国家自然科学基金(20377018)
- 作品数：5 被引量：18H指数：3
- 相关作者：黄正李闻张伟尉刘红艳张伟更多>>
- 相关机构：华中科技大学宜昌市疾病预防控制中心华中农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 生物发光标记分析甲苯降解菌的研究被引量：2
- 2009年
- 目的研究驯化的甲苯降解菌在微宇宙中的生长、降解甲苯的状况。方法采用lux发光标记实验室筛选、驯化的甲苯降解菌——恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida TJ1)菌株,投加到模拟甲苯污染的微宇宙中,用顶空气相色谱法监测甲苯降解情况,以平板计数法测定发光菌活菌数,以弱光仪监测发光强度的变化,以了解外源降解菌在微宇宙的生长及甲苯降解作用。结果被标记的恶臭假单胞菌菌落于暗室中肉眼可见并可用X片感光拍照,菌液发光强度可用弱光仪检测。发光菌落计数显示,投加的外源降解菌在微宇宙中生长良好;发光强度与发光菌活菌数变化趋势一致。微宇宙土著微生物7d甲苯降解率仅为40.2%,而投加降解菌后达到91.0%。结论通过lux发光标记可实时跟踪驯化的甲苯降解菌在微宇宙中的生长状况。微宇宙中的土著微生物本身含有甲苯降解能力的菌群,但其降解作用有限,不足以满足自净要求,投加外源高效降解菌可以显著增强生物修复效果。
- 张伟尉李闻刘红艳黄正
- 关键词：环境微生物甲苯降解恶臭假单胞菌
- luxAB发光基因标记的铜绿假单胞菌株的构建
- 2011年
- 目的构建表达luxAB发光基因的铜绿假单胞基因工程菌。方法用BglⅡ酶切pUC-luxAB质粒,回收luxAB片段与BamHⅠ酶切的质粒载体pBBR1MCS-5连接形成重组质粒pBBR-luxAB,再转化E.coliDH5α感受态细胞,经庆大霉素抗性、氯霉素抗性、发光检测多重筛选含有pBBR-luxAB重组质粒的的阳性克隆,并设立对照菌株。抽提pBBR-luxAB质粒、酶切、凝胶电泳,验证质粒构建的正确性。通过二亲本杂交方式将pBBR-luxAB质粒导入铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),构建基因工程菌铜绿假单胞菌(pBBR-luxAB)并对其进行质粒传代稳定性、发光动力学曲线以及发光度和活菌数关系进行测定。结果成功构建pBBR-luxAB重组质粒并且确定其成功转入铜绿假单胞菌中,连续转接4次后质粒保持率仍可达93%。在加入底物20min后,重组菌发光强度趋于稳定水平(1.32mV/ml),其发光强度与活菌量呈显著正相关(r=0.96,P<0.05)。结论该研究成功构建luxAB发光基因标记的铜绿假单胞菌(pBBR-luxAB)。
- 李闻刘红艳黄正
- 关键词：铜绿假单胞菌生物检测
- 基因工程微生物的生态安全被引量：3
- 2005年
- 该文分析了世界各国向自然环境释放基因工程微生物(geneticallyengineeredmicroorganisms,GEMs)的情况,介绍了近年来GEMs对环境影响的研究进展,简述了国内外对GEMs生物安全及使用的法律规范。
- 黄正
- 关键词：环境微生物学基因工程微生物环境释放生态安全
- Tet抗性铜绿假单胞菌接合转移pHN102方法研究被引量：5
- 2007年
- 二亲本杂交实验通常要求受体菌不能携带有与质粒上相同的抗性.本次实验中受体菌铜绿假单胞菌(Pseudo-monas aeruginosa)和重组质粒pHN102都带有四环素(Tc)抗性.考虑到质粒pHN102导入受体菌后至少带有两个Tc抗性基因片段,转移接合子的抗性会增强,所以提高四环素浓度至20μg/mL,并利用pHN102上携带的luxAB发光酶基因标记受体菌筛选转移接合子,并设立对照菌株.通过抽提质粒、琼脂糖凝胶电泳检测,确定pHN102成功转入P.aeruginosa中.转移接合子经4次转接后,质粒仍可以稳定存在且能够稳定表达.P.aeruginosa(pHN102)的发光动力学曲线表明,加入底物20min后,发光强度趋于稳定.经液体培养稀释后进行发光度和活菌数测定,发现二者呈显著的线性关系(r=0.994).
- 李闻谢波张伟张伟尉马静刘红艳黄正
- 关键词：铜绿假单胞菌发光
- 高效甲苯降解菌的驯化及筛选方法研究被引量：10
- 2008年
- 目的优化高效甲苯降解菌驯化及筛选方法。方法分别选取啤酒厂、染料厂活性污泥作为驯化对象,采用4种方法分离纯化甲苯降解菌,利用质粒快检鉴定降解性TOL质粒,A600、顶空气相色谱法测定降解菌的生长与降解甲苯能力,筛选出一株高效甲苯降解菌,并利用革兰染色、形态学及16SrDNA分析方法对其进行鉴定。结果染料厂活性污泥较啤酒厂驯化出的细菌种类多;密闭罐培养降解菌生长良好;筛选出一株含有TOL质粒的高效降解菌,经鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。在28℃、pH7.0,初始甲苯浓度为500mg/L条件下,该菌48h降解率达到99.2%。结论密闭罐培养、质粒快检与顶空气相色谱有机结合在甲苯降解菌的驯化和筛选中具有快速、准确、效果好的特点。
- 李闻马静张伟张伟尉刘红艳黄正
- 关键词：甲苯驯化顶空气相色谱铜绿假单胞菌
