广东省医学科学技术研究基金(A2002308)
- 作品数：9 被引量：23H指数：2
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- 相关机构：中山大学附属第一医院中山大学广州医学院第二附属医院更多>>
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- 护骨素基因启动子区T^(950)-C多态性与骨密度及骨代谢的关系被引量：13
- 2005年
- 目的探讨绝经后汉族妇女护骨素(OPG)基因启动子区T950C多态性与骨质疏松症和骨代谢的关系。方法应用PCRRFLP测定随机选取的73例绝经后骨质疏松症妇女和61例绝经后正常妇女OPG基因T950C的基因型,双能X线骨吸收方法分别测腰椎各椎体和股骨颈髋部的BMD,放射免疫分析法测骨代谢指标。结果所选人群OPG基因T950C基因型频率分布在骨质疏松症和绝经正常妇女均符合HardyWeinberg定律,而且其基因型在两组研究对象中分布差异无显著性,但汉族妇女T950C基因型分布与高加索人种妇女相比有明显差异。在骨质疏松症组CC型的股骨颈BMD低于TT型和TC型,而绝经后正常妇女三种基因型之间BMD无差异。结论OPG基因T950C基因型分布存在明显的种族差异。OPG基因T950C多态性不能作为中国汉族妇女是否发生骨质疏松症的遗传标志,但对于患有骨质疏松症的中国汉族妇女CC型却能预测骨骨质疏松症的患病程度。
- 武兆忠刘敏冯鉴强
- 关键词：护骨素骨密度点突变
- 低体重与护骨素基因启动子T^(149)-C和A^(163)-G多态性与骨质疏松的关系被引量：2
- 2006年
- 目的探讨护骨素(OPG)基因启动子区T149-C和A1633-G多态性及低体重联合作用对绝经后健康女性和绝经后骨质疏患者骨密度(BMD)的影响。方法以134例广州地区居住10年以上无亲缘关系的绝经汉族女性为研究对象。骨质疏松症73例,绝经后健康女性61例作对照组。随机抽取25个样本经SSCP-PCR法寻找异常迁移条带,再采用测序方法确定扩增区域中的单核苷酸突变位点,最后采用PCR限制性片段长度法(RFLP)对所有样本进行分析;双能X线吸收法测定BMD。结果在73例绝经后骨质疏松症女性和61例绝经后健康女性OPG启动子扩增区中,找到两个单核苷酸点突变多态性位点,T149-C和A163-G。分析显示这两个多态性位点基因型频率在两组中的分布均符合Hardy-Weinberg定律。T149-C和A163-G多态性单一基因型和复合基因型的频率分布在两组实验对象间差异无统计学意义(P>0．05)。对单一基因型及其复合基因型的BMD分析显示:绝经后骨质疏松症女性的腰椎和髋部BMD明显低于绝经后健康女性。绝经后骨质疏松症患者的体质指数(BMI)也明显低于绝经后健康女性[分别为(22．5±3．0)kg／m2和(24．4±3．6)kg／m2,P <0．01]。结论T149-C和A163-G多态性对绝经后骨质疏松患者和绝经后健康女性的骨量影响没有协同作用;单一的和复合的T149-C和A163-G多态性各基因型不能作为预测中国汉族女性发生骨质疏松的遗传标志,但可能是骨质疏松发生的易感基因。
- 武兆忠刘敏
- 关键词：骨密度骨质疏松
- 雌激素膜快速效应对人成骨样细胞MG63 OPG mRNA快速表达水平的影响被引量：2
- 2009年
- 目的探讨17β-雌二醇(E2)膜快速效应对人成骨样细胞MG63的OPG mRNA快速表达水平影响。方法采用RT-PCR法分析经E2快速作用后的MG63细胞中OPG mRNA的表达水平。结果E2膜快速效应能诱导人成骨细胞MG63 OPG mRNA表达水平出现一个快速增高现象,其表达高峰时间为E2作用后的10 min左右,而且这一现象能被G蛋白藕联抑制苏拉明所抑制。结论而E2诱导的人成骨样细胞MG63中OPGmRNA表达水平的快速增高,可能与雌激素启动了雌激素膜受体介导的G蛋白藕联受体调节的磷脂酶C/腺苷酸环化酶通路有关。
