国家自然科学基金(81071436)
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
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- OCIL shRNA表达载体的构建及其对成骨细胞RANKL/OPG基因表达的调节被引量：1
- 2012年
- 目的:探讨成骨细胞中破骨细胞分化抑制因子(OCIL)基因敲减后护骨素(OPG)和核因子κB受体活化因子配基(RANKL)mRNA的表达水平及其对破骨细胞分化的影响。方法:构建OCIL特异性shRNA表达载体并转染至细胞,分为pRNAT-N1组、pRNAT-N2组、pRNAT-N3组和阴性对照转染组。考察与阴性对照转染组比较,各组对OCIL mRNA水平的抑制率。将对OCIL mRNA干扰效果最佳的shRNA表达载体(pRNAT-N1组)和对照载体pRNAT-U6.1/Neo/CTL(control组)分别瞬时转染UMR106细胞,考察2组RANKL和OPG表达水平。各转染组条件培养基干预骨髓细胞后,观察PBS+control shRNA(vehicle组)、PTH+control shRNA(PTH组)及PTH+OCIL shRNA(shRNA组)破骨细胞样细胞(OLC)数量。结果:(1)与阴性对照转染组比较,pRNAT-N1、pRNAT-N2、pRNAT-N3对OCIL mRNA水平抑制率分别为64%、28%和59%。(2)pRNAT-N1转染UMR106成骨细胞后,RANKLmRNA表达水平明显升高,而OPG mRNA表达水平明显降低,转染后24hRANKL∶OPG比值较control组升高5.1倍。(3)vehicle组、PTH组及shRNA组OLC数分别为(1.83±0.75)个/孔、(49.67±6.77)个/孔及(65.50±7.34)个/孔,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RANKL/OPG系统参与了OCIL对破骨细胞分化的调节作用。
- 王君郑纺王宝利
- 关键词：成骨细胞骨保护素核因子ΚB受体活化因子基因表达
- Survivin基因启动子的克隆及在乳腺癌细胞MCF7中的特异转录活性研究
- 2011年
- 目的研究Survivin基因启动子在乳腺癌细胞MCF7中的特异转录活性。方法采用非限制酶方法获得具有酶切黏性末端的Survivin最小启动子,将其克隆到含有报告基因增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescent protein,EGFP)的载体pEGFP-1和含有荧光素酶Luciferase的质粒载体pGL3-Basic,经脂质体分别转染人正常乳腺上皮细胞系HBL-100和乳腺癌细胞MCF-7,荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,同时测定2种细胞中荧光素酶表达的差异。结果 Smvivin启动子在MCF7细胞中呈现高转录活性;而在HBL100细胞中转录活性极低。结论 Survivin启动子在肿瘤细胞MCF7中具有很强的特异性,为进一步开发肿瘤特异性基因治疗奠定了实验基础。
- 金红婷张珊珊王宝利李晓霞
- 关键词：乳腺肿瘤
- 1,25-二羟基维生素D_3抑制脂肪细胞分化作用的研究被引量：5
- 2013年
- 目的研究1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]对脂肪细胞分化的影响及其机制。方法以间充质干细胞系C3H10T1/2为研究对象,将其分为6组,分别为对照组、诱导分化组和4个不同剂量的1,25(OH)2D3处理组。其中对照组加入溶媒,诱导分化组加入脂肪细胞诱导分化试剂,1,25(OH)2D3处理组除了加入脂肪细胞诱导分化试剂外,予以10-9、10-8、10-7、10-6mol/L 1,25(OH)2D3处理。处理后5 d进行油红O染色,RT-PCR检测脂肪细胞特异性转录因子和Wnt/β-catenin信号通路相关因子表达水平,Western blot检测β-catenin蛋白水平。结果1,25(OH)2D3能够强烈抑制脂肪细胞生成,阻断脂肪细胞特异性转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)α及脂肪细胞表征因子aP2 mRNA表达,下调Wnt/β-catenin信号通路抑制因子分泌性卷曲相关蛋白1(sFRP1)mRNA,上调β连环素(β-catenin)蛋白水平。结论1,25(OH)2D3强烈抑制脂肪细胞分化,该作用可能与其激活Wnt/β-catenin信号通路有关。
- 关晓慧王君郭菲周杰王宝利
- 关键词：脂细胞骨化三醇Β连环素
