国家高技术研究发展计划(2006AA02A121)
- 作品数：20 被引量：59H指数：5
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- 新生小牛皮肤的形态学和生物力学特点及脱细胞方法探索被引量：6
- 2012年
- 目的通过新生小牛与成人皮肤组织在形态学和生物力学性能方面的对比研究,寻找临床应用牛真皮基质的可能证据,并初步探索对牛真皮组织进行脱细胞处理的方法。方法收集新生小牛和成人背部全层皮肤标本,采用大体观察、HE染色、Masson三色染色、天狼猩红染色、Gomori醛复红染色、扫描电镜和透射电镜的方法,显微照相后进行形态学观察和图像分析软件的测量;采用力学生物材料试验机检测皮肤的力学性能。采用胰蛋白酶与去污剂的不同浓度和时间组合方式对牛真皮组织进行脱细胞处理,初步观察其脱细胞效果。结果新生小牛与人的皮肤比较,真皮和表皮的厚度均明显变薄,两者的比值显著减小;真皮内Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维分别较人真皮增多和减少,但真皮胶原纤维束的间隙率[(41.72±1.81)∶(40.66±1.40),P=0.467]和胶原纤维束粗细[(11.28±0.18)μm∶(10.88±0.66)μm,P=0.368]差异却没有统计学意义。扫描电镜观察可见新生牛真皮胶纤维束与人真皮胶原纤维束均较纤细,排列疏松,且有一定的孔隙分布;透射电镜显示新生牛真皮胶原原纤维横纹周期长度较人真皮短,但两者的胶原原纤维直径显著差异。生物力学检测示新生牛皮肤最大应力[(21.08±0.91)MPa]和杨氏模量[(82.12±1.23)MPa]均要明显高于人皮肤的最大应力[(12.76±1.60)MPa,P=0.001]和杨氏模量[(48.63±5.50)MPa,P=0.001],而最大应变却明显低于人真皮[(0.51±0.002)mm∶(0.75±0.028)mm,P=0.001]。脱细胞方法探索显示随着胰酶浓度的增加、处理时间的延长,新生牛真皮基质内细胞核成分越来越少,但对真皮胶原结构的破坏也越来越大。结论新生牛皮肤虽然在表皮与真皮厚度、真皮胶原类型比例以及生物力学上与人皮肤有明显差异,但真皮的胶原纤维束三维结构两者之间存在较大相似性。适当浓度和时间的胰蛋白酶组合可制备出空间结构和脱细�
- 陈博彭代智左海斌郑必祥周灵
- 关键词：皮肤组织学生物力学脱细胞真皮基质
- CCL20基因敲低型人永生化角质形成细胞克隆的体外生长特性观察被引量：1
- 2009年
- 采用MTT比色法、碘化丙啶染色法和直接免疫荧光双标记法分别观察4个CCL20基因敲低型人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)克隆(代号分别为Ⅱ～Ⅴ)的生长曲线、细胞周期以及表皮干细胞相关表型,预期筛选出体外生物学性状良好的表皮种子细胞克隆。结果显示,与未转染的HaCaT细胞(代号为Ⅰ)比较,Ⅲ～Ⅴ在体外培养第5、6天的光密度值显著降低;Ⅲ和Ⅳ的G2+M期显著增多;Ⅳ和Ⅴ表达CD49f^+CD71-的百分率显著升高,而表达CD49f^+CD71^+、CD71^+的百分率显著降低。可见,4个CCL20基因敲低型HaCaT细胞克隆中仅有Ⅱ表现出与未转染HaCaT类似的体外生长特性,该克隆有可能成为构建低免疫原性组织工程皮肤的表皮种子细胞。
- 何斌彭代智何升东周新刘敬王勇王丽华郑必祥左海斌
- 关键词：角质形成细胞细胞周期
- 生长因子促进创面愈合研究进展被引量：12
- 2010年
- 1生长因子（GF）的临床应用进展
