国家高技术研究发展计划(2006AA02A226)
- 作品数:6 被引量:12H指数:2
- 相关作者:李越希管文燕李琳王正茂张庶民更多>>
- 相关机构:中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京医科大学中国药品生物制品检定所更多>>
- 发文基金:国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- HSV1gD及HSV2gD两种糖蛋白真核表达载体的构建及表达
- 单纯疱疹病毒(HSV)感染人体发病率高,复发率也高,对人体危害严重,可导致不孕、新生儿死亡.本文已用原核系统表达了HsvgD1及HSVgD2两种蛋白,为了使得到具有更好的生物学活性的HSV1gD及HSV2gD重组蛋白,将...
- 李越希吕敏潘明洁戚菁王正茂潘英
- 关键词:疱疹病毒糖蛋白真核表达基因序列
- Ⅱ型单纯疱疹病毒疫苗的研究进展被引量:2
- 2010年
- Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-2)是一种主要引起人类生殖器疱疹的病原体,在世界范围内广泛流行,不发达国家和地区尤为严重。HSV-2感染不仅严重威胁人类健康,同时也造成大量的经济损失。对HSV-2疫苗的研究已开展多年,历经了灭活疫苗、减毒活疫苗、重组亚单位疫苗、肽疫苗、DNA疫苗等多个阶段,并取得了一定进展,然而到目前为止,全球仍无一种HSV-2疫苗被批准上市。本文对近年来HSV-2疫苗的研究进展作一综述。
- 张华捷张庶民
- 关键词:疱疹病毒2型疫苗亚单位疫苗DNA
- 真核细胞表达单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白B及其抗原性与免疫原性分析
- 2010年
- 为在真核细胞中表达并纯化I型单纯疱疹病毒(HSV I)包膜糖蛋白gB,并分析其抗原性和免疫原性,化学合成了包膜糖蛋白gB1胞外区基因片段,构建真核表达载体,并转染至HEK293细胞,表达的蛋白用羊抗HSV1+HSV2血清作为一抗,用ELISA检测其抗原性;用纯化的gB1蛋白免疫昆明小鼠,观察诱发抗体产生的时间及其效价,并用ELISA和Western blot检测小鼠抗gB1多克隆抗体特异性识别重组gB1抗原的能力,评价其免疫原性。结果显示在HEK293细胞中成功表达重组gB1蛋白,ELISA证实羊抗HSV1+HSV2多抗能够识别重组gB1蛋白;重组gB1蛋白免疫小鼠7周后,小鼠血清中多克隆抗体效价达到5×103,表明在真核细胞中高效表达并纯化的重组gB1蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,为HSV检测试剂和疫苗研究提供了理论基础。
- 王正茂李琳管文燕李越希
- 关键词:单纯疱疹病毒真核表达抗原性免疫原性
- HSV1gD胞外区抗原性分析及表达鉴定
- 单纯疱疹病毒(HSV)是危害人类健康的常见病原体,本文通过计算机分析单纯疙疹病毒1型糖蛋白D(HSV1gD)胞外区的抗原性,筛选出抗原性强的亲水性蛋白片段,选用真核和原核均偏爱的密码子,化学合成基因片段。利用DNA重组技...
