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国家科技支撑计划(2007BAD40B05): 作品数：38 被引量：91H指数：5; 相关作者：李建华宫鹏涛张西臣王艳华张德林更多>>; 相关机构：吉林大学中国农业科学院兰州兽医研究所中国农业科学院上海兽医研究所更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划公益性行业(农业)科研专项上海市科技兴农重点攻关项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学天文地球更多>>

免疫信息学在抗原虫病疫苗研发中的应用进展被引量：1: 2010年; 陈兆国冯新港米荣升黄燕林矫矫; 关键词：原虫病疫苗研发微小隐孢子虫基因组计划约氏疟原虫

应用三磷酸核苷水解酶基因检测弓形虫方法的建立被引量：2: 2010年; 用Primer Explorer V4软件针对弓形虫三磷酸核苷水解酶(NTPase)基因设计了6条环介导等温扩增(LAMP)特异性引物,建立弓形虫LAMP反应体系,并进行特异性和敏感性试验。结果显示,用该反应体系30 min即可检测出弓形虫NTPase基因,产生瀑布状的特异性条带,检测极限为20 copies,敏感性比PCR高10倍。与犬新孢子虫、鹦鹉热衣原体、柔嫩艾美耳球虫、吕氏泰勒虫、羊巴贝斯虫未定种和牛巴贝斯虫间无交叉反应,且重复性良好。应用此方法,可以在攻虫后第2天于试验猪血液中检测出弓形虫,比PCR方法提前2 d。表明将弓形虫NTPase基因作为环介导等温扩增检测弓形虫的目的基因,具有特异性强、敏感性高的特点,是快速诊断弓形虫病的一种新方法。; 王萌王艳华蔡志杰付宝权李文卉张德林; 关键词：弓形虫环介导等温扩增

微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白抗体检测ELISA方法的建立被引量：1: 2011年; 为建立快捷的含病毒隐孢子虫的检测方法,本研究利用已构建的微小隐孢子虫病毒衣壳蛋白重组表达质粒表达并纯化重组蛋白,建立以该重组衣壳蛋白为包被抗原检测抗体的间接ELISA检测方法。经优化后间接ELISA的最佳条件为:抗原包被浓度为0.25μg/孔,被检血清稀释度为1∶200,酶标二抗稀释度为1∶2000,封闭液为含5%脱脂奶粉的PBST溶液。该方法检测安氏隐孢子虫阳性血清,柔嫩艾美尔球虫阳性血清,蓝氏贾第虫阳性血清,弓形虫阳性血清与微小隐孢子虫阳性结果均为阴性。该方法灵敏度为1∶1600,特异性较强且具可重复性,可用于含病毒隐孢子虫的抗体检测及流行病学调查。; 刁玉梅宫鹏涛李巍苏利波黄祥盛高华义李赫胡进平李建华张西臣; 关键词：微小隐孢子虫衣壳蛋白间接ELISA

利用核糖体展示技术筛选微小隐孢子虫黏附相关基因研究: 本研究首先采用TRIZOL方法提取总RNA,后按照Poly A mRNA Isolation SystemⅢ剂盒说明书分离纯化mRNA及cDNA的合成,将合成的双链cDNA与Eco RI酶切并与去磷酸化的PGEM载体连接...; 肖丹殷驰李建华宫鹏涛李淑红杨举张西臣; 文献传递

应用巢式PCR检测隐孢子虫被引量：9: 2010年; 应用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)建立了一种检测隐孢子虫(Cryptosporidium)的方法。试验中隐孢子虫卵囊纯化采用庶糖密度梯度离心法,以液氮-热水浴反复冻融及酚-氯仿抽提冷乙醇沉淀法制备模板DNA,根据隐孢子虫18S rRNA序列高度保守区设计2对引物,建立Nested PCR诊断方法。该方法特异性强,可检出牛源微小隐孢子虫(C.parvum)、羊源微小隐孢子虫(C.parvum)、牛源安氏隐孢子虫(C.andersoni)、鸡源贝氏隐孢子虫(C.baileyi)及猪源隐孢子虫(C.suis);敏感性高,该方法最低核酸DNA检测量达到10fg。初步应用结果表明,所建立的Nested PCR方法适合于隐孢子虫病的诊断和分子流行病学调查。; 李巍吴康张西臣李建华张国才李淑红宫鹏涛杨举; 关键词：隐孢子虫 PCR

