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国家自然科学基金(20476093)

作品数：7 被引量：23H指数：3
相关作者：姚善泾关怡新罗曼靳挺潘海学更多>>
相关机构：浙江大学浙江理工大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金更多>>
相关领域：生物学更多>>

文献类型

  • 7篇期刊文章
  • 2篇会议论文

领域

  • 8篇生物学
  • 1篇化学工程
  • 1篇轻工技术与工...

主题

  • 6篇复性
  • 4篇包涵体
  • 3篇荧光
  • 3篇重组人Γ-干...
  • 3篇稀释复性
  • 3篇干扰素
  • 2篇异构酶
  • 2篇核酸酶
  • 2篇核糖
  • 2篇核糖核酸
  • 2篇核糖核酸酶
  • 2篇核糖核酸酶A
  • 2篇二硫键
  • 2篇二硫键异构酶
  • 2篇杆菌
  • 2篇DSBA
  • 1篇蛋白质复性
  • 1篇蛋白质折叠
  • 1篇荧光分析
  • 1篇荧光分析法

机构

  • 9篇浙江大学
  • 1篇浙江理工大学

作者

  • 9篇关怡新
  • 9篇姚善泾
  • 5篇罗曼
  • 2篇谭培生
  • 2篇靳挺
  • 1篇陈建梁
  • 1篇盛清
  • 1篇潘海学
  • 1篇林东强
  • 1篇崔志芳
  • 1篇徐立仁

传媒

  • 2篇浙江大学学报...
  • 1篇化工学报
  • 1篇中国生物化学...
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇高校化学工程...
  • 1篇浙江大学学报...
  • 1篇第三届全国化...