- 潘英李越希吕敏潘明洁戚菁王正茂
- 关键词:单纯疱疹病毒抗原性分析基因表达结合蛋白
- 单纯疱疹病毒1型糖蛋白B胞外区基因片段的克隆、表达及初步鉴定被引量:1
- 2008年
- 构建单纯疱疹病毒1型糖蛋白B(HSV1gB)胞外区基因片段的重组原核表达质粒,并获得HSV1gB胞外区基因的表达。选用真核和原核细胞均偏爱的密码子,化学合成含信号肽序列的HSV1gB蛋白胞外区基因序列,用PCR方法扩增编码HSV1gB胞外区1~696aa的基因,利用DNA重组技术将其定向插入到原核表达载体pGEX4T-2上,转化大肠杆菌TG1菌株,经IPTG诱导表达及SDS-PAGE鉴定分析。SDS-PAGE检测显示,表达的HSV1gB/GST融合蛋白分子质量为96ku。利用亲和层析方法,纯化获得了表达的目的蛋白。ELISA结果表明表达产物具有较好的抗原性和特异性。可溶性重组HSV1gB蛋白的表达成功为单纯疱疹病毒亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 吕敏潘明洁杨华凤李越希
- 关键词:单纯疱疹病毒克隆
- 单纯疱疹病毒1型US12基因siRNA筛选及其对病毒增殖的影响被引量:2
- 2011年
- 目的:筛选高效沉默单纯疱疹病毒1型(HSV-1)US12基因的siRNA,研究siRNA沉默US12基因后对HSV-1增殖的影响。方法:构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,设计并化学合成3对靶向US12基因的siRNA,与pEGFP-N1-US12融合表达质粒共转染Vero细胞,流式细胞术筛选高效抑制pEGFP-N1-US12融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对细胞内US12 mRNA表达水平的抑制效果,空斑减数实验评价siRNA对HSV-1增殖的抑制效果。结果:共转染实验筛选出高效抑制pEGFP-N1-US12融合蛋白的siR-NAS121、siRNAS122及siRNAS123。3对siRNA均能显著降低感染细胞US12 mRNA的表达水平,但空斑减数实验均未发现3对siRNA对HSV-1的增殖有显著抑制效果。结论:成功构建pEGFP-N1-US12融合表达质粒,筛选到高效抑制US12基因表达的3对siRNA,但是对病毒的体外增殖无显著影响,表明US12表达的立即早期蛋白ICP47的功能可能与HSV-1体外增殖无直接相关。
- 李深任哲王巧利向阳飞王一飞胡巢凤戚仁斌陆大祥张庶民张佩琢
- 关键词:SIRNARNA干扰单纯疱疹病毒1型
- 单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D胞外区的真核表达及生物学活性分析被引量:7
- 2010年
- 单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)包膜糖蛋白D(glycoprotein D,gD)是HSV的结构蛋白之一,具有重要抗原表位,是目前疫苗研究的热点。为了分离纯化HSV gD1糖蛋白胞外区片段并对其生物学活性进行分析,本研究将化学合成的gD1胞外区基因片段克隆至真核表达载体pCEP4,重组质粒转染HEK293细胞进行瞬时表达,产物经Western blotting检测后用亲和层析法进行分离纯化,ELISA检测其抗原性。以纯化的重组蛋白作为抗原免疫小鼠,ELISA测血清特异性抗体效价以评价其免疫原性。构建的重组质粒经测序显示基因序列完全正确。表达产物的Western blotting分析发现,在相对分子量约46kDa处有外源蛋白表达,与预期蛋白带一致。用Ni柱得到了纯化的重组gD1蛋白,ELISA检测显示其具有良好的抗原性,免疫小鼠7周后血清中抗体效价达到5×103。重组gD1蛋白的抗原性及免疫原性分析为HSV检测试剂和基因重组亚单位疫苗的研制提供了实验依据。
- 王正茂李琳管文燕李越希
- 关键词:单纯疱疹病毒真核表达抗原性
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D胞外区片段在哺乳动物细胞中的表达及其免疫活性
- 2011年
- 目的在哺乳动物细胞中表达单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus type-2,HSV-2)糖蛋白D(GlycoproteinD,gD)胞外区片段,并分析其免疫活性。方法化学合成HSV-2 G株gD蛋白胞外区片断的基因序列gDt,以pCEP4作为表达载体,构建N-末端带His标签的重组表达质粒pCEP4-gDt,转染至HEK293细胞进行表达。表达的蛋白采用镍离子柱亲和层析纯化,ELISA法检测目的蛋白的抗原性。以纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多抗血清,间接ELISA法检测效价。结果重组表达质粒经PCR、双酶切和DNA测序证实构建正确;表达产物经Western blot分析,在相对分子质量约46 000处可见目的蛋白条带;纯化的重组蛋白浓度约为45μg/ml,经ELISA检测证实具有良好的抗原性,免疫小鼠5周后,血清中特异性抗体效价达5×103。结论已在哺乳动物细胞中表达了HSV-2 gD胞外区片段,其具有良好的抗原性和免疫原性,为HSV基因重组亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 管文燕王正茂李琳李越希
- 关键词:单纯疱疹病毒哺乳动物细胞免疫活性