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假单胞菌M18调控因子GacA与RsmA的相关性及对抗生物质合成代谢调控机制的分析被引量：3: 2006年; 假单胞菌M18是一株可同时合成并分泌吩嗪-1-羧酸(Phenazine-1-carboxylic acid,PCA)和藤黄绿脓菌素(Pyoluteorin,Plt)两种抗生物质的生防菌株。为了进一步研究假单胞菌M18抗生物质合成代谢的调控方式与机制,在分别构建gacAr、smA等单基因突变株基础上,又构建了gacArsmA双基因突变株M18GR以及gacA′-l′acZ和rsmA′-′lacZ等翻译融合表达载体(pMEGA和pMERA)。通过在PPM和KMB两种培养基中发酵培养和两种抗生物质PCA和Plt的HPLC定量测定显示,双突变株M18GR的PCA和Plt的合成量不论在PPM还是在KMB培养基中都介于单突变株M18G和M18R之间。由实验结果分析推测,两种调控因子对抗生物质合成的调控作用不是发生在转录水平,很可能发生在转录后水平。由β-半乳糖苷酶的定量分析表明,在假单胞菌M18中,两种调控因子不存在自诱导机制;虽然GacA未调控RsmA的合成,但RsmA可能部分正向调控GacA的表达。; 葛宜和黄显清张雪洪许煜泉; 关键词：假单胞菌M18 GACA RSMA 双突变

假单胞菌M18菌株的PltR因子特异性正调控藤黄绿菌素合成被引量：1: 2007年; 经生物信息学分析,在假单胞菌M18(Pseudomonas sp.M18)菌株的藤黄绿菌素(pyolute-orin,Plt)生物合成基因簇上游定位了一个属于LysR家族的调控因子编码基因pltR.运用同源重组技术,构建了pltR失活的突变菌株M18TRG,在King’sB培养基中,与野生型菌株相比,Plt合成能力下降了70%,而吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid,PCA)的合成能力不受影响.反式互补pltR的突变株能回复Plt的合成能力达到野生型水平.在菌株M18中过表达pltR,Plt产量提高13倍,PCA产量没有改变.这些结果表明pltR基因表达产物是Plt生物合成的特异性正调控因子.在野生型菌株M18和不产Plt的突变株M18T中,pltR基因表达量无显著差异,表明pltR基因的表达不受Plt调控.与野生株相比,突变株M18TRG中的转录融合plt-lacZ表达量显著降低,表明PltR对Plt的正调控作用主要发生在转录水平上.对pltR基因在gacA突变株M18G和rsmA突变株M18R中的表达量的进一步研究发现,PltR参与了gacA基因对Plt的合成的正调控,但不参与rsmA基因对Plt合成的负调控.; 严安汪晓雷张雪洪许煜泉

假单胞菌M18株pltZ基因转录阻抑藤黄绿菌素ABC转运系统被引量：1: 2005年; 假单胞菌(Pseudomonassp .)M18株的藤黄绿菌素(Pyoluteorin ,Plt )生物合成基因簇下游存在一个Plt生物合成负调控基因pltZ和一个负责Plt分泌及自身抗性的ABC(ATP_bindingcassette)转运系统基因簇。利用启动子探针载体pME6 0 15和pME6 5 2 2分别构建ABC转运基因pltH与lacZ的翻译和转录融合表达质粒pHZLF和pHZCF ,分别引入野生型假单胞菌M18株和pltZ突变菌株M18Z。半乳糖苷酶活性的测定结果表明:在pltZ突变株M18Z中,pltH’-‘lacZ翻译融合表达水平约比野生型提高3 7～8 4倍,pltH’‘lacZ转录融合表达水平显著提高了2 8～7 4倍,表明pltZ能在转录水平上阻抑PltABC转运系统的表达,pltZ很可能通过阻抑PltABC转运系统的表达。; 黄显清葛宜和张雪洪许煜泉; 关键词：假单胞菌M18 藤黄绿菌素

荧光假单胞菌M18的rpoS基因克隆及其功能分析被引量：10: 2004年; 从荧光假单胞菌 (Pseudomonasfluorescentsp .)M1 8基因组中克隆了RNA聚合酶的稳定期σs 因子编码基因rpoS ,推测其氨基酸序列与铜绿假单胞菌、荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌的同源性分别为 99 1 %、87 35 %和87 8%。利用体外定点插入突变和同源重组技术 ,构建了M1 8的rpoS突变株M1 8R- 。对突变株M1 8R- 合成抗生素吩嗪 1 羧酸 (PCA)和藤黄绿菌素 (Plt)的动力学分析结果表明 ,在KB或PPM培养基中 ,突变株合成PCA的能力比野生型分别提高了 2 5或 5 78倍 ,但Plt的积累量不受影响。与野生型相比 ,突变株对碳源饥饿的耐性下降。同时 ,在碳源饥饿条件下对过氧化氢、乙醇和和氯化钠等环境胁迫的交叉保护性减小。; 徐汪节朱栋华张雪洪许煜泉; 关键词：荧光假单胞菌M18 吩嗪-1-羧酸藤黄绿菌素环境胁迫

