中国博士后科学基金(201104748)
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
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- 经诱导的绿色荧光蛋白转基因C57BL雄鼠脾细胞移植重建雌鼠造血功能研究
- 2011年
- 目的探讨雄性C57BL绿色荧光蛋白(GFP)鼠诱导的脾细胞移植对造血衰竭小鼠造血重建的作用。方法建立小鼠造血衰竭模型,移植鱼卵提取物诱导的雄性C57BL荧光鼠脾细胞,检测诱导后细胞的干细胞标志抗原表达;观察受体存活时间,检测外周血白细胞计数、外周血GFP阳性细胞,进行荧光原位杂交检测Y染色体;各组受体脾和肺切片观察GFP细胞分布。结果鱼卵提取物诱导的雄性C57BL荧光鼠脾细胞比未诱导的脾细胞表达更多的干细胞标志抗原。1×106个脾细胞经尾静脉回输经致死剂量照射的雌性小鼠,明显延长小鼠存活时间,提高小鼠外周血白细胞计数。诱导组受体外周血中检测到GFP阳性细胞,骨髓中检测出60%的细胞含Y染色体。诱导组受体脾和肺切片观察到GFP阳性细胞分布。结论鱼卵提取物诱导的小鼠脾细胞中含较多的多能干细胞,回输给造血衰竭小鼠能重建其造血功能。
- 阮光萍姚翔王金祥邓永丽庞荣清王强潘兴华
- 关键词：转基因鼠绿色荧光蛋白造血重建
- 体细胞重编程为干细胞的方法研究与进展
- 2013年
- 背景:克隆人类胚胎会引起伦理问题,这使科学家寻找替代的方法来逆向分化细胞为多能/全能干细胞,这个过程称为重编程。重编程的新方法是研究者关注的焦点。目的:探讨重编程技术的研究现状,并对体细胞重编程为干细胞的各种方法做一综述。方法:应用计算机检索CNKI和Pubmed数据库中1983年1月至2006年12月关于重编程的文章,在标题和摘要中以"重编程,方法,体细胞,干细胞,分化"或"reprogramming,method,somatic cell,stem cell,differentiation"为检索词进行检索。选择文章内容与重编程有关者,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文章。最终选择17篇文献进行综述。结果与结论:一个多能干细胞重编程状态是细胞结构逐步重构,染色质表观遗传改变,转录表达和转录后调控的结果。靶细胞的重塑要求重编程有一个稳定的状态,最终可以被重新定向到特定的分化程序。有充分的证据表明,细胞鉴定可以被体外操作影响,重编程细胞的命运需要进一步体内检测。
- 阮光萍王金祥杨晓燕宋巧巧姚翔庞荣清潘兴华
- 关键词：干细胞多能干细胞胚胎干细胞重编程体细胞
- 四种细胞移植重建C57BL雌鼠免疫功能的对比
- 2012年
- 背景:据报道肌肉来源的细胞能重建造血功能,还需要进一步观察其他系细胞是否也能重建造血功能。目的:对比不同细胞对C57BL雌鼠造血功能恢复的作用。方法:摘眼球取绿色荧光蛋白转基因雄鼠外周血,溶血后制成白细胞,再取脾脏、肝脏制成脾细胞和肝细胞悬液,同时制备骨髓细胞。将C57BL雌鼠半致死量射线照射后,回输4种细胞,并在移植后18,39,53d检测外周血绿色荧光蛋白阳性细胞。同时标记CD4-PE和CD8-PE,并在移植后100d杀鼠取骨髓检测Y染色体阳性率。