广东省自然科学基金(S2012010010824)
- 作品数：10 被引量：23H指数：4
- 相关作者：黄湘谭家余陈敬林袁春雷李冬秀更多>>
- 相关机构：南方医科大学附属中山博爱医院南方医科大学南方医科大学附属中山市博爱医院更多>>
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- HSPC238相互作用蛋白RPL5的初步筛选
- 2015年
- 目的:构建HSPC238诱饵载体,筛选与HSPC238相互作用的目标蛋白。方法:基因合成法合成HSPC238基因,sfi IA和sfi IB双酶切后与pGBKT7诱饵载体连接,获得诱饵质粒pGBKT7-HSPC238,经测序鉴定后与酵母双杂交空质粒pGBKT7共同转化到酵母菌株AH109,在营养缺陷培养基中观察pGBKT7-HSPC238的自激活作用,进一步从人胎肝c DNA文库中筛选与HSPC238相互作用的目标蛋白。结果:诱饵载体pGBKT7-HSPC238构建成功,经表型筛选检测无自激活作用,经酵母双杂交技术结合文献分析,从人胎肝c DNA文库中初步筛选发现核糖体蛋白L5(Ribosomal protein L5,RPL5)可能是HSPC238相互作用的目标蛋白之一。结论:成功构建pGBKT7-HSPC238诱饵质粒载体,且经酵母双杂交技术结合文献分析发现RPL5可能是与HSPC238相互作用的目标蛋白之一。
- 陈敬林黄湘谭家余钟裕恒万志丹
- 关键词：酵母双杂交相互作用蛋白
- HSPC238对HMOX1、RPS27a、MT2A、UBB调节的初步研究被引量：8
- 2016年
- 目的:探讨HSPC238过表达或低表达对目标蛋白(HMOX1、MT2A、UBB、RPS27a)的调节作用及其调节途径。方法:分别构建HSPC238的干扰载体及高表达载体,脂质体法转染HEPG2细胞株,RT-PCR、Western blot检测HSPC238及目标蛋白的mRNA、蛋白的表达量;进一步用目标蛋白的高表达质粒分别转染低表达及高表达HSPC238的HEPG2细胞株,实验组另以蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞,镍柱纯化目标蛋白,以HSPC238做免疫印迹,检测目标蛋白累积情况。结果:外源性干扰HSPC238后HMOX1、MT2A、RPS27a表达下调较明显,外源性过表达HSPC238后MT2A、UBB、RPS27a表达水平明显上调;目标蛋白的高表达质粒分别转染低表达及高表达HSPC238的HEPG2细胞株,实验组以蛋白酶体抑制剂MG132处理细胞后,与对照组比较,泛素化的目标蛋白条带明显增加。结论:过表达HSPC238可上调MT2A、UBB、RPS27a的表达,干扰HSPC238可下调HMOX1、MT2A、RPS27a的表达;HSPC238可能通过泛素蛋白酶体途径(Ubiquitin-proteasome pathway,UPP)对目标蛋白发挥调节作用。
- 谭家余黄湘陈敬林钟裕恒
- pCDNA3.1-MT2A真核表达载体的构建及亚细胞定位被引量：3
- 2014年
- 目的:构建pCDNA3.1-MT2A真核表达载体并观察其在293T和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法:使用基因合成法合成MT2A基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3.1(+)载体的BamHⅠ和NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。将鉴定正确的pCDNA3.1-MT2A质粒采用脂质体法转染293T和SMMC7721细胞株,激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况。结果:pCDNA3.1-MT2A重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实,目的基因MT2A的序列完全正确,真核表达载体构建成功,激光共聚焦观察发现该重组质粒表达于293T和SMMC7721细胞的胞质中。结论:成功构建pCDNA3.1-MT2A融合基因并进行真核表达,发现MT2A主要定位于293T和SMMC7721细胞的细胞质中。本研究为探讨MT2A在肝癌细胞内的功能奠定了基础。
- 谭家余陈敬林黄湘李冬秀袁春雷万志丹
