国家自然科学基金(81071579)
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 体外诱导乳房内脂肪来源干细胞向上皮细胞分化的实验研究被引量：2
- 2014年
- 目的 观察在体外Transwell系统中共培养后,乳房脂肪来源干细胞（human breast adipose-derived stem cells,hbASCs）向乳腺上皮样细胞转化的能力.方法 自乳房缩小整形术切除的腺体内的脂肪组织中获取hbASCs,取HBL-100细胞系和第3代hbASCs,按1∶1的细胞比例分别接种于Transwell共培养系统的上室和下室,同时设置相同浓度单纯第3代hbASCs为对照组,分别在DMEM/F12培养基中培养,于相差显微镜下观察实验和对照组下室细胞形态变化及生长情况,透射电子显微镜下观察下室细胞超微结构的改变,并对细胞爬片进行荧光免疫细胞化学染色,以鉴定乳腺上皮细胞特异性标志物CK18、CK19的表达.结果 Transwell体系中各细胞均可良好贴壁生长.共培养至15 d,实验组下室细胞数量较对照组明显增多,体积变小,排列呈铺路石样,部分细胞形态上表现出乳腺上皮样细胞特征;电镜下可见微绒毛、桥粒和张力丝等典型上皮细胞结构特征;免疫荧光结果显示,经共培养诱导后,实验组部分细胞可阳性表达乳腺上皮细胞特异性标记物CK18、CK19;对照组诱导细胞上述检测结果均为阴性.实验组CK18、CK19阳性率分别为（24.4±12.0）％和（21.6±16.4）％;对照组分别为（1.8±1.7）％和（1.1±0.6）％,2组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 与HBL-100细胞共培养后,乳房脂肪干细胞可以被成功诱导成乳腺上皮样细胞.
- 杨杰郭能强孙家明熊凌云王荣荣
- 关键词：脂肪干细胞细胞分化
- 腺性肥大乳房乳腺组织和上皮细胞中雌激素受体α的定位和表达
- 2020年
- 目的观察雌激素受体α(ERα)在腺性肥大乳房乳腺组织和上皮细胞中的定位和表达,探讨其在腺性乳房肥大症病因学上的意义。方法对10例腺性乳房肥大症患者和正常体积乳房乳腺上皮细胞进行原代培养,采用免疫组织化学法(IHC)和免疫荧光组织化学法(IFHC)对乳腺组织的病理学特点进行观察,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测组织及细胞中ERα蛋白的表达量。组间比较采用单因素方差分析。结果ERα表达于导管和小叶的腔上皮细胞内,在肌上皮细胞和间质细胞等细胞内几乎不表达,且腺性肥大乳房乳腺组织导管上皮处ERα阳性细胞数多于小叶,两者比例较为恒定(1.7∶1.0)。ERα阳性细胞在腺性肥大乳房和正常体积乳房乳腺组织中的阳性表达率(PER)分别为17.25%和6.13%。腺性肥大乳房组、正常体积乳房组细胞株中的ERα蛋白表达值(PEV)为1.965和1.002。腺性肥大乳房乳腺组织中ERαPER和ERαPEV与正常体积乳房组间差异有统计学意义(P<0.05),且PER和ERαPEV与乳房肥大的严重程度呈正相关。结论ERα在乳腺组织内的表达定位具有特征性。与正常体积乳房乳腺上皮细胞比较,腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的ERαPER和ERαPEV均明显增高,且ERα表达情况的高低与乳房肥大的严重程度成正相关。由此推测,腺性乳房肥大症的发生与乳腺组织内ERα的分布特点和上皮细胞内ERα表达增多有密切关。
- 肖芃郭亮孙家明
- 关键词：雌激素受体Α乳腺组织
- 人乳房脂肪来源干细胞的分离、培养及鉴定
- 2014年
- 目的建立人乳房脂肪来源干细胞（hbASCs）分离、培养的方法，并研究其形态特点、生物学特性及表面相关标志。方法取乳房缩小术中切除乳腺组织内脂肪，采用I型胶原酶消化贴壁法分离原代脂肪来源干细胞，倒置相差显微镜观察细胞形态特点、生物学特性，透射电子显微镜观察细胞超微结构，采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法绘制细胞生长曲线，以免疫荧光法和流式细胞仪对其表面标志物进行鉴定，并向成脂、成骨定向诱导。结果原代hbASCs呈长梭形贴壁生长，呈漩涡样，经传代后形态均一。经冻存复苏后存活率达85．7％，仍可维持较好的细胞活性、生长和增殖能力。可阳性表达间充质干细胞生长特性相对特异性标志物CD44、CD105，经油红O和茜素红染色鉴定证实体外可成脂、成骨定向分化。结论可从人乳腺脂肪组织中成功分离获取脂肪组织来源干细胞，为组织工程化乳房提供了取材方便、不增加供区的种子细胞来源。
- 杨杰郭能强熊凌云孙家明
- 关键词：脂肪干细胞乳房脂肪组织细胞培养
- 腺性肥大乳房乳腺上皮细胞的体外培养
- 2020年
- 目的探讨腺性肥大乳房乳腺上皮细胞(hMEC-GAHB)的原代培养方法,观察该原代细胞的形态学及生物学特点。方法采用0.25%胰蛋白酶和Ⅰ型胶原酶混合液,结合长时间4℃和短时间37℃消化,配合低转速离心的方法,从2010年4月至2011年4月华中科技大学同济医学院附属协和医院整形外科手术治疗的10例腺性乳房肥大症患者(M组,实验组)和10例正常体积乳房患者(N组,对照组)的乳腺组织中消化获取乳腺上皮细胞并进行原代培养,评价获取原代细胞的效果,观察各组细胞的形态学特点,采用多抗体免疫细胞化学法(MICC)鉴定原代细胞种属,并采用碘化丙锭(PI)染色法、四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞术等方法对各组细胞的细胞周期和体外增殖及凋亡等生物学特点等进行分析。结果腺性肥大乳房每克乳腺组织可获取细胞数为5×106个,细胞存活率为70%,接种后48 h细胞贴壁率为60%,贴壁细胞活性良好,接种后约72 h胞质展开,约120 h相互融合。细胞增殖明显,未见明显凋亡。hMEC-GAHB与正常体积乳房乳腺上皮细胞在细胞形态学上差异无统计学意义,且正常表达典型的上皮细胞骨架蛋白[CK8、CK14、CK18、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等]。在含有相同浓度的17β-雌二醇的体外环境中,处于同一时期细胞对数生长期时,hMEC-GAHB组的群体倍增率(PDR)为0.548、1.634、2.062、3.946、5.210、8.700,正常体积乳房组的群体倍增率(PDR)为0.394、1.455、1.820、3.822、4.467、5.213,两者间差异有统计学意义(P<0.05);hMEC-GAHB组和正常体积乳房组的G2/M期与G0/G1期细胞数比值分别为0.45±0.01和0.34±0.01,两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用改良的酶消化法可获得较满意的细胞数和细胞活性。hMEC-GAHB具有典型上皮细胞的形态学及生物学特点,在含有雌激素的体外环境中,hMEC-GAHB比较正常体积乳房乳腺上皮细胞具有更强的增殖活力,并具有�
- 肖芃郭亮孙家明
- 关键词：原代细胞体外培养形态学生物学