- 武兆忠刘敏冯鉴强林伟邬恒夫王金玉李园
- 关键词：护骨素雌激素人成骨样细胞
- RNA干扰基因敲低雌激素受体β对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响被引量：2
- 2007年
- RNA干扰敲低人成骨样细胞株MG63中雌激素受体β后,RT-PCR法发现不同浓度的17β-雌二醇均能上调MG63细胞中的护骨素mRNA表达水平,其中以10^(-7)mol/L的作用最强。而这种作用不能被G蛋白抑制剂suramin所抑制。提示雌激素受体β可能不涉及雌激素上调MG63细胞护骨素表达的调控作用。
- 武兆忠刘敏冯鉴强林伟张昊吴长伟王金玉
- 关键词：RNA干扰护骨素雌激素受体Β人成骨样细胞
- 雌激素受体α亚基基因小干扰RNA表达载体的构建
- 2007年
- 目的探讨构建雌激素受体α（ERα）亚基基因小干扰RNA（siRNA）表达载体的方法，为建立基因敲除ERα亚基突变株提供素材和依据。方法利用计算机辅助设计ERα特异性siRNA，体外合成siRNA基因，并将其定向克隆入pSilencer4．1-CMV质粒中，构建真核表达载体。采用PCR扩增、酶切分析鉴定。结果双酶切法鉴定重组质粒后，RT-PCR法鉴定ERasiRNA载体可特异地抑制人成骨样细胞株MG63细胞中ERα的表达。结论ERα亚基特异性siRNA表达载体被成功构建，为进一步研究雌激素受体在骨代谢中的作用机制提供了实验素材和依据。
- 张昊武兆忠章乐虹
- 关键词：RNA干扰人成骨样细胞
- RNA干扰下调雌激素受体α亚基的人成骨样细胞模型的构建
- 2008年
- 目的构建雌激素受体α亚基（ERα）下调的人成骨样细胞模型。方法采用计算机辅助设计并合成ERα特异性小干扰RNA（siRNA）前体基因后，定向克隆人pSilencer4．1-CMV质粒中，构建重组的ERα siRNA表达载体并测序鉴定。由脂质体介导重组质粒稳定转染人成骨样细胞株MG63，潮霉素筛选阳性抗性克隆细胞。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测ERα基因在人成骨样细胞株MG63内的表达，抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合体法（ABC）分析ERα蛋白在人成骨样细胞株MG63内的表达与定位。MTT法测ERα基因被特异性下调后对MG63细胞生长的影响。流式细胞术分析ERα siRNA对人成骨样细胞株MG63细胞生长周期的影响。采用改良Gomori氏钙钴法分析ERα siRNA对人成骨样细胞株MG63表达碱性磷酸酶的影响。结果构建表达ERα siRNA的重组真核表达载体，并成功地下调了人成骨样细胞株MG63的ERα亚基基因，其中MG63细胞的G1期为68．6％，G2期为17．6％，S期为13．8％；ERα siRNA MG63细胞的G1期为68.6％，G2期为16．8％，s期为14．6％。而ERα siRNA下调人成骨样细胞株MG63的ERα亚基对细胞的生长特性无明显影响。结论成功地构建了ERα下调的人成骨样细胞模型，该模型为进一步研究雌激素及其受体对骨代谢影响的分子机制提供了基础材料。
- 武兆忠刘敏冯鉴强林伟
- 关键词：RNA干扰雌激素受体Α成骨细胞
- 体脂比率与OPG基因启动子G^(209)-A和T^(245)-G多态性联合作用与骨质疏松症发生的关系被引量：2
- 2007年