结果与结论:移植后18,39,53d均在C57BL雌鼠外周血检测到绿色荧光蛋白阳性细胞;C57BL雌鼠外周血绿色荧光蛋白阳性细胞百分比:回输脾细胞和骨髓细胞>回输肝细胞>回输外周血白细胞。同时在回输脾细胞和骨髓细胞的C57BL雌鼠外周血中检测到绿色荧光蛋白和CD4双阳性细胞、绿色荧光蛋白和CD8双阳性细胞,而回输肝细胞和外周血白细胞的C57BL雌鼠外周血中几乎未检测到双阳性细胞。移植后100d检测到的Y染色体阳性率与外周血中绿色荧光蛋白阳性率呈正相关。结果说明绿色荧光蛋白转基因雄鼠的外周血白细胞、脾细胞、肝细胞和骨髓细胞均有重建造血功能的作用,其中脾细胞与骨髓细胞作用相似,作用大于肝细胞,肝细胞作用大于白细胞。
- 阮光萍王金祥姚翔邓永丽庞荣清蔡学敏王强马丽花潘兴华
- 关键词：转基因鼠造血功能造血重建脾细胞
- 巨细胞病毒pp65抗原检测的新方法被引量：6
- 2012年
- 目的传统的检测CMVpp65抗原的方法是间接免疫荧光,操作麻烦,步骤较多,整个实验需要6个多小时,而且只能定性。需要寻找一种简便的可以定量的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。因此我们设计了流式的方法来检测CMVpp65抗原阳性细胞。方法我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行了流式标记移植病人外周血中的WBC,操作步骤明显简便了,只需不到2 h就可完成检测,而且可以定量检测CMVpp65抗原阳性细胞。同时我们用荧光定量PCR检测病人尿中的CMV基因的拷贝数。结果流式检测阳性率高的标本,用间接免疫荧光方法检测也为阳性,同时流式检测强阳性的病人尿用荧光定量PCR检测到CMV基因,表明病人处于CMV病毒血症。结论我们用间接免疫荧光试剂盒中的一抗和购自invitrogen公司的二抗进行流式标记,成功检测了移植病人的CMVpp65抗原阳性细胞的百分比,新方法可以定量,与荧光定量PCR方法检测病人尿中的CMV基因的结果符合率较高,可以推广应用。
- 阮光萍王金祥姚翔庞荣清邓永丽吕燕波王强马丽花潘兴华
- 关键词：巨细胞病毒PP65抗原间接免疫荧光流式细胞术荧光定量PCR
- 鸡卵细胞提取液有维持和增强细胞活性的关键作用被引量：2
- 2013年
- 该文鉴定了一种提取物具有维持和增强细胞存活与分化的能力,这将在细胞生物学研究中得到应用。制备四种卵细胞提取物,雄鼠的脾细胞被提取物渗透并培养,然后输注给雌鼠。在移植后雌鼠外周血中GFP阳性细胞和骨髓细胞中的Y染色体被检测,对比脾细胞在体内存活与分化的不同能力。移植蛋白和全蛋提取液处理的脾细胞的雌鼠外周血检测到GFP阳性细胞,在移植后120 d,雌鼠骨髓中检测到的Y染色体阳性率与外周血中的GFP阳性细胞率呈正比。用蛋白和全蛋提取液渗透脾细胞后,脾细胞在雌鼠体内存活能力强于其他提取液。结果表明,鸡蛋白提取液有维持并增强脾细胞存活的作用。因此蛋白提取物可在将来用于干细胞功能的维持。
- 阮光萍王金祥庞荣清姚翔阮光洪朱光旭朱向情蔡学敏何洁赵晶李自安石琳琳王桂华潘兴华
- 关键词：脾细胞提取物细胞存活细胞分化
- 鸡卵提取物促进293T细胞升高表达多能基因OCT4和NANOG被引量：4
- 2014年
