国家自然科学基金(81071577)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：汕头大学医学院第一附属医院南方医科大学南方医院汕头大学更多>>
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- 靶向Wnt10b的小干扰RNA抑制胚胎皮肤毛囊发育的初步研究被引量：2
- 2012年
- 目的 利用小干扰RNA（siRNA）抑制皮肤Wnt10b基因的表达,观察Wnt10b基因沉默能否抑制毛囊的发育并探讨其潜在机制.方法 化学合成siRNA-Wnt10b,将siRNA转染体外培养的胎鼠背部皮肤,荧光定量PCR检测转染后不同时间段皮肤组织Wnt10b和p-连环蛋白（β-catenin） mRNA的表达,Western blot检测转染后72 h皮肤组织的Wnt10b和β-catenin蛋白含量.将转染后72 h的皮肤组织石蜡包埋、切片,HE染色,镜下观察各组毛囊发育情况并做统计学处理.结果 siRNA-Wnt10b转染后的24、48 h,胎鼠背部皮肤Wnt10b mRNA的表达呈不同程度下降；但β-catenin mRNA表达未随Wnt10b mRNA水平的起伏而明显波动；转染后72 h,Wnt10b蛋白和β-catenin的蛋白表达同时减少,新形成毛囊数量也随之减少（t=3.254,P=0.002）.结论 在体外器官培养的环境中,siRNA-Wnt10b能够抑制胎鼠背部皮肤组织Wnt10b蛋白的表达,减少新形成毛囊的数量；Wnt10b可能只在蛋白水平上调控细胞β-catenin的表达.
- 纪影畅李宇鲁峰胡志奇王森林常敏高建华
- 关键词：毛囊器官培养技术
- 人Wnt10b基因真核表达载体的构建及表达鉴定
- 2011年
- 目的:利用基因工程技术构建人Wnt10b基因的pEGFP-N1-Wnt10b真核表达载体,观察其在COS-7细胞中的表达。方法:以pUC19-Wnt10b为模板,PCR扩增人Wnt10b基因的cDNA编码区序列,扩增产物和pEGFP-N1载体双酶切,T4 DNA连接酶连接,构建pEGFP-N1-Wnt10b,酶切和测序鉴定该载体;LipofectamineTM2000将该载体转染入COS-7中,Western blot和免疫细胞化学检测COS-7 Wnt10b蛋白表达。结果:PCR扩增出的人Wnt10b基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体,成功构建了pEGFP-N1-Wnt10b;将其转染入COS-7,COS-7 Wnt10b蛋白表达明显增高。结论:成功构建了人pEGFP-N1-Wnt10b,这为进一步研究Wnt10b基因功能奠定了前期基础。
- 纪影畅蔡湘娜林常敏李宇
- 关键词：COS-7细胞基因表达
- 重组人Wnt10b蛋白的制备及其促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达
- 2012年
- 目的基因工程制备重组人Wnt10b蛋白，观察其促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达。方法以pUC19-Wntlob为模板，聚合酶链反应（PCR）扩增cDNA，扩增产物和pEGFP—N1载体双酶切，连接酶连接构建pEGFP-N1-Wntlob真核表达载体，酶切和测序鉴定该载体；Lipofectamine^TM 2000将该载体转染入COS-7细胞，计算转染率。Westernblot和免疫细胞化学法检测COS-7细胞Wntlob蛋白表达；将子鼠背部皮肤置于含Wnt10b蛋白的培养液中培养2d，Westernblot法检测皮肤Wntlob和B．连环蛋白的表达。结果PCR扩增出的人Wntlob基因cDNA正确克隆到pEGFP-N1载体，成功构建pEGFP—N1一Wntlob；pEGFP—N1-Wntlob，成功转染COS-7细胞，转染率为20％-40％，转染后COS-7细胞Wntlob蛋白表达较对照组增加（P〈0．05），COS-7细胞分泌的WntlOb蛋白能促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达（P〈0．05）。结论成功制备具有生物活性的重组人Wnt10b蛋白，Wntlob蛋白促进子鼠皮肤β-连环蛋白的表达增加。
- 纪影畅李宇胡志奇蔡湘娜黄铿高建华
- 关键词：COS细胞基因表达
