国家重点基础研究发展计划(2001CB509904)
- 作品数：18 被引量：118H指数：8
- 相关作者：李树浓张秀明项鹏雷俊霞那晓东更多>>
- 相关机构：中山大学中国医科大学中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金广东省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人间质干细胞移植治疗缺氧缺血性脑病的实验被引量：2
- 2006年
- 目的:观察人胚间质干细胞移植至缺氧缺血性脑病新生大鼠后对其学习记忆能力的改善效果。方法:7窝SD新生1d大鼠共81只,同窝随机分为正常对照组、间质干细胞组、生理盐水组和未治疗组4组。①后3组大鼠左颈动脉结扎,吸入体积分数为0.08的氧制作缺氧缺血性脑病模型;间质干细胞组脑定位注射分离培养的中期引产人胚胎(获供者知情)骨髓间质干细胞,每点注射2μL(细胞浓度为2×1011L-1);生理盐水组同法注射等量生理盐水。观察各组新生大鼠1周内成活率。②移植后第6周对同窝4组大鼠进行Morris水迷宫训练,4d后进行测试,以找到平台的时间代表大鼠学习和记忆能力。③移植后第10周麻醉后处死实验鼠,苏木精-伊红染色和间接免疫荧光检测骨髓间质干细胞在大鼠脑内存活和分化情况。结果:①4组新生大鼠1周内成活率比较:间质干细胞组明显高于生理盐水组和未治疗组[75.0%(15/20),35.3%(6/17)50.0%(7/14),P<0.01],而与正常对照组比较差异不显著(P>0.05)。②4组新生大鼠水迷宫实验结果:间质干细胞组大鼠找到平台的时间明显短于生理盐水组和未治疗组(P<0.01〉;训练3d后与正常对照组差异不显著。③4组新生大鼠免疫荧光检测结果:间质干细胞组中,进针注射部位存在大量移植细胞,并向周围迁移,皮质层、海马等部位检测到移植细胞;所植入的细胞约6%表达胶质纤维酸性蛋白,约8%表达神经特异性烯醇化酶。结论:移植人胚胎骨髓间质干细胞能提高缺氧缺血性脑病新生大鼠存活率,改善其学习记忆能力,间质干细胞在鼠脑内最少可以存活10周。
- 谢为民朱美玲朱平先
- 关键词：间质干细胞移植缺氧缺血性记忆
- 人胚胎脐血间质干细胞生物学特性研究被引量：9
- 2004年
- 目的 :研究人中期胚胎脐血间质干细胞生物学特性 ,探讨其在自体宫内基因转移 /治疗 (IUGT)领域的应用前景。方法 :采用L -DMEM完全培养液培养中期胚胎脐血间质干细胞 (MSC) ;流式细胞仪技术检测细胞表面标记 ;地塞米松 /胰岛素等作为脂肪细胞诱导液 ,β -甘油磷酸钠 /抗坏血酸等作为成骨细胞诱导液分别诱导细胞分化 ;将携带有绿色荧光蛋白的重组腺病毒转染MSC ,荧光显微镜下检测MSC表达转基因特性 ;F344新生大鼠肝内注射MSC ,免疫荧光检测 6周后不同组织器官中人MSC存在 ;非肥胖型糖尿病 /重症联合免疫缺陷性小鼠 (NOD/SCID)皮下注射MSC ,病理切片检测第 30d细胞体内成瘤性。结果 :3mL人中期胚胎脐血可以分离、培养出MSC ,细胞均一地表达CD2 9、CD4 4、CD5 9、CD10 5、CD16 6 ,不表达CD34、CD4 5、CD80、CD86、CD4 2a、HLA -DR分子 ,体外培养中具有成脂、成骨能力 ;细胞表达转基因产物绿色荧光蛋白阳性率高达 5 6 32 %± 3 2 8% ;在新生大鼠体内 ,人中期胚胎脐血来源的MSC能向多个不同组织器官迁移 ,在NOD/SCID小鼠内不具有成瘤性。结论 :人中期胚胎脐血MSC适合中、晚期胚胎自体IUGT靶细胞。
- 朱美玲那晓东雷俊霞刘华胡燕芬黄玲惠黄伟花张秀明李树浓
- 关键词：胎血间质干细胞基因疗法基因转移
- 骨髓间质干细胞抑制肝星状细胞增殖与活化的体外研究被引量：19
- 2005年
- 目的:探讨骨髓间质干细胞(MSCs)对活化态肝星状细胞(HSCs)增殖的影响。方法:分别从骨髓和肝脏分离纯化培养大鼠MSCs及HSCs,塑料板传代培养激活HSCs;在半透膜(transwellinsert)上接种MSCs,在6孔塑料培养板上接种HSCs,建立上下双层细胞共培养体系;大鼠正常肝细胞系(BRLs)及HSCs培养分别作为对照。免疫细胞化学检测平滑肌激动蛋白(α-SMA)与结蛋白的表达,IBAS2.5软件分析阳性染色表达量。结果:HSCs与MSCs共培养24h,HSCs表现轻度增殖抑制,随着培养时间延长,HSCs增殖活性受抑制更明显,在48h和72h的抑制率分别达15.7%与30.3%,与BRLs共培养体系比较有显著差异;与MSCs共培养72h,HSCs表达α-SMA量明显低于两个对照组BRLs及HSCs培养体系(50.2%vs90.2%、95.6%,P<0.01);而结蛋白表达的量在3组共培养体系中均无显著差异。结论:MSCs具有分泌细胞因子抑制HSCs增殖活性的潜能,在治疗肝纤维化中可能发挥作用。