- 关键词：细胞定位
- PSMA7对A549细胞表面黏附分子表达的影响被引量：1
- 2014年
- 目的探讨PSMA7表达量的变化对A549细胞表面黏附分子ICAM-1,VCAM-1和CD44表达的影响。方法采用流式细胞仪分别检测高表达PSMA7的A549细胞[pcDNA3.1(-)/PSMA7组]和低表达PSMA7的A549细胞(shPSMA7组)表面黏附分子ICAM-1,VCAM-1和CD44的表达情况。结果与高表达阴性对照组[pcDNA3.1(-)组]相比,pcDNA3.1(-)/PSMA7组的ICAM-1(t=86.325,P=0.000)和VCAM-1(t=16.337,P=0.000)的表达量均显著降低,CD44表达量则无明显变化(t=-0.545,P=0.615),而与低表达阴性对照组(shNC组)相比,shPSMA7组ICAM-1(t=-119.827,P=0.000)和VCAM-1(t=-26.68,P=0.000)表达量均显著增高,CD44表达量则无明显变化(t=-848,P=0.444)。与pcDNA3.1(-)组相比,pcDNA3.1(-)/PSMA7组穿膜侵袭细胞的数量明显减少(t=3.553,P=0.024),而shPSMA7组明显高于shNC组(t=-3.207,P=0.033)。结论高表达或干扰PSMA7可影响A549细胞表面黏附分子ICAM-1,VCAM-1的表达,提示PSMA7可能因此参与肺腺癌细胞的侵袭和转移。
- 黄湘王莹袁春雷谭家余
- 关键词：A549细胞黏附分子
- RPL5蛋白重组质粒的构建、表达及细胞内定位
- 2015年
- 目的构建重组质粒载体pc DNA3.1-RPL5,观察核糖体蛋白L5(RPL5)在293T、Hep G2和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法使用基因合成法合成RPL5基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,扩增后的目的基因双酶切后连接至pc DNA3.1载体的Bam HⅠ和NotⅠ位点之间,从而构建重组质粒pc DNA3.1-RPL5。将后者转化DH5α大肠杆菌,培养后挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳、测序比对等鉴定。采用脂质体法将鉴定正确的重组质粒转染至293T、Hep G2和SMMC7721细胞株,激光共聚焦显微镜观察RPL5在此3种细胞中的表达和定位情况。结果重组质粒pc DNA3.1-RPL5经酶切电泳及DNA测序比对证实,目的基因RPL5的序列完全正确,重组质粒载体构建成功。激光共聚焦观察发现RPL5主要表达于293T、Hep G2和SMMC7721细胞的胞质中。结论成功构建pc DNA3.1-RPL5融合基因并在293T、Hep G2和SMMC7721细胞中表达,证实RPL5主要表达在真核细胞的细胞质中,为进一步探讨RPL5的生物学功能奠定了基础。
- 陈敬林黄湘谭家余钟裕恒李冬秀万志丹
- 关键词：重组质粒细胞定位
- HSPC238对肝癌细胞中RB基因表达的影响被引量：4
- 2016年
- 目的观察HSPC238对肝癌细胞中RB mRNA和pRb蛋白水平的影响。方法将PcDNA3.1-HSPC238质粒和PLL3.7-HSPC238干扰载体分别转染HepG2细胞,用实时荧光定量PCR的方法检测RB mRNA的表达量;采用Western blotting法检测pRb蛋白的表达。结果和对照组相比,转染高表达HSPC238载体时,HepG2细胞中RB的mRNA水平和pRb表达量也增加;相反地,和对照组相比,转染低表达HSPC238载体时,HepG2细胞中RB的mRNA水平和pRb蛋白的表达量也减少。以上结果差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在HepG2细胞中HSPC238对RB基因的表达存在正向调控作用。
- 袁春雷谭家余钟裕恒黄湘陈敬林
- 关键词：RB基因肝癌细胞HEPG2
- 血清AFU对原发性肝癌诊断价值的meta分析被引量：8
- 2015年
