河北省科技厅博士基金(04547002D-9)
- 作品数：6 被引量：24H指数：3
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- 相关机构：河北医科大学第二医院河北医科大学更多>>
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- 树突状细胞疫苗在人源化裸鼠体内的抗肿瘤免疫保护作用
- 2007年
- 目的探讨树突状细胞(DCs)疫苗在人源化裸鼠体内的抗胃癌免疫保护作用。方法制备DCRNA疫苗;建立人源化裸鼠模型;15只人源化裸鼠随机分为DCRNA组、DCs组和PBS组,每组5只,分别用DCRNA、DCs和PBS皮下免疫注射2次,间隔1周,末次免疫后3天皮下接种胃癌细胞。各组裸鼠外周血人源性CD4(T细胞和CD8(T细胞的检测和观察GVHD反应。观察裸鼠瘤体积和瘤重。检测细胞因子IL-12和IFN-γ水平。结果各组HuPBTL-裸鼠外周血中均检测到人源性CD4(T细胞和CD8(T细胞,无GVHD反应。DCRNA组瘤体积明显小于DCs组和PBS组(P<0.05);DCRNA组瘤重明显小于DCs组和PBS组(P=0.0452、P=0.0004),但DCs组和PBS组差异无统计学意义(P=0.0618);DCRNA组抑瘤率(53.7%)显著高于DCs组(25.1%)(P<0.05)。DCRNA组IL-12和IFN-γ水平明显高于DCs组和PBS组(P<0.05、P<0.01)。结论HuPBTL腹腔注射,可成功构建裸鼠人细胞免疫功能;DC疫苗在人源化裸鼠体内能诱导产生较强的抗胃癌免疫保护作用。
- 李保东付泽娴马云龙薛平蔡建辉
- 关键词：树突状细胞裸鼠人源化细胞免疫
- 负载自体肿瘤抗原的成熟DC体外联合小剂量IL-2及IL-12增强CTL抗胃癌活性研究被引量：1
- 2011年
- 目的探讨在体外条件下负载自体胃癌细胞裂解物的成熟DC(matured dendritic cells loaded withautologous tumor lysates,TL-mDC)联合小剂量白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)及白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)增强细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)抗胃癌免疫效应。方法建立短期培养的原代胃癌细胞系作为靶细胞。负载自体胃癌细胞裂解物的成熟DC联合应用小剂量IL-2及IL-12体外刺激自体T细胞,制备胃癌特异性CTL。应用淋巴细胞增殖实验检测联合刺激后T细胞的增殖能力;应用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒检测CTL对肿瘤的特异性杀伤活性;应用逆转录聚合酶链反应法测定CTL.培养液中干扰素γ(interferon-γ,INF-γ的分泌水平。结果 TL-mDC体外联合小剂量IL-2、IL-12刺激组(组1),与单纯TL-mDC刺激组(组2)比较,具有高效刺激自体T细胞增殖的能力(P<0.01);2组分别与T细胞混合培养1周后,所获CTL上清液中INF-γ的浓度分别为(3200.00±172.57)ng/L(组1)、(2700.00±83.18)ng/L(组2),差异有统计学意义(P<0.01);CTL(组1)对自体胃癌细胞的杀伤率显著高于CTL(组2)(P<0.05),且CTL,(组1及组2)对自体胃癌细胞的杀伤率显著高于对2株异体胃癌细胞的杀伤率(P<0.01)。结论 TL-mDC体外联合小剂量IL-2及IL-12有效提高了CTL对自体胃癌细胞的特异杀伤活性。
- 谢绍建崔乃鹏张俊岭陈小贺张峰蔡建辉
- 关键词：树突细胞
- 转染自体胃癌细胞总RNA的树突状细胞诱导个体化免疫治疗的体外实验被引量：18
- 2006年
- 目的探讨转染自体胃癌细胞总RNA的树突状细胞(DC)体外介导抗胃癌的免疫效应。方法制备短期培养的原代胃癌细胞。用rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α体外诱导胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)中DC的发育和成熟,并转染自体肿瘤细胞总RNA,激活自体T细胞产生CTL,用CCK-8试剂盒检测CTL的杀伤活性。应用流式细胞术及混合淋巴细胞培养技术检测DC的免疫功能状态。用ELISA法测定IL-12和INF-γ的水平。结果转染自体肿瘤细胞总RNA的成熟DC,不仅可高表达MHC-I、II类分子及CD80、CD83和CD86协同刺激分子,并可获得高效刺激自体或异体T细胞增殖的能力。转染RNA的成熟DC,分泌IL-12的水平及其刺激产生的CTL培养上清液中INF-γ的水平显著高于单纯成熟DC及未成熟DC;且CTL对自体胃癌细胞的杀伤率显著高于异体组。结论转染自体胃癌细胞总RNA的成熟DC能够体外诱导产生对自体肿瘤细胞具有高度抗原特异性杀伤活性的CTL。
