广东省自然科学基金(980463) 作品数:12 被引量:23 H指数:3 相关作者: 余清声 朱柳 刘新艳 楼晓华 余红娥 更多>> 相关机构: 广州医学院 中国科学技术大学 广东省人民医院 更多>> 发文基金: 广东省自然科学基金 卫生部科学研究基金 广州市教育局市属高校科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
中华眼镜蛇毒F组份对血小板活化时蛋白酪氨酸磷酸化的影响 被引量:2 2005年 目的 :观察中华眼镜蛇毒F组份抑制血小板聚集的胞内信号转导机制。方法 :实验分 6组 :(1)空白组 ;(2 )对照组 ;(3) - (6 )实验组加入浓度为 10 0、30、10、3mg/LF组份。用比浊法测定血小板聚集率。用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting)测定血小板内蛋白酪氨酸磷酸化的表达。结果 :F组份呈浓度依赖性抑制二磷酸腺苷 (ADP)引起的分子量为 76、6 6和 37 5kD蛋白酪氨酸磷酸化的表达 ,其中 30、10 0mg/L给药组中 ,3个分子量蛋白与对照组比较均有显著差异 ,P <0 . 0 5。F组份对ADP引起血小板聚集作用的抑制同降低 76、6 6和 37 5kD 3个分子量蛋白酪氨酸磷酸化的表达呈明显的正相关 (r=0 . 936 7,P <0 . 0 1)。结论 :中华眼镜蛇毒F组份通过抑制分子量为 76、6 6和37 5kD蛋白的酪氨酸磷酸化表达 ,对血小板胞内信号转导过程发生影响 ,可能是其抗栓机制之一。 张梅 余清声关键词:眼镜蛇毒液类 血小板聚集 信号转导 中华眼镜蛇毒活性组分诱导内皮细胞凋亡 被引量:3 2008年 目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(China cobra venom active factor,CCVAF)诱导内皮细胞凋亡的作用。方法采用荧光显微镜、流式细胞仪等方法检测CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pulm onalis vascular endothelialcells,BAVEC)凋亡形态学、DNA、细胞周期以及凋亡指数的影响。结果经AO染色、流式细胞仪分析均证实CCVAF能够诱导内皮细胞出现凋亡。荧光显微镜下观察到CCVAF各浓度(0.15625、0.3125、0.625、1.25μmol.L-1)组处理的内皮细胞,核染色质固缩或断裂成片段状,染色不均匀,出现凋亡小体,凋亡细胞的比例随浓度升高而增加,0.625μmol.L-1组视野内凋亡细胞最多;流式细胞仪分析结果表明CCVAF在浓度低于0.625μmol.L-1,细胞生长被阻滞在S期,1.25μmol.L-1时则被阻滞在G0/G1期,且细胞凋亡率随浓度升高而逐渐增加。结论CCVAF能够诱导内皮细胞出现凋亡,通过此途径抑制内皮细胞的生长增殖,这可能是其对抗血管生成的机制。 刘新艳 余清声 余红娥 朱柳 王桂平 袁牧 楼晓华 腾脉坤关键词:眼镜蛇毒 内皮细胞 细胞凋亡 血管生成 肿瘤 中华眼镜蛇毒组分F的体外抗血管生成活性研究 被引量:3 2005年 目的研究中华眼镜蛇毒组分F对血管内皮细胞黏附功能的抑制作用和体外的抗血管生成活性。方法MTT快速测定法测定组分F对原代培养的血管内皮细胞对纤维蛋白原(Fg)、纤连蛋白(Fn)、Matrigel的黏附作用的影响;采用平面拟毛细血管生成培养法,观察组分F对血管生成的抑制效应。结果组分F可抑制血管内皮细胞的黏附功能,对细胞黏附Fn、Fg和Matrigel 3种物质的作用从1.2μg/ml浓度起即有抑制效应(P<0.05),且均呈浓度依赖性,组分F对细胞黏附Fg和Matrigel的抑制作用较其对Fn的作用强(P<0.05);组分F可抑制内皮细胞在培养基质中生成血管样网状结构的反应,并且随浓度的不同抑制程度有明显不同。结论中华眼镜蛇毒组分F具有体外抗血管生成活性。 