- 目的用meta分析的方法评价血清α-L-岩藻糖苷酶(AFU)在原发性肝癌(PHC)诊断中的价值。方法检索Cochrane Library、Pub Med、web of knowledge(Medline、BIOSIS Previews)、Springer link、Science Direct数据库,检索时间为1997年1月至2013年12月。中国生物医学文献数据库(CBM)、中国知网、万方、重庆维普等数据库,检索时间为19841月年至2013年12月。检索语言限定为中文和英文。收集研究血清AFU对PHC诊断价值的相关文献,对符合纳入标准的文献进行质量评价,采用meta-Disc 1.4软件进行分析,综合评价血清AFU在原发性肝癌诊断中的价值。结果共纳入20篇文献(中文15篇,英文5篇)。分析病例组2 114例,对照组5 718例。对入选20篇文献进行异质性检验,提示所纳入文献具有非阈值效应引起的异质性,因此选用随机效应模型进行meta分析。汇总灵敏度为0.77;汇总特异度为0.87;汇总阳性似然比为5.37;汇总阴性似然比为0.28;诊断比值比为20.47;受试者工作曲线(SROC)曲线下面积为0.87。结论血清AFU在PHC的诊断中具有较高的灵敏度和特异度,对其临床诊断具有较高的价值。
- 李冬秀陈敬林黄湘谭家余袁春雷万志丹
- 关键词：原发性肝癌血清Α-L-岩藻糖苷酶META分析
- RPS27a蛋白重组质粒的构建及其在肝癌细胞株的定位
- 2017年
- 目的:构建pcDNA3.1-RPS27a重组质粒载体并观察其在HepG2和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法:使用基因合成法合成RPS27a基因,将扩增后的目的基因连接至pcDNA3.1载体。转化DH5α大肠埃希菌后,进行质粒抽提然后电泳及测序鉴定。将鉴定后的pCDNA3.1-RPS27a质粒分别转染HepG2和SMMC7721细胞株,通过激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况。结果:pCDNA3.1-RPS27a重组质粒构建成功。通过激光共聚焦显微镜观察发现RPS27a主要表达于HepG2和SMMC7721细胞的胞质中。结论:pCDNA3.1-RPS27a载体构建成功,证实了RPS27a主要表达于HepG2和SMMC7721细胞的细胞质中。
- 钟裕恒黄湘王莹郑国兵李红艳张艳芳
- 关键词：肝肿瘤重组质粒
- 过表达血红素加氧酶-1、金属硫蛋白2A、泛素蛋白B、核糖体蛋白S27a对HepG2细胞增殖和侵袭力的影响
- 2017年
- 目的研究过表达目标蛋白(HMOX-1、MT2A、UBB、RPS27a)对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭力的影响。方法用目标蛋白的过表达质粒转染HepG2细胞株,用空载体转染HepG2作为对照组。应用MTT法测定细胞体外增殖能力;Transwell实验检测各组细胞的体外侵袭力。结果 MTT法结果提示过表达目标蛋白后,HepG2细胞株增殖能力较对照组明显增强,差异有统计学意义(P<0.05);Transwell实验结果表明,过表达HMOX1、RPS27a后,HepG2细胞侵袭能力较对照组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);过表达MT2A、UBB后,HepG2细胞侵袭能力与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论过表达目标蛋白可增强HepG2细胞的增殖和侵袭能力。
- 吴学威钟裕恒黄湘谭家余李冬秀
- 关键词：HEPG2细胞血红素加氧酶-1
- pcDNA3.1-HMOX1重组质粒载体的构建与鉴定被引量：5
- 2015年
- 目的构建pc DNA3.1-HMOX1重组质粒载体。方法使用基因合成法合成HMOX1基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,将扩增后的目的基因双酶切连接至pc DNA3.1载体的Bam HⅠ和NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。结果 p CDNA3.1-HMOX1重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实,目的基因HMOX1的序列完全正确,重组质粒载体构建成功。结论成功构建p CDNA3.1-HMOX1融合基因并在DH5α大肠杆菌内表达,为进一步探讨HMOX1的生物学功能奠定了基础。
- 陈敬林黄湘谭家余李冬秀袁春雷万志丹
- 关键词：重组质粒