- 谢绍建闫庆辉单保恩付泽娴孟繁杰李保东蔡建辉
- 关键词：胃癌树突状细胞细胞毒性T细胞免疫治疗
- 树突状细胞疫苗联合胸腺肽α1对人源化免疫重建裸鼠结肠癌生长的抑制效应被引量：5
- 2007年
- 目的观察胸腺肽α1(Ta1)联合结肠癌细胞裂解物致敏树突状细胞(LyDCs)对人源化免疫重建裸鼠结肠癌的免疫治疗效应。方法常规DCs负载结肠癌细胞裂解物制备LyDCs疫苗,流式细胞仪(FCM)检测Tα1体外刺激前、后的LyDCs表型。HT-29结肠癌裸鼠模型成瘤后,经尾静脉注射人外周血T淋巴细胞6×10~6个/只,2d后,FCM检测裸鼠外周血人源性CD4^+、CD8^+ T细胞;将人源化免疫重建裸鼠分为3组,分别用LyDCs+Tα1、LyDCs和生理盐水皮下免疫注射治疗;治疗后7 d,体外观察各组裸鼠脾脏淋巴细胞的肿瘤杀伤作用及IFN-γ、IL-4分泌水平,实验结束时,观察LyDCs联合Tα1对荷瘤裸鼠的体内抑瘤作用。结果LyDCs的表型HLA-DR、CD80、CD86、CD83较刺激前明显上调;免疫重建裸鼠均检测到人源性CD4^+、CD8^+T细胞;LyDCs+Tα1组裸鼠脾脏T淋巴细胞的肿瘤杀伤作用与LyDCs组比较差异有统计学意义(P<0.01),LyDCs+ Tα1组T细胞的IFN-γ分泌水平与LyDCs组比较差异有统计学意义(P<0.01);接种HT-29细胞58 d后,LyDCs+Tα1组、LyDCs组抑瘤率分别为60.41%、37.20%,两组之间抑瘤效应比较差异有统计学意义(P<0.01),两组的抑瘤效应与对照组比较分别(P<0.01)。结论Tα1能增强LyDCs诱导的CD4^+Th1细胞反应和CTLs杀伤效应,对DCs疫苗的抗癌免疫治疗功效具有明显的放大作用。
- 马云龙郑铮郭华李保东谢绍建李桂馨刘津刘三光闫庆辉薛平蔡建辉
- 关键词：树突状细胞胸腺肽
- 荷人胃癌皮下移植瘤及细胞免疫功能重建的裸鼠模型构建及其特征被引量：1
- 2007年
- 目的探讨荷人胃癌皮下移植瘤及细胞免疫功能重建的裸鼠模型构建方法及其特征。方法10只裸鼠随机分为2组,实验组(n=5)腹腔注射人外周血T淋巴细胞(HuPBTL)并皮下接种人胃癌细胞,对照组(n=5)仅皮下接种人胃癌细胞。观察肿瘤潜伏期、成瘤率和肿瘤体积,流式细胞仪检测裸鼠外周血中人T细胞,MTT法检测实验组鼠脾T细胞体外杀伤作用。皮下瘤行病理组织学检查。结果两组肿瘤潜伏期无统计学差异(P>0.05),成瘤率均为100%。第3周末,两组肿瘤体积相比无统计学差异(P>0.05);实验组鼠外周血中人CD3+、CD4+和CD8+T细胞分别为46.86%±9.14%、31.68%±10.17%和17.91%±1.38%,而对照组鼠外周血中则无人T细胞;当效靶比为20∶1和40∶1时,实验组鼠脾T细胞的特异性杀伤率分别为15.37%±1.58%和19.86%±2.86%,且随着效靶比增高而增强(P<0.05)。两组荷瘤鼠均无肝、肺转移;胃癌细胞保持亲代细胞的形态学特征。结论采用腹腔注射HuPBTL和皮下接种人胃癌细胞的方法成功构建了人胃癌-HuPBTL-裸鼠模型,能模拟具有一定细胞免疫功能的胃癌患者的荷瘤状态。
- 李保东付泽娴陈小贺孟繁杰薛平蔡建辉
- 关键词：T淋巴细胞树突细胞
- 以树突状细胞为基础个体化抗胃癌过继免疫治疗的研究被引量：3
- 2006年
- 目的探讨负载自体肿瘤细胞裂解物的成熟树突状细胞(ATLs-mDCs)体外诱导个体化抗胃癌过继免疫治疗的效应。方法建立短期培养的原代胃癌细胞系。用ATLs-mDCs激活自体T细胞,制备肿瘤特异性细胞毒性T细胞(CTLs)。自体树突状细胞(DCs)均分为未成熟DCs、成熟DCs和ATLs-mDCs 3组,分别应用流式细胞仪及混合淋巴细胞增殖反应方法,检测DCs的免疫功能状态;应用细胞毒杀伤试验验证肿瘤特异性CTLs的杀伤活性;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定DCs培养上清中白细胞介素12(IL-12)和CTLs上清中γ干扰素(IFN-γ)的分泌水平。结果ATLs-mDCs上调HLA-DR、CD80、CD83和CD86的表达水平,同时获得高效刺激自体T细胞增殖的能力。ATLs-mDCs诱导产生的CTLs对自体胃癌细胞的杀伤率为(84±11)%,显著高于对两株异体胃癌细胞的杀伤率[(19±7)%和(19±11)%(t=54.18和56.46,P值均<0.01)]。ATLs-mDCs上清液中IL-12的浓度显著高于单纯成熟DCs(t=15.47,P<0.01)及未成熟DCs(t=28.44,P<0.01)。3组DCs分别激活自体T细胞产生的CTLs上清液中INF-γ的浓度ATLs-mDCs组高于单纯成熟DCs组(t=4.84,P<0.05),并显著高于未成熟DCs组(t=13.74,P<0.01)。结论ATLs-mDCs在体外诱导产生的CTLs能有效特异性杀伤自体胃癌细胞。
- 谢绍建付泽娴李冬斌张峰刘津薛平李荣琴蔡建辉
- 关键词：树突细胞
