重庆市自然科学基金(cqpc2012jja1698)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 相关作者：王德林李文宾盛夏何江黄亮亮更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院重庆医科大学重庆市綦江区人民医院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- LATS1基因去甲基化对人肾癌细胞生物学功能及其Hippo-YAP信号通路的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探讨LATS1基因去甲基化对人肾癌细胞生物学功能及其Hippo-YAP信号通路的影响。方法利用RT-PCR检测人肾透明细胞癌细胞系786-O和人胚肾细胞系HEK-293中Hippo-YAP信号通路大肿瘤抑制基因1(large tumor suppressor gene 1,LATS1)mRNA和下游癌基因Yes-相关蛋白(yes-associated protein,YAP)mRNA的表达水平,用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequence-PCR,BSP)对LATS1低表达细胞786-O进行甲基化分析,5-氮杂-2脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,DAC)处理786-O和HEK-293后,用RT-PCR、Western blot检测各组细胞LATS1和YAP的mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期,CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况。结果 786-O较HEK-293 LATS1mRNA表达水平显著降低(P<0.05),YAP mRNA表达水平显著升高(P<0.05),BSP显示LATS1在人肾癌细胞系786-O中高度甲基化;DAC处理786-O后,LATS1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),YAP mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),周期停滞在G0/G1期(P<0.05)、细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)、细胞凋亡显著增加(P<0.05),而HEK-293组均无明显变化(P>0.05)。结论 LATS1基因去甲基化后下调YAP基因表达,抑制786-O细胞增殖并诱导其凋亡。LATS1基因甲基化在肾癌发生中起重要作用。
- 陈柯宏李兴森何江黄飚曹建佳盛夏李文宾李美材王德林曾强锋黄亮亮
- 关键词：肾细胞癌去甲基化
- 慢病毒介导shRNA沉默YAP基因对人前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡及其雄激素受体的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨慢病毒介导sh RNA沉默Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)基因对人激素依赖性前列腺癌细胞株LNCa P细胞增殖、凋亡及其雄激素受体(androgen receptor,AR)的影响。方法:3条针对YAP基因的sh RNA慢病毒干扰载体感染LNCa P细胞,经嘌呤霉素筛选后建立稳定感染细胞系,real-time PCR、Western blot分别检测感染后各组细胞YAP、AR m RNA和蛋白水平;选取沉默效果最佳sh RNA慢病毒干扰载体组,以细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)、平板克隆形成实验(colony formation)检测LNCa P细胞增殖能力;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测LNCa P细胞凋亡改变。结果:重组慢病毒成功感染前列腺癌LNCa P细胞,经嘌呤霉素筛选后感染效率达95%以上,获得稳定沉默YAP基因LNCa P细胞系。与空白对照组和阴性对照组比较,感染sh RNA慢病毒干扰载体各组中YAP、AR m RNA及蛋白表达水平明显下调(P=0.000),细胞增殖受到明显抑制(P=0.000),细胞凋亡明显增加(P=0.000)。结论:慢病毒介导sh RNA沉默YAP基因能有效下调YAP在LNCa P细胞中表达,并抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡;YAP可能作为AR配体参与AR信号通路的调节。
- 李美材何江吴文强黄亮亮曾强锋曹建佳陈柯宏盛夏李文宾王德林
- 关键词：前列腺癌雄激素受体慢病毒
- shRNA沉默YAP基因对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨慢病毒干扰载体沉默Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响。方法:用细胞免疫荧光法检测肾癌786-O细胞中YAP蛋白表达情况;构建针对YAP基因的shRNA慢病毒干扰载体转染786-O细胞。RT-PCR和Western blot分别检测干扰786-O细胞前后YAP mRNA及蛋白的表达情况;CCK-8(cell counting kit-8)法检测沉默YAP后细胞增殖的改变;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡和周期的变化。结果:786-O细胞中YAP蛋白表达于细胞浆和细胞核;shRNA-YAP慢病毒干扰载体转染4 d后,可明显下调786-O细胞YAP mRNA及蛋白表达水平(P=0.000),并且明显抑制细胞增殖和促进细胞凋亡(P=0.000);细胞周期紊乱,G1期细胞明显增加,S期细胞明显降低(P=0.000)。结论:YAP-shRNA慢病毒干扰载体能有效抑制YAP基因在786-O细胞中表达,进而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。
- 曹建佳何江李兴森陈柯宏盛夏李文宾李美材黄飚王德林
- 关键词：肾细胞癌RNA干扰慢病毒