GF是一类对靶细胞增殖和分化有调节作用的肽类，是体内重要信号分子，在调节生长发育、组织修复、肿瘤发生等多方面发挥重要作用。CF种类繁多，通常按照GF的受体（靶细胞）及特性将其分为EGF、Fb生长因子（FGF）、神经生长因子（NGF）、血小板源性生长因子（PDGF）和TGF等。GF自20世纪80年代开始应用于临床，其对创伤修复的促进作用逐渐明确。近年来，随着基因工程技术的成熟，
- 周俊峄罗高兴吴军
- 关键词：神经生长因子促进创面愈合血小板源性生长因子基因工程技术细胞增殖信号分子
- 组织工程皮肤细胞对朗格汉斯细胞表型的影响
- 2009年
- 目的:研究异体组织工程皮肤种子细胞(角质形成细胞、成纤维细胞)对朗格汉斯细胞的表型影响。方法:外周血单个核细胞在粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素4(IL-4)和转化生长因子β1(TGF-β1)的诱导下培养出朗格汉斯细胞。培养的朗格汉斯细胞与异体组织工程皮肤种子细胞共同培养后,检测其表型变化情况。随后将朗格汉斯细胞与淋巴细胞共培养后检测淋巴细胞的增殖程度。结果:诱导培养的朗格汉斯细胞低表达HLA-DR、CD80和CD86,不表达CD83。与异体组织工程皮肤种子细胞共培养后朗格汉斯细胞表型无明显变化,共培养后的朗格汉斯细胞无法刺激自体淋巴细胞增殖。结论:与异体组织工程皮肤种子细胞共培养后,朗格汉斯细胞仍保持不成熟的状态,这提示组织工程皮肤种子细胞免疫原性较低,移植后不易引起宿主的免疫排斥反应。
- 毕建军伍津津杨亚东朱堂友张才茂
- 关键词：组织工程皮肤角质形成细胞朗格汉斯细胞
- 人角质形成细胞复合异种脱细胞真皮基质三维培养的形态学观察
- 2009年
- 目的建立组织工程皮肤三维培养方法，了解人永生化KC株（HaCaT）复合异种ADM培养的组织形态学变化。方法采用改良法制备sD大鼠ADM，培养HaCaT。将处于对数生长期的HaCaT按2×10^5个／cm^2密度接种存ADM上浸没培养5d，再转为气液相培养5d。扫描电镜观察ADM及其复合HaCaT培养第1天和第5天的细胞生长情况，HE染色观察ADM及其复合HaCaT培养1、5、10d的组织学变化。结果ADM为白色，外观平整质地柔软，胶原束完整，未见细胞残留。HaCaT接种于ADM培养1d即附着并伸出伪足，5d融合成片，10d增长至3～6层并有向ADM内生长的趋势。结论SD大鼠ADM有利于HaCaT黏附及培养液渗透，可以在10d内获得复层组织工程皮肤。
- 朱崇涛彭代智王丽华何斌郑必祥周新罗海水王勇刘敬
- 关键词：真皮共同培养技术角质形成细胞形态学
- 汗腺样结构钙通道的初步研究
- 2009年
- 目的:探讨钙离子激动剂和阻滞剂对体外重建的汗腺样结构钙通道的影响作用。方法:酶消化法培养人汗腺上皮细胞,Matrigel中三维重建汗腺样结构,钙荧光探针Fluo-3对汗腺样结构染色,分别在汗腺样结构中适时加入钙离子激动剂和阻滞剂,激光共聚焦显微镜观察其细胞内游离钙离子浓度变化情况。结果:细胞外液钙浓度高时,加入氯化乙酰胆碱后,钙通道开放,细胞外钙内流,细胞内钙浓度明显增加;细胞外液钙浓度高时,先加入阿托品,5min后加入氯化乙酰胆碱,细胞内钙浓度无明显变化。结论:钙离子激动剂能促使汗腺样结构的钙通道开放,钙离子阻滞剂抑制汗腺样结构的钙通道开放。
- 周立奉伍津津雷霞路荣鲁元刚唐书谦杨桂红
- 关键词：钙通道
- 复方壳多糖组织工程皮肤活力测定的研究被引量：4
- 2008年
- 目的介绍一种快捷、简便、灵敏和准确的测定组织工程皮肤活力的方法。方法采用SYTO 13和溴化乙锭(ethid-ium bromide,EB)2种荧光核酸染色剂对冻存后组织工程皮肤进行染色,通过流式细胞计数仪及荧光显微镜下观察等方法计算活细胞。结果4℃条件下,组织工程皮肤冻存7d后表皮活力值为未冻存时的62.46%;冻存7d后真皮活力值为未冻存时的54.21%。结论SYTO/EB双重核酸染色法是测定组织工程皮肤活力的既简便又准确的方法。
- 贺旭伍津津杨桂红
- 关键词：组织工程皮肤冻存
