北京市自然科学基金(7082024)
- 作品数：2 被引量：12H指数：2
- 相关作者：龚树生罗凌惠王国鹏谢静付勇更多>>
- 相关机构：华中科技大学首都医科大学浙江大学医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市教育委员会科技发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 腺病毒介导bcl-2基因转染对顺铂所致大鼠螺旋神经节细胞损伤的拮抗作用被引量：4
- 2009年
- 目的通过腺病毒（adenovirus，Ad）载体介导bcl-2基因转染体外培养的新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞（spiral ganglion cells，SGC），探讨bcl-2蛋白过度表达对顺铂所致SGC损伤的拮抗作用。方法体外培养新生大鼠SGC，携带绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因的腺病毒载体Ad—GFP转染SGC，并行神经丝蛋白（NF200）免疫细胞化学染色鉴定，激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察。携带bcl-2基因的腺病毒载体Ad—bcl-2转染SGC，蛋白质印迹法（WesternBlot）检测bcl-2蛋白表达。设立Ad—bcl-2转染加顺铂组（A组），Ad．GFP转染加顺铂组（B组），顺铂组（C组）和正常对照组（D组），顺铂作用浓度为2ug/ml；NSt3作用48h后，行各组SGC计数，并通过ImageJ软件测量各组SGC轴突长度。结果成功分离并培养新生大鼠SGC。激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察到腺病毒载体可安全高效转染体外培养的SGC。Ad—bcl-2转染3d后，Western Blot检测有外源性人bcl-2基因的高效表达，而Ad—GFP转染组和顺铂组未检测到表达。顺铂作用后。A、B、C组部分SGC细胞突起变短、萎缩，胞体缩小、变圆，甚至浮起。A组SGC数目明显多于B组和C组（P值均〈0．01），但少于D组（P〈0．05）；A组SGC轴突长度明显长于B组和C组，但短于D组（P值均〈0．01）。结论腺病毒能够安全高效地转染体外培养的新生大鼠SGC。bcl-2蛋白过表达对顺铂所致SGC损伤有一定的拮抗作用。
- 王国鹏谢静刘英鹏罗凌惠鲁海涛董继华龚树生
- 关键词：腺病毒科转染螺旋神经节基因BCL-2顺铂
- 慢病毒载体和腺病毒载体转染原代培养的螺旋神经节细胞的比较被引量：8
- 2011年
- 目的:比较慢病毒载体和腺病毒载体转染新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(SGCs)的不同转染特性。方法:体外培养新生大鼠SGCs,适当滴度的慢病毒载体和腺病毒载体转染SGCs,于病毒转染后3d(培养后6d)和转染后7d(培养后10d),荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白报告基因(GFP)表达情况和SGCs的细胞形态。行SGCs计数,计算转染效率,并通过ImageJ软件测量各组SGCs轴突长度。结果:慢病毒载体和腺病毒载体均可有效转染体外培养的原代SGCs;腺病毒载体转染效率高,GFP表达快,而1周后GFP表达开始下降;慢病毒载体转染7d后GFP开始表达,而后被转染的SGCs增多,GFP增强。慢病毒载体或腺病毒载体转染后的SGC与对照组相比,细胞数目和轴突长度的差异均无统计学意义。结论:慢病毒载体和腺病毒载体均可安全、有效地转染原代培养的SGCs。腺病毒载体转染快,效率高;慢病毒载体转染SGCs后GFP维持时间长。
- 王国鹏罗凌惠谢静陈沛付勇钟刚龚树生
- 关键词：听觉丧失感音神经性慢病毒载体腺病毒载体原代细胞培养螺旋神经节细胞
