国家自然科学基金(31101351)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
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- 重组核苷磷酸转移酶产生菌培养条件优化
- 2013年
- 5'-肌苷酸是一种重要的食品增鲜剂。核苷磷酸转移酶能够高选择性地使肌苷5'-位羟基磷酸酯化生成5'-肌苷酸,该反应不需要ATP,具有反应条件温和、反应速度快、位置特异性强、转化率高、环境友好等特点。以实验室前期构建的携带有来自Escherichia blattae磷酸转移酶(AP/PTase)编码基因的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28b-AP/PT为菌株,研究了培养基成分对细胞生长和产酶的影响,确定了最优培养基为:甘油7.5 g/L,蛋白胨12.5 g/L,酵母粉10g/L,NaCl 10 g/L,ZnCl2 0.1 g/L,初始pH值7.0。在该条件下,核苷磷酸转移酶酶活达到143.8U/L,比优化前提高了1.0倍。利用该条件下培养获得的菌体为生物催化剂,反应1 h,5′-肌苷酸的摩尔收率达到83.3%,表明该核苷磷酸转移酶对肌苷具有良好的活性。
- 何宝龙孙丽慧郑裕国
- 关键词：重组大肠杆菌发酵
- 海藻酸钠-聚乙烯醇-活性炭共固定化重组大肠杆菌细胞被引量：8
- 2015年
- 目的:研究产酸性磷酸酶的重组大肠杆菌BL21(DE3)/p ET28b-AP/PT固定化制备条件以及固定化细胞的酶学特性。方法:比较9种细胞固定化方法,海藻酸钠-聚乙烯醇-活性炭共固定化为最佳方法;优化凝胶组成、菌体包埋量和固定化时间等条件,比较固定化细胞和游离细胞的酶学性质。结果:最适共固定化条件是:活性炭质量分数1.0%,海藻酸钠质量分数2.0%,聚乙烯醇质量分数6.0%,Ca Cl2质量分数2.0%,菌体包埋量6 g/100 m L凝胶溶液,固定化时间6 h。固定化细胞的酸性磷酸酶最适作用温度为35℃,比游离细胞提高5℃;固定化细胞与游离细胞的酸性磷酸酶最适作用p H均为5.0,固定化细胞显示出比游离细胞更宽泛的p H适应性。固定化细胞在重复使用12批后相对酶活力为54.5%,具有良好的操作稳定性。结论:海藻酸钠-聚乙烯醇-活性炭共固定化是非常适合固定化重组大肠杆菌BL21(DE3)/p ET28b-AP/PT的方法。
- 孙丽慧沈爱萍何宝龙郑裕国
- 关键词：固定化重组大肠杆菌酸性磷酸酶
- 重组大肠杆菌生产核苷磷酸转移酶的发酵条件优化被引量：4
- 2013年
- 核苷磷酸转移酶能够特异地将无机焦磷酸(PPi)的磷酸根转移到核苷5′-位的羟基上,该过程并不需要ATP的参与,且具有选择性高和反应条件温和等特点。以实验室前期构建的重组大肠杆菌E.coli BL21(DE3)/pET28b-AP/PT为菌株,进行了5 L发酵罐中的培养条件优化,确定了以乳糖作为诱导剂时,最佳诱导时机OD600为7左右,诱导剂乳糖的浓度为10 g/L;确定了最适通气量为1.5 L/min。在该条件下,核苷磷酸转移酶酶活达221.4 U/L,OD600为20.4。
- 沈爱萍何宝龙孙丽慧郑裕国
- 关键词：重组大肠杆菌发酵
