郑州市科技局科技攻关项目(10TGS484-12)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- RNA干扰沉默Ras同源类似物C对恶性黑色素瘤细胞侵袭转移的影响被引量：1
- 2013年
- 目的 观察靶向Ras同源类似物C（RhoC）的短发卡RNA（shRNA）质粒载体构建及RhoC基因沉默对人恶性黑色素瘤A375细胞侵袭、转移能力的影响.方法 构建3条质粒载体pGPU6/Neo-RhoC shRNA1、shRNA2和shRNA3,利用脂质体LlpofectamlneTM 2000转染A375细胞,Western blot检测转染后RhoC蛋白表达,并将最佳靶向序列质粒转染A375细胞,应用细胞黏附实验和Transwell小室细胞侵袭实验分别检测细胞黏附能力及侵袭能力.结果 构建的3条质粒载体pGPU6/Neo-RhoC shRNA1、shRNA2和shRNA3转染A375细胞后,RhoC蛋白表达水平分别为0.284 ±0.041、0.136±0.022和0.213 ±0.032,pGPU6/Neo-RhoC shRNA2为最佳靶向序列质粒；将pGPU6/Neo-RhoC shRNA2转染A375细胞,细胞对层粘连蛋白和纤维粘连蛋白的黏附能力、细胞穿膜细胞分别为0.473±0.085、0.324±0.023和50.000±14.526,较空白对照组和阴性对照组明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 利用RNAi技术成功构建pGPU6/Neo-RhoC shRNA质粒载体可显著下调体外培养的A375细胞RhoC蛋白的表达,且RhoC基因沉默后细胞的侵袭转移能力明显受到抑制.
- 王琪影王晓利刘林嶓
- 关键词：人黑色素瘤细胞RNA干扰