刘晓颖 余清声 覃媛 黄劭关键词:蛇毒 中华眼镜蛇毒 体外 血管生成 眼镜蛇毒活性组分抑制内皮细胞生长及其生化机制初探 被引量:1 2009年 目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)抑制新生牛肺主动脉血管内皮细胞(BAVEC)生长的作用及其生化机制。方法用MTT法测定CCVAF抑制BAVEC的增殖活性,用伊红-考马斯亮蓝法观察细胞骨架,罗丹明-鬼笔环肽荧光探针F-actin骨架蛋白定位,荧光标记流式细胞法测荧光强度表胞内钙离子浓度[Ca^2+]i及分光光度法测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)及一氧化氮(NO)的含量。结果CCVAF(0.625-20μg/mL)剂量依赖性地抑制内皮细胞的生长,IC50=2.45μg/mL。CCVAF与BAVEC共同孵育后,引起细胞间连接减少,细胞F-actin分布混乱;细胞上清液中LDH活力及NO的含量及胞内[Ca^2+]i分别增加。结论CCVAF抑制BAVEC增殖,可能与CCVAF导致细胞骨架改变,LDH及NO分泌量及胞内Ca^2+浓度增加等生化机制有关。 朱柳 余清声 袁牧 刘新艳 王桂平 余红娥 楼晓华 滕脉坤关键词:蛇毒 中华眼镜蛇毒 内皮 中华眼镜蛇毒组分抑制肺癌细胞H1299的血管生长因子VEGF和Bfgf 被引量:8 2005年 目的:了解中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)对人非小细胞肺癌细胞株H1299VEGF、bFGF表达的抑制作用。方法:采用RTPCR方法检测H1299细胞中VEGF、bFGFmRNA表达的变化;利用ELISA检测培养上清中VEGF、bFGF蛋白的含量。结果:不同浓度的(2.0、4.0μg·ml-1)CCVAF对H1299bFGFmRNA水平有降低作用,其中4.0μg·ml-1CCVAF作用7h后bFGFmRNA的表达明显降低,但对VEGFmRNA的表达无明显影响。CCVAF作用H1299细胞24h后,其细胞上清中VEGF、bFGF的含量较对照组明显减少(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:CCVAF可抑制H1299细胞bFGFmRNA和蛋白的表达及VEGF蛋白的表达。 余红娥 余清声 刘新艳 朱柳 楼晓华 腾脉坤关键词:中华眼镜蛇毒 肺癌细胞 VEGF BFGF 中华眼镜蛇毒F组分对沙鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用 被引量:3 2001年 目的:研究中华眼镜蛇毒F组分对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:结扎沙鼠双侧颈总动脉1h,造 成前脑缺血模型,用比色法测定脑匀浆过氧化脂质的最终产物丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活 性。结果:F组分0.9、0.3、0.1mg/kg可显著抑制脑内脂质过氧化,降低MDA的含量,并提高超氧化物歧化酶的活 性,且呈一定的量效关系,同缺血再灌组比较P<0.05,同阳性对照药尼莫通比较,P>0.05。结论:中华眼镜蛇毒F 组分对脑缺血再灌注损伤有保护作用,可能与抑制自由基的生成和促进自由基的清除有关。 张梅 余清声 覃媛关键词:脑缺血 再灌注损伤 脂质过氧化 超氧化物歧化酶 中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响 2004年 目的 :研究中华眼镜蛇毒F组分对血管平滑肌细胞增殖的影响。方法 :用体外培养的血管平滑肌细胞 ,观察F组分对 2 0 %小牛血清引起的细胞对氚标胸腺嘧啶核苷酸 (H3 TdR)掺入的影响 ,用蛋白质免疫印迹法 (Westernblotting)测定F组分对 2 0 %小牛血清引起的细胞内原癌基因、核增殖抗原 (Pro liferationcellnuclearantigen ,PCNA)表达的影响。