- 赵东长陈蕊余伟华雷俊霞彭延文刘宇张秀明李树浓项鹏
- 关键词：间质干细胞肝星状细胞增殖平滑肌肌动蛋白
- 供者源性的骨髓间质干细胞对急性移植物抗宿主病的影响被引量：17
- 2003年
- 目的 :采用大鼠骨髓移植模型探讨共移植供者源性的骨髓间质干细胞 (MSCs)对骨髓移植后急性移植物抗宿主病 (GVHD)的影响。方法 :体外培养Fisher344大鼠骨髓间质干细胞 ,扩增至第 5代用于移植。建立大鼠异基因急性GVHD模型 (F344→Wistar)。受者Wistar大鼠采用致死性全身照射预处理 ,当天移植F344大鼠骨髓细胞和脾细胞。实验组则移植F344大鼠骨髓细胞、脾细胞和第 5代的MSCs。观察各组移植后急性GVHD的发生时间、发病率和存活时间。结果 :共移植MSCs推迟急性GVHD的发病时间 [( 19 1± 1 7)dvs( 15 6± 1 5 )d ,P <0 0 5 ],延长该组的存活时间 [( 35 6± 7 0 )dvs ( 2 5 4± 6 0 )d ,P <0 0 5 ],但无法完全消除急性GVHD的发生。结论 :MSCs在体内具有免疫抑制功能 ,供者来源的MSCs在不使用免疫抑制剂情况下 。
- 李浩威温冠媚肖庆忠李红乐段连宁项鹏张秀明李树浓
- 关键词：急性移植物抗宿主病骨髓间质干细胞骨髓移植
- BDNF重组腺病毒的构建及在大鼠骨髓间质干细胞的表达被引量：10
- 2003年
- 目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDNF和BDNF构建入带有EGFP表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack -CMV中 ,形成转移载体pAdTrack -proBDNF和pAdTrack -BDNF ,采用化学转化法在大肠杆菌BJ5 183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy- 1同源重组 ,得到重组腺病毒载体pAd -proBDNF和pAd -BDNF ;转染 2 93细胞 ,包装成重组病毒颗粒 ;将重组病毒上清感染rMSC ,用荧光显微镜下观察和Western -blotting鉴定重组病毒在rMSC表达 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC在体外诱导向神经样细胞分化 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF的感染的rMSC接种于裸鼠肌肉内 ,两周后荧光显微镜下直接观察。结果 :成功地构建了proBDNF和BDNF重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒 ,重组病毒能在体外培养的rMSC高效表达并不影响其分化潜能 ,体内移植实验表明Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC能在体内表达。结论 :重组腺病毒具有较高的介导proBDNF和BDNF基因表达于rMSC的效率 ,带有报告基因EGFP的Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC可以用于体内移植实验。
- 李红乐李浩威邢飞跃孙学刚邓宇斌张秀明姜勇李树浓
- 关键词：BDNF重组腺病毒骨髓间质干细胞增强型绿色荧光蛋白基因融合
- 人胚胎骨髓间质干细胞移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑病的实验被引量：6
- 2005年
