山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(2003)
- 作品数：4 被引量：9H指数：3
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- 相关机构：青岛大学北京大学青岛大学医学院附属医院更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- 外源基因在噬夏孢欧文氏菌中的表达被引量：1
- 2005年
- 用CaCl2法制备噬夏孢欧文氏菌(Erwiniauredovora)感受态细胞,热激处理可使质粒pACYC184转入噬夏孢欧文氏菌细胞,转化率为656cfu/μgDNA,转入的质粒可以在细胞中稳定存在,并随着细胞分裂而复制,质粒上的氯霉素抗性基因在其启动子的控制下能够高效表达,氯霉素乙酰转移酶可达噬夏孢欧文氏菌菌体总蛋白的30.26%。噬夏孢欧文氏菌可以作为一种新的原核表达系统。
- 汪靖超赵驰王波杨宏李荣贵
- 噬夏孢欧文氏菌(Erwinia uredovora)类胡萝卜素合成相关基因crtE的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2007年
- 噬夏孢欧文氏菌基因crtE编码GGPP合成酶。通过PCR扩增获得crtE基因,克隆进表达载体,构建表达质粒pET-15bcrtE。重组质粒转化E.coli BL21(DE3),构建工程菌;重组GGPP合成酶在大肠杆菌中实现了高效表达,表达量占菌体总蛋白的42%。重组蛋白以包含体形式存在,包含体经洗涤、尿素溶解、复性并经镍离子亲和层析树脂纯化,得到了电泳纯的重组噬夏孢欧文氏菌GGPP合成酶,带有His-tag的该蛋白分子量为34kDa,pI值为6.3。
- 汪靖超孙东平杜桂彩郭道森李荣贵
- 关键词：纯化
- AD7c-NTP与麦芽糖结合蛋白的融合表达、纯化及其抗血清制备被引量：3
- 2005年
- 人工合成了编码AD7c-NTP的基因,并将其中的6种密码子GGA AGG AGA ATA CTA CCC分别突变成大肠杆菌偏爱密码子GGT CGT CGT ATC CTG CCG,PCR扩增后克隆到表达载体pMAL-c2上,构建表达质粒pMAL-AD7c,重组质粒导人E coli BL21(DE3)构建工程菌,IPTG诱导实现了MBP-ADTc-NTP融合蛋白在工程菌中的高效表达,细胞裂解液经Amylose-resin亲和层析、DEAE-Sepharose离子交换层析以及Su—perdex 200凝胶过滤层析,得到了电泳纯的融合蛋白。纯化的融合蛋白免疫家兔制备了兔抗MBP-AD7c-NTP 融合蛋白的抗血清,利用该抗血清及点杂交技术,初步分析了10例AD疑似患者的尿样.结果表明5例疑似患者的尿样呈阳性,另5例呈阴性。
- 李荣贵汪靖超刑伟王帅赵仁亮吴光耀
- 关键词：纯化抗血清
- 噬夏孢欧文氏菌类crtB基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：5
- 2006年
- 噬夏孢欧文氏菌类胡萝卜素合成相关基因crtB,编码八氢番茄红素合成酶。利用PCR技术扩增出crtB基因,克隆进表达载体,构建表达质粒pET-15bcrtB。重组质粒转化大肠杆菌,构建工程菌株。经IPTG诱导,工程菌高效表达了重组八氢番茄红素合成酶,表达量占菌体总蛋白的40%。重组蛋白以包含体形式存在,包含体经洗涤、尿素溶解、复性并经镍离子树脂亲和层析、Superdex 75凝胶层析柱纯化,得到了电泳纯的重组八氢番茄红素合成酶,带有His-tag的该蛋白分子量为35 kDa,pI值为7.3。
- 汪靖超姜颖杜桂彩郭道森李荣贵
- 关键词：ERWINIA八氢番茄红素合成酶纯化
