中PD-L1呈阳性表达,表达阳性率为42.2%;PD-L1分子在胃癌组织中的表达与胃癌患者年龄、性别、肿瘤部位、组织学类型无关(P>0.05),与肿瘤大小、肿瘤的浸润深度、淋巴结转移及预后有关。当肿瘤大于5cm(P<0.05)、肿瘤浸润达深肌层、淋巴结转移阳性、生存期<2年时,PD-L1表达阳性率明显升高(P<0.01)。多变量分析还显示,PD-L1分子可作为评估胃癌预后的独立因素。胃癌组织PD-L1分子的检测有助于胃癌预后的判断和作为个体化治疗选择的生物学指标。; 吴昌平朱一蓓赵洁敏季枚徐宽枫张光波张学光; 关键词：共刺激分子胃肿瘤

人B7-H4基因转染细胞的构建及其对T细胞的共刺激效应的初步研究被引量：7: 2005年; 目的构建含有人B7H4基因的重组逆转录病毒载体,获得稳定表达B7H4基因的L929细胞并初步研究其对T细胞的共信号作用及可能机制。方法从含人B7H4基因的cDNA序列FLJ22418中,采用PCR扩增出B7H4全长基因,双酶切装入逆转录病毒载体pEGZHATerm,与辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞293T,用其培养上清感染L929细胞72h后,经Zeocin筛选出稳定表达B7H4蛋白的L929细胞株;采用免疫荧光标记和流式细胞仪分析免疫分子的表达、3HTdR掺入检测细胞增殖以及ELISA测定细胞因子的水平。结果构建了含人B7H4基因的重组逆转录病毒载体和获得含有B7H4基因的重组病毒,筛选获得能稳定高表达人B7H4蛋白的L929转基因细胞;该转基因细胞对T细胞体外具有抑制增殖、活化和细胞因子分泌的作用。结论构建了稳定表达人B7H4蛋白的细胞株,B7H4分子在体外通过抑制T细胞分泌IL2和促进其凋亡作用可显著地下调T细胞功能的效应。; 毛一香王勤陈洁陈永井施勤杨明峰李文香张学光; 关键词：B7-H4 逆转录病毒 T细胞功能基因转染细胞重组逆转录病毒载体

人CD40基因的克隆及其胞外段的原核有效表达被引量：1: 2011年; 目的克隆人CD40基因并原核高效表达其胞外段。方法采用RT-PCR法,从高表达人CD40抗原的XG-2细胞中扩增CD40全长基因,并将其插入pMD18-T载体中进行测序验证。用特异引物扩增CD40抗原分子的胞外段基因(可溶性CD40、sCD40基因片段),再亚克隆至原核表达载体pGEX-5x-3,将测序正确的重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Western blot检测目的蛋白。结果 RT-PCR能从XG-2细胞总RNA中扩增出特异的目的基因,测序结果显示与GenBank中登录的完全一致,构建的原核表达重组载体pGEX-5x-3/hCD40ECD在表达宿主菌BL21(DE3)中经IPTG诱导能获得有效表达,Western blot证实了目的蛋白条带的特异性。结论获得了人CD40分子的基因及其胞外段原核表达产物,为进一步研究CD40分子的功能和sCD40的应用奠定了良好的基础。; 姜智陈永井葛彦张学光; 关键词：CD40 RT-PCR CDNA克隆原核表达

人B7-H3基因转染及其生物学功能的研究被引量：11: 2004年; B7 H3是新近发现的B7家族新成员。为探讨其体外生物学功能及单克隆抗体的研制构建了B7 H3基因转染细胞。利用PCR的方法扩增出B7 H3基因 ,继而插入逆转录病毒载体pGEZ Term ,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞 2 93T ,经用含有完整病毒颗粒的 2 93T细胞的培养上清感染L92 9细胞 ,Zeocin筛选获得B7 H3的基因转染细胞。RT PCR、Westernblot和流式细胞仪表型分析等方法鉴定表明 ,B7 H3/L92 9基因转染细胞能稳定表达人B7 H3蛋白。继而基因转染细胞对T细胞体外培养试验显示该基因转染细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖。ELISA法分析表明该基因转染细胞抑制活化T细胞IFN γ及IL 10的分泌。CD2 8信号可以逆转B7 H3对活化T细胞的抑制效应。综上结果证实 ,B7 H3对体外活化的T细胞具有负性调控作用。; 张光波陈永井姜智於葛华杨明峰施勤王勤李文香张学光; 关键词：B7-H3 基因转染共刺激分子

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国家自然科学基金(300330540)