- 目的:在制作新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型基础上,研究间质干细胞移植治疗缺氧缺血性脑病的应用前景。方法:实验于2002-09/2004-03在深圳宝安血站干细胞研究实验室内完成。实验中采用L-DMEM分离培养骨髓中间质干细胞。7窝SD1d龄新生大鼠共81只同窝随机分为4组:①正常组,不干预。②模型组:结扎左颈动脉,吸氧3h制成缺氧缺血性模型。③生理盐水组:造模后24h定位注射生理盐水8μL。④间质干细胞组:处理同生理盐水组,注射间质干细胞(1.0～2.0)×106/μL。Morris水迷宫试验评估移植后第42天大鼠学习和记忆能力;第10周麻醉状态下处死实验鼠,制作病理切片,苏木精-伊红染色和间接免疫荧光检测间质干细胞在脑内存活和分化情况。结果:①第1周内成活率:第7天,81只实验鼠存活42只,间质干细胞组与正常对照组大鼠存活率分别为75.0%和82.4%,差异不显著;明显高于生理盐水组(35.3%)和模型组(50.0%)(P<0.01)。②水迷宫试验显示间质干细胞组大鼠的空间识别和记忆能力明显优于生理盐水组和模型组(P<0.01);培训后第5天,间质干细胞组识别平台的平均时间为7.5s,与正常组7.0s不存在差异。③病理切片、苏木精-伊红染色和间接免疫实验结果显示:间质干细胞移植组中,进针注射部位存在大量移植细胞,并向周围迁移,皮质层、海马等部位检测到移植细胞;所植入的细胞约6%表达胶质纤维酸性蛋白,约8%表达神经元特异性烯醇化酶。结论:移植人间质干细胞组能有效修复缺氧缺血导致的神经受损,改善其功能,明显提高缺氧缺血性脑损伤大鼠1周内成活率。
- 朱美玲李艳彭爱军那晓东雷俊霞谢为民胡燕芬项鹏张秀明李树浓
- 关键词：间质干细胞新生大鼠缺氧缺血性脑病
- 心肌再生医学的研究进展
- 2007年
- 心血管疾病是导致人类死亡的主要疾患之一,其中以冠心病、心肌梗死最为常见。导致心功能衰竭的主要原因是心肌梗死后心肌细胞的大量丢失及内源性修复机制的缺失,受损的心肌被瘢痕组织所替代,从而进一步导致心功能的丧失。心脏移植可以治疗严重心功能衰竭,但这一有效治疗措施受供体来源和免疫排斥反应等的限制。近年来,随着人类对干细胞认识的加深,应用心肌再生治疗心血管疾病已经成为一个新的研究热点。
- 云伟于艳秋
- 关键词：心肌再生干细胞移植
- 人卵黄囊间质干细胞的分离纯化及诱导成脂的实验研究
- 2003年
- 目的 :分离纯化及体外定向诱导人卵黄囊间质干细胞 (YS -MSC)分化为脂肪细胞。方法 :显微分离人卵黄囊 ,经酶消化得到卵黄囊细胞 ,卵黄囊细胞经贴壁培养、传代纯化得到人YS -MSC ,流式细胞仪检测YS -MSC表面抗原表达 ,钙钴法测定碱性磷酸酶 (AKP)活性 ;地塞米松、消炎痛、胰岛素定向诱导YS -MSC分化为脂肪细胞。油红O检测中性脂肪。结果 :人卵黄囊间质干细胞易于分离、纯化 ,体外培养增殖潜能大。卵黄囊间质干细胞CD2 9、CD4 4、CD16 6及CD10 5表达阳性 ,CD34、CD4 5和CD86为阴性 ;AKP弱阳性。卵黄囊间质干细胞经成脂诱导转化为大小不等的园形或椭圆形细胞 ,可见胞浆内有少量微小脂滴形成 ,随时间延长 ,胞浆中脂滴相互融合 ,胞核被挤于细胞的一侧 ,经油红O染色脂滴染橘红色 ,符合脂肪细胞的生物学特征。结论 :人卵黄囊间质干细胞与成体间质干细胞表型一致 ,在体外可以分化为脂肪细胞。
- 那晓东朱美玲赵自平余伟华张秀明项鹏李树浓
- 关键词：干细胞胚胎发育分化卵黄囊
- 基因打靶技术及其发展和应用被引量：6
- 2005年
- 通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定位点的基因打靶技术,已经成为哺乳动物遗传学领域的重要工具。本文拟针对胚胎干细胞和体细胞的基因打靶的原理、技术路线及基因打靶技术的发展和应用作一综述。
- 窦薇
- 关键词：基因打靶同源重组胚胎干细胞基因打靶技术动物遗传学靶细胞
- 成功建立小鼠心肌梗死模型的探讨被引量：8
- 2007年
- 目的:探讨如何成功建立小鼠心肌梗死模型,提高动物的存活率。方法:采用结扎冠状动脉左前降支方法建立小鼠心肌梗死模型,术后4周取出心脏对心肌进行TTC和HE染色检测。结果:通过对常规手术方法进行改进,术后2周小鼠存活率由40%提高到75%。心肌颜色、心电图特异性改变及心肌TTC和HE染色证明制模成功。结论:正确使用麻醉药、顺利气管插管、准确结扎冠状动脉、减少出血与肺损伤及术后观察和护理是保证制模成功的基础。
- 云伟于艳秋卢晓梅金玉楠李昆
- 关键词：心肌梗死小鼠