结果 :F组分呈浓度依赖性抑制 2 0 %小牛血清引起的细胞对H3 TdR掺入率和细胞内C myc、PCNA的表达 ,其中 30、10 0mg·L-1给药组与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :中华眼镜蛇毒F组分通过影响细胞内原癌基因C myc、PCNA的表达 。 余清声 张梅 覃媛 黄劭关键词:血管平滑肌细胞 C-MYC PCNA 中华眼镜蛇毒活性组分体外抑制三维血管生成的实验研究 被引量:4 2004年 目的研究中华眼镜蛇毒活性组分的抗血管生成作用。方法采用拟血管生成三维培养法,观察活性组分对体外血管生成的抑制效应。结果活性组分可抑制内皮细胞在培养基质中生成血管网状三维结构的反应,0.6、1.2、2.4μg·ml-1的不同浓度组分抑制程度不同。在0.6μg·ml-1浓度组,培养基质Matrigel中的内皮细胞团只形成局部的、不完整的空间网状结构;在1.2μg·ml-1浓度组,悬浮于凝胶中的细胞团所形成的管芽不能相互连接而形成空间网状结构;在2.4μg·ml-1浓度组,细胞散在悬浮于胶层中大部分不能粘聚,且随培养时间的延长无明显的结构变化。结论中华眼镜蛇毒活性组分具有体外抑制血管生成的生物活性。 余清声 刘晓颖 覃媛 黄劭关键词:中华眼镜蛇毒 抗血管生成 内皮细胞 体外 中华眼镜蛇毒活性组分抑制微血管形成研究 2010年 目的探讨中华眼镜蛇毒活性组分(CCVAF)抗血管生成的作用。方法采用原代培养牛肺主动脉内皮细胞克隆形成实验、Transwell小室趋化实验及大鼠胸主动脉环体外无血清培养微血管样结构形成实验,分别观察CCVAF对内皮细胞克隆形成、细胞迁移及大鼠动脉环微血管生成的影响。结果 CCVAF浓度为1.25,2.5,5.0μg/mL时,其对内皮细胞克隆形成抑制率分别为17.7%,40.3%,62.9%,呈浓度依赖性(r=0.982,P<0.05),而对内皮细胞迁移抑制率分别为20.5%,59.0%,73.5%,呈浓度依赖性(r=0.902,P<0.05);大鼠动脉环培养至第13天,CCVAF组较溶剂对照组微血管生成率下降了86.5%,CCVAF+VEGF组较VEGF对照组微血管生成率下降了88.1%。结论 CCVAF能够抑制内皮细胞克隆的形成、Hela细胞诱导的内皮细胞迁移和大鼠动脉环微血管的生成。 朱柳 余清声 刘新艳 余红娥 袁牧 王桂平 楼晓华 滕脉坤关键词:眼镜蛇毒 细胞迁移 血管生成 中华眼镜蛇毒活性组分选择性抑制内皮细胞增殖 被引量:7 2006年 目的观察中华眼镜蛇毒活性组分(Ch ina cobra venomactive factor,CCVAF)对内皮细胞增殖的选择性抑制作用。方法实验分对照组和不同浓度的CCVAF组,应用MTT法分析CCVAF对牛肺主动脉内皮细胞(bovine arteria pu lmona-lis vascu lar endothelial cells,BAVEC)、SD大鼠主动脉血管平滑肌细胞(smooth musc le cells,SMC)、人胚肺成纤维细胞HLF以及人支气管上皮细胞HBE生长增殖的影响;并运用直线回归分析统计对比CCVAF在不同时间点对BAVEC的IC50及上述各细胞的24 h IC50。结果CCVAF呈剂量及时间依赖性抑制内皮细胞的增殖:6、12、24、48、72 h其IC50分别为4.955、4.932、2.443、3.048、3.133 mg.L-1,24 h抑制作用最强;观察此时浓度与抑制作用的关系,0.625、1.25、2.5、5、10、20 mg.L-1,抑制率分别是4.41%、30.94%、61.81%、86.17%、96.05%、98.68%,10 mg.L-1抑制率即达高峰,且各浓度组抑制作用与对照组相比差异有显著性(P<0.05)。CCVAF抑制内皮细胞增殖具有一定的选择性,作用24 h后,抑制BAVEC生长的作用明显高于其它3种细胞,对BAVEC、HLF、HBE、SMC的24 h IC50分别为2.443、22.233、35.318、32.810 mg.L-1。结论CCVAF能够选择性抑制内皮细胞增殖,这在抗血管生成及其靶向治疗研究中可能具有重要意义。 刘新艳 余清声 余红娥 朱柳 王桂平 楼晓华 腾脉坤关键词:眼镜蛇毒 内皮细胞 血管生成 选择性 肿瘤