- 目的探讨护骨素(OPG)基因启动子区G209-A和T245-G多态性及其脂肪保护作用、联合作用对绝经后正常妇女和绝经后骨质疏松症妇女骨密度(BMD)的影响。方法随机抽取25个样本经SSCP-PCR法寻找异常迁移条带,再采用测序方法确定扩增区域中的单核苷酸点突变位点,最后采用PCR-限制性片段长度法(RFLP)对所有样本进行分析;双能X线吸收法测定BMD。结果73例绝经后骨质疏松症妇女和61例绝经后正常妇女OPG启动子扩增区中找到两个单核苷酸点突变多态性位点,G209-A和T245-G。分析显示这两个多态性位点基因型频率在两组实验对象中的分布均符合Hardy-Weinberg定律。G209-A和T245-G多态性位点单一基因型和复合基因型的分布在两组实验对象之间没有显著性差异(P>0.05)。对各单一基因型及其复合基因型的BMD分析显示:绝经后骨质疏松症妇女的腰椎和髋部BMD明显低于绝经后正常妇女,同时,绝经后骨质疏松症妇女的全身体脂比率也明显低于正常妇女。结论G209-A和T245-G多态性对绝经后骨质疏松症和绝经后正常妇女的骨量影响没有协同作用;单一的和复合的G209-A、T245-G多态性各基因型不能作为预测中国汉族妇女是否发生骨质疏松症的遗传标志,但可能是骨质疏松症发生的易感基因,并且合理的含脂饮食有利于骨保护。
- 武兆忠冯鉴强刘敏林伟黄彦史群伟王金玉
- 关键词：骨密度护骨素
- RNA干扰抑制雌激素受体α亚基对雌激素诱导人成骨样细胞护骨素表达的影响被引量：3
- 2005年
- 目的探讨RNA干扰抑制人成骨样细胞株MG63中雌激素受体α亚基(estrogenreceptorαsubunitERα)后,对17β雌二醇(E2)诱导护骨素(OPG)表达的影响。方法利用计算机辅助设计ERα特异性siRNA,体外合成siRNA基因,并将其定向克隆入真核表达载体pSilencer41CMV。以脂质体法转染ERαsiRNA载体至人的成骨样细胞株MG63中,鉴定后分别用不同浓度的雌激素或G蛋白抑制剂苏拉明干预经ERαsiRNA转染的MG63细胞或未经ERαsiRNA转染的MG63细胞,RTPCR法检测OPGmRNA的表达水平。结果双酶切法鉴定重组质粒后,RTPCR法鉴定ERαsiRNA载体可特异地抑制MG63细胞中ERα的表达。不同浓度的17βE2上调MG63细胞OPGmRNA的表达,其中以10-7mol/L的作用最强。但经ERαsiRNA载体抑制MG63细胞ERα亚基后,17βE2上调MG63细胞OPGmRNA表达的作用消失。结论17βE2主要经ERα亚基上调MG63细胞OPG的表达。
- 武兆忠刘敏冯鉴强
- 关键词：MG63细胞成骨样细胞护骨素RNA基因定向克隆
- RNA干扰基因敲低雌激素受体β对人成骨样细胞生长的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察经特异性小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA)下调人成骨样细胞株MG63的雌激素受体β(ERβ)后对其生长状况的影响。方法利用计算机辅助设计并合成ERβsiRNA前体基因后,定向克隆入pSilencer4.1-CMV质粒中,构建重组的ERβsiRNA表达载体并测序鉴定。由脂质体介导重组质粒稳定转染入人成骨样细胞株MG-63,潮霉素筛选阳性抗性克隆细胞。RT-PCR法检测ERβ基因在人成骨样细胞株MG-63的表达,抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合体法(ABC)分析ERβ蛋白在人成骨样细胞株MG-63内的表达与定位。MTT法测ERβ基因被特异性下调后对MG-63细胞生长的影响。流式细胞术分析ERβsiRNA对人成骨样细胞株MG-63细胞生长周期的影响。采用改良Gomori氏钙钴法分析ERβsiRNA对人成骨样细胞株MG-63表达碱性磷酸酶的影响。结果构建表达ERβsiRNA的重组真核表达载体,并成功地下调了人成骨样细胞株MG-63的ERβ基因,而ERβsiRNA下调人成骨样细胞株MG-63的ERβ对细胞的生长特性无明显影响。结论成功地构建了ERβ下调的人成骨样细胞模型,该模型为进一步研究雌激素及其受体对骨代谢影响的分子机制提供了基础材料。
- 武兆忠刘敏冯鉴强林伟王金玉李园
- 关键词：RNA干扰雌激素受体Β人成骨样细胞细胞模型
