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系统毒理学及其应用被引量：5: 2006年; 系统毒理学是近5年来发展起来的一门新兴学科,代表着后基因组时代毒理学发展的新方向.所谓系统毒理学是指通过了解机体暴露后在不同剂量、不同时点的基因表达谱、蛋白质谱和代谢物谱的改变以及传统毒理学的研究参数,借助生物信息学和计算毒理学技术对其进行整合,从而系统地研究外源性化学物和环境应激等与机体相互作用的一门学科.系统毒理学有望在阐明毒物对机体损伤分子机制、分子生物标志物和危险度评价等方面取得突破.在总结国内外相关研究的基础上,综述了系统毒理学的诞生背景、研究策略、研究技术及其主要应用.尽管还有不足之处,但可以肯定系统毒理学的发展和应用将会对人类的环境与健康研究产生极大的推动作用.; 王先良徐顺清; 关键词：转录组学蛋白组学代谢组学毒理基因组学

银染增强的纳米金探针技术检测微量核酸被引量：20: 2006年; 利用银染增强的纳米金技术建立了一种简单快速的核酸定量方法.该方法基于纳米金与烷巯基修饰的寡核苷酸分子共价键合作用,将纳米微粒报告基团标记在与靶核酸一端序列互补的寡核苷酸上,同时生物素化修饰另一端互补序列.靶核酸与两段寡核苷酸探针杂交后,借亲和素固定在酶标板孔内,通过纳米金催化的银染放大效应产生高灵敏的识别信号,适时记录其吸光度值从而实现核酸分子的定量.该检测方法检测单链核酸分子的灵敏度达0.1fmol/L,双链分子为10fmol/L.; 赵立凡李柏生黑笑涵李晓波李媛媛徐顺清; 关键词：纳米金核酸检测

纳米金生物条形码技术检测痕量二噁英类化合物被引量：7: 2009年; 建立一种基于纳米金生物条形码技术的二噁英快速筛检方法.利用二噁英诱导激活的芳香烃受体复合物,特异识别以纳米金为报告基团的二噁英反应探针,该探针被释放后进行条形码放大,通过纳米金银染技术增强识别信号,并记录其吸光度值,从而可以简单灵敏地快速筛检二噁英类化合物.在一定的反应时间和浓度范围内(10-14～10-10mol/L),溶液的吸光度值与2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)浓度之间呈正相关,方法检测限为0.01pmol/L,变异系数为5%～8%.用纳米金生物条形码(Nano-Barcode,nanoparticle-based bio-barcode)方法和现有的生物分析方法(CALUX,chemical-activated luciferase gene expression)分别测定TCDD标准品,并绘制剂量效应曲线.结果表明,本方法灵敏度高,线性范围宽,重复性好.本研究纳米金生物条形码方法的检测灵敏度高于CALUX将近5倍(EC50分别为4×10-12mol/L和2×10-11mol/L),检测限较CALUX降低了10倍(检测限分别为1×10-14mol/L和1×10-13mol/L),变异系数分别为5%～8%和15%～30%.; 赵立凡李媛媛徐顺清; 关键词：纳米金颗粒二噁英类化合物毒性当量

金纳米颗粒修饰寡核苷酸适配子对蛋白质进行比色检测方法被引量：4: 2006年; 目的利用核酸适配体(aptamer)建立一种检测与疾病有关蛋白质的新方法。方法用金纳米颗粒(AuNP)修饰的寡核苷酸适配子与蛋白质结合,同时另一个生物素化的寡核苷酸适配子也结合于蛋白质,构成一个三明治形式的复合物,接着三明治复合物被卵白素结合于酶标板上,利用银离子强化技术对复合物上的蛋白质浓度信息进行放大,然后用酶标仪对吸光度进行检测。结果(1)本研究可以得到吸光度与PDGF-BB浓度的剂量-效应关系曲线,在一定的浓度范围内(1fM^1μM),吸光度与PDGF-BB浓度的对数值呈线形相关,决定系数R2=0.9801;(2)本方法可以检测出1fmol/L的靶蛋白质。结论本方法有较高灵敏度,不需要复杂的仪器,易于操作,是一种新颖而应用前景的蛋白质标志物分析方法。; 张迟李柏生赵立凡张丽君徐顺清; 关键词：蛋白质

利用酶切保护PCR检测鱼肉中二吨恶英类化合物被引量：1: 2007年; 目的探讨利用酶切保护PCR分析(EPM-PCR)检测鱼肉中二吨恶英类化合物(DLCs)的毒性当量(TEQs)的可行性。方法将2份1g鱼肉样本经过硝化、提取及净化步骤以后,采用EPM-PCR分析方法检测其中TEQs,并与高分辨率气相色谱-高分辩率质谱联用技术(HRGC-HRMS)的检测结果进行比较。结果两份鱼肉样本经酶切保护PCR分析得到的TEQs值分别是10.92pg/g和39.61pg/g,相当于HRGC-HRMS标准方法的2.91倍和3.68倍。结论EPM-PCR可作为有效的筛选鱼肉样本中DLCs的一种手段。; 李丽徐顺清; 关键词：毒性当量

应用Aptamer分子提高实时定量PCR的特异性: 2006年; 目的探讨Aptamer应用于普通Taq酶扩增的实时定量(Real-time)PCR反应体系能否提高反应的特异性,减少引物二聚体的产生。方法在使用SYBR Green I作荧光染料,普通Taq酶扩增的Real-time PCR反应体系中添加一定量的Aptamer,与未加Aptamer的PCR反应体系和采用了热启动酶的反应体系同时在Reche Light-Cycle 2.0中进行扩增。结果添加了Aptamer和采用热启动酶的反应体系,引物二聚体得到有效的控制,而未加Aptamer的反应体系,融解曲线中,在产物峰前面有明显的代表引物二聚体的“肩峰”出现。结论Aptamer分子可以有效的抑制引物二聚体的产生和非特异性产物的扩增。; 李柏生李芳王先良张迟徐顺清; 关键词：聚合酶链式反应二聚体特异性

利用甲基化特异性引物高通量检测DNA甲基化被引量：5: 2008年; 建立一种基于甲基化特异性引物和SAGE技术的高通量DNA甲基化定量检测新方法(MSP-SAGE),首先利用亚硫酸氢钠对基因组DNA进行处理,使未甲基化的C转变为U,而甲基化的CpG不变.将处理和未处理的DNA双链变性后用随机引物PNNNNCG对存在含有CG的单链进行延伸,而无甲基化CG的单链处则不能延伸;将差异延伸的单链序列和频次信息经过系列分子操作后,引入PCR扩增模板;对中间带有未知序列的PCR扩增产物进行串连克隆测序.将来自于未处理组和处理组的某一CpG位点的序列出现的次数定义为[Tags]A和[Tags]B,将标准系列的实际甲基化水平和[Tags]B/[Tags]A之间建立线性回归方程.根据每一CpG位点的[Tags]B/[Tags]A比值可反推该位点的甲基化水平.MSP-SAGE具有良好的线性,基于标准系列的[Tags]B/[Tags]A与其实际甲基化水平的标准曲线方程为y=1.455x(R2=0.984,P<0.01).MSP-SAGE的回收率在95%到110%之间,精确度位于4.2%和10.5%,检测限在3%左右,单次检测通量可达24个CpG位点.MSP-SAGE是一种很有应用前途的高通量DNA甲基化定量检测方法.; 王先良王小利徐顺清赵秀阁全占军钱岩张金良; 关键词：DNA甲基化高通量表观遗传学

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国家自然科学基金(20377017)