年份

  • 1篇2007
  • 4篇2006
  • 4篇2005
共 7 条 记 录，以下是 1-9
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排序方式：
脲梯度扩张床吸附层析复性重组人γ-干扰素被引量：3
2006年
针对固定床吸附层析技术用于蛋白质体外重折叠复性时,折叠聚集中间体易聚集造成床层堵塞等问题,将扩张床吸附层析技术应用于重组人γ-干扰素包涵体蛋白质的复性研究,并与脲浓度线性梯度法相结合,考察了脲梯度长度和脲终浓度对重组人γ-干扰素复性的影响.复性后的重组人γ-干扰素的纯度达90%;较长的脲梯度长度和合适的脲终浓度有利于蛋白质的复性;在较优的实验条件下,复性后的重组人γ-干扰素收率为53.7%,比活达9.75×106IU/mg.脲梯度扩张床吸附层析法具有处理量大的优点,能有效地复性重组人γ-干扰素包涵体,并能实现复性和分离包涵体蛋白质过程的集成化.
靳挺关怡新林东强姚善泾
关键词：重组人Γ-干扰素包涵体复性
体外重折叠核糖核酸酶A及其荧光结构表征被引量：3
2006年
核糖核酸酶A(RNase A)作为蛋白质体外重折叠研究的模型蛋白,考察了稀释复性过程中脲浓度、稀释倍数、氧化还原环境(GSH浓度和GSH/GSSG比例)、pH值、温度以及聚集抑制剂的添加对该酶活性回收率的影响.在变性蛋白浓度为100μg?mL-1,复性液含有2 mol?L-1脲,GSH浓度2 mmol?L-1,GSH/GSSG比为4∶1,pH8.0,并添加终浓0.1%的PEG,转速为150 r?min-1,温度37℃的条件下复性,RNase A的活力回收率可达70%以上.利用荧光分析法对RNase A复性过程的结构变化进行了表征,在此基础上对RNase A体外重折叠过程蛋白质分子的构象变化以及活性中心的形成过程进行了阐述.
谭培生罗曼盛清关怡新姚善泾
关键词：核糖核酸酶A稀释复性荧光分析法分子结构
大肠杆菌二硫键形成蛋白A(DsbA)研究进展被引量：6
2007年
二硫键形成蛋白A(DisulfidebondformationproteinA,DsbA)是存在于大肠杆菌周质胞腔内的一种参与新生蛋白质折叠过程中催化二硫键形成的折叠酶。综述了DsbA三维结构、进化过程、协助蛋白质体内外复性方面的研究进展。DsbA比硫氧还原蛋白具有更强的氧化性,其强氧化性来自于Cys30残基异常低的pKa值和不稳定的氧化型结构,通过定点突变的研究表明了Cys30残基是DsbA活性中心最关键的氨基酸残基之一。DsbA不论在体内与目标蛋白融合表达还是在体外以折叠酶形式添加,都能有效地催化蛋白质的折叠复性,同时DsbA还具有部分分子伴侣的活性。
罗曼关怡新姚善泾
关键词：DSBA蛋白质折叠
疏水层析法复性重组人γ干扰素被引量：7
2005年
重组人γ-干扰素(rhIFN-γ)在大肠杆菌中高效表达,并形成包涵体.利用疏水作用层析(HIC)法对rhIFN-γ进行复性.采用了等尿素梯度和线性尿素梯度两种复性方法,考察了线性尿素梯度下尿素梯度长度、尿素终浓度、流速和上样量对rhIFN-γ复性的影响.在优化的线性尿素梯度复性条件下,尿素浓度在10个柱体积内从6mol·L-1下降到2mol·L-1,流速为1ml·min-1、上样量为0.568mg时,rhIFN-γ的活性收率比稀释复性法提高6.5倍,蛋白质量收率为36%,比活达1.9×108IU·mg-1.
关怡新潘海学姚善泾
关键词：重组人Γ-干扰素包涵体蛋白质复性
核糖核酸酶A的稀释复性及其荧光结构表征的研究
随着基因工程技术的发展,DNA重组技术大量应用于蛋白质的异源表达。但是,许多异源表达产物通常是错误折叠的并聚集成团,以不溶性的包涵体形式存在于细胞之中。对蛋白质分子的折叠过程的研究,不仅可以阐明蛋白质分子的氨基酸序列与其...
谭培生罗曼关怡新姚善泾
文献传递
重组二硫键异构酶的纯化及其协助蛋白质重折叠研究
＜正＞二硫键异构酶（Disulfide bond formation protein A,DsbA）存在于大肠杆菌周质腔中,具有很强的氧化性,分子量约为23kD。二硫键的形成在蛋白质的折叠过程中是一个限速步骤,DsbA能...
罗曼徐立仁关怡新姚善泾
文献传递
稀释复性法体外复性重组牛凝血酶原-2包涵体
2005年
对重组牛凝血酶原-2包涵体的体外重折叠复性进行了研究。凝血酶原-2是α-凝血酶生成过程中的一个最小的单链中间前体。重组牛凝血酶原-2在E.coli中高效表达并形成包涵体,经2.5mol?L?1脲和0.7%Triton X-100洗涤,再用8mol?L?1脲和0.3mol?L?1DTT溶解后,得到了包涵体裂解液。研究优化了体外复性溶液,其组成为含2.7mol?L?1脲、0.6mmol?L?1GSSG、GSSG/GSH0.9、0.1%PEG6000和0.5mol?L?1L-Arg、pH7.4Na3PO4缓冲液。牛凝血酶原-2复性后经透析,再被Echis Carinatus Snake Venom激活,转化为有活性的α-凝血酶,其总活力可达2948U?mL?1。结果表明稀释复性法可用于重组牛凝血酶原-2包涵体的体外重折叠复性。
陈建梁关怡新崔志芳姚善泾
关键词：复性包涵体
重组二硫键异构酶在大肠杆菌中表达条件的统计优化被引量：4
2005年
二硫键形成蛋白A (disulfidebondformationproteinA ,DsbA)是大肠杆菌周质胞腔中辅助多种含有二硫键的蛋白质正确折叠并具有生物学活性的一种二硫键异构酶.通过统计实验设计的方法将生产重组DsbA的发酵过程进行了优化.首先通过Plackett Burman设计挑选出了对DsbA表达量影响较大的四个因素,然后再利用杂合设计进行实验,并通过拟合得到了响应曲面函数,但该函数的驻点是鞍点,因此不具有全局的极值.最后通过约束优化得到了较佳的实验点,在该实验点下DsbA的表达量比基本培养条件下提高了5 0 .14 % .
罗曼关怡新姚善泾
离子交换层析复性重组人γ-干扰素折叠二聚体的形成被引量：1
2006年
SP Sepharose Fast Flow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用尿素梯度法进行重组人γ-干扰素包涵体蛋白质的复性实验.结果表明,尿素梯度离子交换层析法能有效地复性重组人γ-干扰素包涵体,复性后的重组人γ-干扰素的纯度达95%,蛋白收率达54%,比活为7.5×105IU?mg-1.以Superdex 75凝胶作为体积排阻层析介质,对离子交换层析复性的样品进行分析,表明离子交换层析复性的样品中没有重组人γ-干扰素聚集体存在.荧光光谱分析表明重折叠的重组人γ-干扰素的构象接近于其天然二聚体构象.
靳挺关怡新姚善泾
关键词：重组人Γ-干扰素包涵体复性离子交换层析荧光光谱分析
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