- Jurkat T细胞质膜蛋白组学研究初探被引量：1
- 2009年
- 目的:分析Jurkat T细胞质膜蛋白质组成,并对这些质膜蛋白的生理学过程和功能进行初步分析,为进一步研究Jurkat T细胞膜蛋白功能奠定基础。方法:首先采用差异密度梯度离心法提取Jurkat T细胞膜蛋白,然后将提取出的膜蛋白根据分子量大小通过SDS-PAGE进行初步分离,再进一步将分离出的蛋白条带切下进行胶内酶解,酶解后的肽段通过液相-芯片-离子阱质谱技术进行鉴定和生物信息学分析,建立Jurkat T细胞质膜蛋白全谱图,并进一步通过GO(Gene Ontology)对这些质膜蛋白进行功能分析。结果:成功提取了Jurkat T细胞的膜总蛋白,并建立了Jurkat T细胞质膜蛋白全谱图,共鉴定出618个质膜蛋白,经GO注释分析,其中与结合功能相关的质膜蛋白有493个,与信号转导活性相关的有186个,具有酶催化活性的有166个,具有转运活性的有137个,有些还具有酶调节活性、结构分子活性或者运动活性等,功能尚不清楚的有49个。结论:通过差异密度梯度离心,结合一维SDS-PAGE和HPLC-CHIP-MS/MS,成功建立了Jurkat T细胞质膜蛋白全谱图,并通过GO注释,初步分析了这些蛋白的功能和生理学过程,为进一步研究Jurkat T细胞质膜蛋白的功能奠定了基础。
- 甘成军谭江琳胡婕王晓娟张翠华张晓容罗高兴贺伟峰吴军
- 关键词：JURKATT细胞
- 胎猪皮肤前体组织异种移植模型的研究被引量：2
- 2008年
- 目的探讨胎猪皮肤前体组织异种移植模型及移植后发育过程。方法取精确胎龄为56d的胎猪皮肤前体组织,分组进行移植,①背部创面模型组:制备成微粒皮后移植到BALB/c裸鼠背部创面,以人尸体皮覆盖;背部皮下模型组:制备成小张邮票皮,植入裸鼠背部皮下;耳廓皮下模型组:制备成微粒皮植入裸鼠耳廓皮下。各组于移植后观察其生长发育特性,并于移植后6周和12周取材行HE染色观察其组织结构形态。新生组织块大小采用双样本t检验。结果各模型的胎猪皮肤前体组织移植后均能存活并继续生长,背部创面模型组生长能力显著大于耳廓皮下模型组,新生皮肤组织均具有真皮和表皮,耳廓皮下模型的真皮附属器仅见毛囊(毛发),偶见皮脂腺,未见汗腺,但是背部创面模型组及背部皮下模型组不仅能发育成毛囊(毛发)、还见大量皮脂腺和汗腺。结论背部创面移植模型最适合于胎猪皮肤前体组织异种移植及移植后发育的研究。
- 黄正根吴军罗高兴甘成军程文广贾雄飞葛良鹏魏泓
- 关键词：贵州香猪BALB/C裸鼠异种移植
- 人脐血造血干细胞体外诱导朗格汉斯细胞的研究
- 2013年
- 目的采用人脐血CD34+细胞,经不同细胞因子组合诱导方案体外诱导培养朗格汉斯细胞(CD1a+细胞)并观察其产量及相关表型特点。方法联合应用人淋巴细胞分离试剂和CD34+磁珠分离和筛选人脐血CD34+细胞,以5种不同的细胞因子组合诱导方案,对分选出的CD34+细胞进行体外诱导培养,观察其生长形态变化、集落的形成,并对诱导培养第12天的CD34+细胞进行CD1a、HLA-DR等LC表型分子,以及CD40、CD80等共刺激分子表型检测。筛选出最佳的朗格汉斯细胞(Langerhans cells,LC)体外诱导方案。结果流式细胞术分析5种细胞因子方案体外诱导培养LC的结果显示,方案IV、V诱导培养12 d的CD1a+细胞百分率和CD1a+细胞数量均明显多于方案Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ;方案Ⅳ诱导培养12 d的HLA-DR+细胞百分率显著高于方案Ⅴ。结论利用细胞因子组合方案IV体外诱导磁珠分选的CD34+细胞,可以获得高产量的LC细胞,为研究其功能和发生机制提供足够的细胞。
- 王丽华彭代智刘敬周新王勇
- 关键词：朗格汉斯细胞人脐血造血干细胞细胞因子体外诱导培养流式细胞技术