假单胞菌gacA插入突变对藤黄绿脓菌素和吩嗪-1-羧酸合成代谢的差异性调控被引量：7: 2004年; 假单胞菌株M18分泌藤黄绿脓菌素 (Pyoluteorin ,Plt )和吩嗪 1 羧酸 (Phenazine 1 carboxylicacid ,PCA)并抑制多种植物病菌的生长。从M18中克隆双基因调控系统gacS gacA的组成基因gacA ,并构建了该基因抗性插入突变株M18G。在KMB培养基中 ,M18G合成Plt的能力受到完全抑制 ,而PCA的积累约比野生型提高 31倍左右。Plt合成基因簇突变株M18T和在M18G基础上构建的PCA合成基因簇突变株M18GA的Plt和PCA合成的动力学变化表明 ,在M18G菌株中 ,Plt合成的抑制并不引起PCA的过量积累 ,PCA的过量积累也不引起Plt合成的抑制。由此推测。; 葛宜和黄显清王素莲张雪红许煜泉; 关键词：假单胞菌株M18 吩嗪-1-羧酸

假单胞菌M18株las系统负调控藤黄绿脓菌素和吩嗪-1-羧酸的合成被引量：1: 2008年; 从假单胞菌M18株（Pseudomonassp．M18）中，克隆了las系统的双元组分lasI和lasR基因，它们的编码产物属于LuxI—LuxR调控因子．运用同源重组技术，分别构建lasI和lasR基因的染色体失活突变株，与野生型菌株相比，抗生素藤黄绿脓菌素（Pit）和吩嗪-1-羧酸（PcA）的产量均分别提高了4～5倍和2～3倍．在lasI和lasR突变株的反式互补实验中，两种抗生素的产量回复到野生型水平．pltA’-lacZ和phzA-＇lacZ翻译融合的测定结果进-步证明lasI和lasR的编码产物对Plt和PCA生物合成基因簇具有负调控作用．las系统正调控细菌的群集运动，在lasI和lasR的失活突变株中，细菌的群集运动能力消失．对lasI和lasR突变株和野生型的生长曲线的研究发现，lasI和lasR基因的编码产物对细菌的生长具有抑制作用．结果表明，las系统作为整体调控因子的编码基因，参了与细胞内多种生物活动的调控作用．; 陈韵汪晓雷黄显清张雪洪许煜泉; 关键词：吩嗪-1-羧酸群集运动

假单胞菌株M18gacA基因对BHL和HHL合成正调控及对PCA合成负调控无相关性被引量：5: 2006年; 经初步鉴定,假单胞菌株(Pseudomonassp.)M18至少能产生5种N-酰基高丝氨酸内酯类(N-acyl-homoserinelactones,AHLs)信号分子,它们是:N-丁酰高丝氨酸内酯(N-butyryl-L-homoserine lactone,C4-HSL,BHL)、N-己酰高丝氨酸内酯(N-hexanoyl-L-homoserine lactone,C6-HSL,HHL)、N-3-氧-己酰高丝氨酸内酯[N-(3-oxohexanoyl)-L-homoserinelactone,3-Oxo-C6-HSL,OHHL]、N-3-氧-辛酰高丝氨酸内酯[N-(3-oxooctanoyl)-L-homoserine lactone,3-Oxo-C8-HSL,OOHL]和N-3-氧-癸酰高丝氨酸内酯[N-(3-oxodecanoyl)-L-homoserine lactone,3-Oxo-C10-HSL,ODHL)。在gacA突变菌株M18G中,信号分子的积累量明显减少,且只能检测出其中的4种;同时,吩嗪-1-羧酸(Phenazine-1-carboxylic acid,PCA)的合成量比野生株M18提高了2倍左右。在M18菌株中,基因rhlⅠ的编码产物参与BHL和HHL的合成。构建rhlI’-’lacZ翻译融合表达质粒pMEIZ,分别导入野生株M18和突变株M18G,突变株M18G的半乳糖苷酶活性比野生株M18下降约40%,表明GacA对基因rhlI的表达具有正调控作用。但是,在野生株M18和突变株M18G的发酵液中,分别或同时添加过量的外源BHL和HHL,对PCA合成的影响不显著,表明在突变株M18G中,PCA合成量的增加与BHL和HHL合成量的减少没有明显的相关性。; 汤湘雍严安黄显清张雪洪许煜泉; 关键词：假单胞菌株M18 GACA 吩嗪-1-羧酸