- 作者找到一种卵细胞提取物有促进293T细胞表达多能基因的作用,这将在细胞生物学有广泛的应用前景。提取鸡卵清、卵黄和全卵提取物,用于293T细胞的渗透诱导。在诱导后不同时间提取细胞的RNA,检测多能基因OCT4和NANOG的变化。在诱导后10 d提取细胞的DNA,检测OCT4和NANOG基因甲基化位点的变化。卵清、卵黄和全卵提取物具有促进293T细胞生长的作用,三种提取物渗透诱导后的293T细胞OCT4和NANOG基因表达有不同程度的升高。OCT4和NANOG基因发生去甲基化,基因开放表达。鸡卵提取物具有促进293T细胞表达OCT4和NANOG基因的作用,有望成为诱导细胞向多能细胞转化的制剂。
- 阮光萍王金祥姚翔庞荣清蔡学敏何洁赵晶潘兴华
- 关键词：293T细胞甲基化
- 绿色荧光蛋白转基因雄鼠肝细胞移植重建雌鼠的造血功能研究被引量：1
- 2013年
- 目的用荧光雄鼠的肝细胞回输半致死量射线照射的C57BL雌鼠,观察肝细胞是否有重建造血功能的作用。方法用荧光雄鼠的肝细胞回输给半致死量射线照射的C57BL雌鼠,在移植后18、39和53 d剪鼠尾,采血并用CD4-PE和CD8-PE标记,再用氯化铵溶血,上流式细胞仪检测。移植87 d后杀鼠取骨髓用荧光原位杂交检测Y染色体阳性细胞的百分比,并取外周血、脾细胞、肝细胞和骨髓细胞检测绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞的百分比。结果回输肝细胞的雌鼠外周血中检测到GFP阳性细胞,同时检测到一部分GFP阳性细胞转化成了CD4+或CD8+T细胞,外周血中GFP阳性细胞的比例与荧光原位杂交分析的骨髓中的Y染色体阳性比例呈正相关。同时在鼠的脾细胞、肝细胞和骨髓细胞中都检测到了GFP阳性细胞。而脾细胞中检测到的GFP阳性细胞百分比高于其他细胞,相比有统计学意义(P=0.003)。结论成年鼠肝细胞含有一定量的造血干细胞,在移植鼠体内存活并分布在多脏器,重建了雌鼠的造血功能。
- 阮光萍王金祥庞荣清姚翔邓永丽马丽花潘兴华
- 关键词：肝细胞造血重建
- 系统性红斑狼疮小鼠骨髓间充质干细胞的成骨、成脂分化能力下降被引量：5
- 2014年
- 背景:系统性红斑狼疮患者的骨髓间充质干细胞与正常人相比是否有不同,相关报道较少。目的:对比系统性红斑狼疮模型小鼠与正常小鼠的骨髓间充质干细胞多向分化能力的差别。方法:分离培养系统性红斑狼疮模型小鼠与C57BL小鼠的骨髓间充质干细胞(对照组),分别进行成骨、成脂诱导分化,观察两种小鼠的骨髓间充质干细胞的分化能力。结果与结论:C57BL小鼠的骨髓间充质干细胞经传代后,为长梭形,呈均匀分布生长;系统性红斑狼疮模型小鼠的骨髓间充质干细胞表现为生长缓慢,细胞相对C57BL小鼠要少一些。经过成骨诱导显示系统性红斑狼疮模型小鼠的钙结节和钙盐明显少于对照组,PCR检测成骨基因Runx2,碱性磷酸酶,骨钙素表达也明显下降。经过成脂诱导显示系统性红斑狼疮模型小鼠的脂滴明显少于对照组,PCR检测成脂基因PPARγ2,脂蛋白酯酶表达也明显下降。说明系统性红斑狼疮模型小鼠的骨髓间充质干细胞成骨与成脂能力都低于C57BL小鼠,系统性红斑狼疮模型小鼠的骨髓间充质干细胞的多向分化能力受损。
- 阮光萍王金祥杨建勇刘菊芬蔡学敏庞荣清吕燕波潘兴华
- 关键词：干细胞骨髓间充质干细胞系统性红斑狼疮成脂分化RUNX2PPARΓ2脂蛋白酯酶