弓形虫代谢分泌抗原对猪IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α表达水平的影响: 为了探索弓形虫代谢分泌抗原(E/SA)免疫仔猪后,对机体白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,将仔猪随机分为6组,每组5只,分别为E/SA...; 蔡志杰芦赟张燕丽曹丽艳王艳华付宝权李文卉张德林; 文献传递

应用巢式PCR-RFLP方法鉴别我国常见的几种隐孢子虫被引量：5: 2011年; 应用巢式聚合酶链反应(Nested PCR)—限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(Cryptosporidiumparvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)、贝氏隐孢子虫(C.baileyi)和猪隐孢子虫(C.suis)的鉴别进行了研究。结果显示:牛源C.parvum、羊源C.parvum、C.suis、C.andersoni和C.baileyi扩增产物片段大小分别为212,213,213,213,210 bp;扩增产物先后经TaqⅠ、BstUⅠ与MseⅠ酶切,根据酶切后形成的不同酶切图谱可以鉴别C.parvum、C.suis、C.andersoni和C.baileyi。该研究为我国隐孢子虫的分类和隐孢子虫病的分子流行病学调查提供了新的方法。; 李巍张西臣李建华李淑红宫鹏涛杨举; 关键词：隐孢子虫

五株隐孢子虫18S rRNA部分基因克隆和序列分析: 2010年; 设计Nested PCR引物扩增牛源微小隐孢子虫Cryptospordium parvum、羊源微小隐孢子虫C. parvum、牛源安氏隐孢子虫C. andersoni、鸡源贝氏隐孢子虫C. baileyi及猪源隐孢子虫C. suis 18S rRNA基因突变区,PCR产物经克隆测序,其片段大小分别为212、213、213、213和210 bp.将测得的序列用DNAStar软件分析并与NCBI数据库中相同与相近种株序列进行相似性比较, 进行相似性分析并用TREECON软件绘制系统发育进化树.结果表明测得的5株隐孢子虫与各自相同种相似性为98.1%～100%,与其他种相似性为90.1%～98.6%.分析显示在此突变区设置特异酶切位点能区分开C. parvum, C. andersoni, C. baileyi与C. suis,位点分别是TaqI、BstUI、MseI.本研究为我国隐孢子虫分类、分子流行病学研究提供了新的方法.; 于师宇李巍宫鹏涛张西臣李建华李春雨苏利波刁玉梅; 关键词：微小隐孢子虫 RRNA

隐孢子虫鼠基因型CP15基因真核表达质粒的构建及在Hela细胞中的表达被引量：2: 2011年; 为了构建隐孢子虫鼠基因型CP15基因的重组真核表达质粒,检测其重组质粒在Hela细胞中的表达。采用PCR方法,从pMD18-T-CP15菌液中扩增了CP15及含寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)的CP15基因,酶切测序鉴定;将该基因亚克隆至pVAX1载体中,用脂质体介导的方法转染Hela细胞,RT-PCR法、间接免疫荧光法和Western-blot法检测表达蛋白的生物学活性。结果显示,扩增了约360 bp和380 bp的隐孢子虫鼠基因型CP15和含CpG-ODN的CP15基因,酶切测序鉴定成功构建了pVAX1-CP15和含有CpG-ODN的重组真核表达质粒pVAX1-C-CP15。转染Hela细胞后,用RT-PCR法检测到外源基因有效的转录,用间接免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot法检测到外源基因的有效表达。结果表明,构建的重组真核表达质粒能够在Hela细胞中成功转录和表达,并且表达产物具有良好的免疫活性。这为下一步深入研制具有高保护性的隐孢子虫核酸疫苗奠定了基础。; 苏庆美何生虎米荣升张国恩黄燕周鹏秦培兰呼高伟陈兆国; 关键词：真核表达质粒 HELA细胞

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