假单胞菌M18转录调节因子σ^S基因与无启动子lacZ基因融合突变株的构建和鉴定: 2006年; 通过菌落原位杂交和Southern杂交,从假单胞菌M18基因组文库中克隆了rpoS基因及相邻序列。为了深入研究影响rpoS基因表达的调控因素,运用同源重组技术,将无启动子β-半乳糖苷酶基因(-′lacZ)插入并融合于rpoS基因中,构建了假单胞菌M18rpoS基因突变株M18SZ。Miller法测定显示,突变株M18SZ的β-半乳糖苷酶可高达480U,而野生株检测不到β-半乳糖苷酶活性。表明,突变株中的rpoS基因与无启动子β-半乳糖苷酶基因已融合并且表达。在KMB培养基中生长量测定(OD600)的结果表明,突变株与野生株生长存在显著差异。; 葛宜和许煜泉; 关键词：假单胞菌M18 RPOS LACZ 插入突变

RNA聚合酶σ^(38)亚基缺失对假单胞菌抗生物质合成代谢的影响被引量：1: 2006年; 设计引物从假单胞菌M18基因组DNA中扩增并获得rpoS基因的378bp保守区段。以此为探针,从假单胞菌基因组文库中克隆了包括rpoS基因全序列及其相邻序列的3·1kbEcoRⅠ-XhoⅠ片段。通过抗性基因(抗庆大霉素基因)的定点插入构建了σ38亚基缺失突变株M18S。HPLC检测结果显示,σ38亚基缺失引起该菌株的抗生物质合成代谢的显著变化。与野生株相比,缺失突变株的吩嗪-1-羧酸在PPM和KMB中2种培养基中合成量由58μg/mL和10·2μg/mL分别减少到20·4μg/mL和0μg/mL;而缺失突变株的藤黄绿脓菌素则相反,在PPM和KMB两种培养基中合成量由0·5μg/mL和20·5μg/mL分别提高到75·4μg/mL和185·6μg/mL。表明σ38亚基可区别性调控假单胞菌M18的抗生物质合成代谢。rpoS基因的互补实验和两种抗生素基因与β-半乳糖苷酶基因的翻译融合表达实验进一步验证了上述的结果:σ38亚基正调控吩嗪-1-羧酸的表达,而负调控藤黄绿脓菌素的表达。; 葛宜和裴冬丽张雪洪许煜泉; 关键词：假单胞菌M18 吩嗪-1-羧酸亚基

LysR family factor PltR positively regulates Pyoluteorin production in a pathway-specific manner in Pseudomonas sp. M18被引量：5: 2007年; The pltR gene, coding a putative LysR-type regulator, was identified upstream Plt biosynthetic gene cluster in Pseudomonas sp. M18 using bioinformatics technology. The null mutation of pltR resulted in mutant M18TRG (pltR::Gm) by recombination and its Plt (Pyoluteorin) production declined to 30% while PCA (Phenazine-1-carboxylic acid) production remained unchanged as compared with the wild-type M18 grown in King’s Medium B. After complementation, Plt production of mutant M18TRG was restored to the level in wild-type M18. Overexpression of pltR in M18 led to 13-fold enhancement of Plt produc-tion over the wild-type M18 strain. However, PCA production was unchanged under this condition. These data suggested that PltR was a positive regulator on Plt production. Plt itself, however, could not regulate expression of pltR. Expression of the plt-lacZ transcriptional fusion in mutant M18TRG de-clined obviously as compared with the wild-type M18, which further proved that PltR could regulate expression of Plt biosynthetic genes at the transcriptional level. In addition, the investigation on the pltR expression in gacA mutant M18G and rsmA mutant M18R disclosed that PltR was involved in the positive regulation of gacA on Plt production while being excluded from the negative control caused by rsmA.; YAN An, WANG XiaoLei, ZHANG XueHong & XU YuQuan Key Laboratory of Microbial Metabolism of Education Ministry, College of Life Sciences and Biotechnology, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200240, China; 关键词：LYSR PSEUDOMONAS PYOLUTEORIN TRANSCRIPTIONAL PROMOTION

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