国家高技术研究发展计划(2002BA711A11)
- 作品数：6 被引量：47H指数：5
- 相关作者：刘银坤贺福初何为许丹科刘志红更多>>
- 相关机构：军事医学科学院复旦大学解放军第307医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划北京市科技计划项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学更多>>
- 凝集素芯片检测肿瘤标志物糖蛋白N-聚糖及其在诊断中的意义被引量：5
- 2008年
- 背景与目的:肿瘤的发生、发展伴随着相关糖蛋白的糖基化改变,糖蛋白聚糖结构的多样性对其生理功能起着重要的作用。凝集素芯片是一种简单、快速、高通量的方法,可以分析肿瘤标志物糖蛋白的N-聚糖部分,是肿瘤相关糖蛋白质组学有力的研究工具。本研究探讨使用凝集素芯片检测肿瘤标志物糖蛋白N-聚糖,以期鉴别疾病性质。方法:利用生物芯片技术使用凝胶基片构建以不同凝集素和荧光标记糖蛋白特异性亲和为原理的凝集素芯片,可以检测糖蛋白的N-聚糖的特征性结构,比较相似糖蛋白的差异,进一步可以检测和比较不同来源相同肿瘤标志物糖蛋白的N-聚糖部分的细微差异。结果:凝集素芯片结果准确,荧光标记糖蛋白浓度与荧光值达10～1000nmol/L的Cy3浓度范围内存在线性关系,1mg/ml是合适的凝集素点样浓度;凝集素芯片非常敏感,在本研究的条件下,最低可测得达1pg的相应糖蛋白,凝集素芯片结合荧光探针技术可以鉴别不同来源甲胎蛋白N-聚糖结构的细微差别。结论:凝集素芯片检测糖蛋白N-聚糖结构切实可行、准确方便;凝集素芯片可以给出肿瘤标志物糖蛋白N-聚糖结构的信号模式图及其变化,在疾病的早期诊断方面具有重要意义。
- 陈培康晓楠孙璐郭坤樊嘉周俭邱双健汤钊猷刘银坤
- 关键词：凝集素生物芯片糖蛋白甲胎蛋白
- 氧化还原信号转导的分子机制被引量：7
- 2005年
- 氧化还原调控参与多种生物学过程,包括细胞增殖、分化和凋亡等的细胞信号转导和基因表达调控,因而在细胞生命活动中扮演着非常重要的角色。细胞内各种氧化还原介质,如活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)和活性氮(reactivenitrogenspecies,RNS)等,能对多种蛋白质在半胱氨酸残基上进行可逆性修饰。ROS或RNS对靶蛋白的氧化还原修饰方式主要有巯基/二硫键转换反应、S-亚硝基化及谷胱甘肽化等,这些修饰方式构成了胞内氧化还原信号转导的主要机制。
- 刘琼明张令强贺福初
- 关键词：RNS细胞信号转导分子机制靶蛋白基因表达调控生命活动
- 蛋白质微阵列芯片技术及其在抗体筛选中的应用被引量：16
- 2005年
- 以兔IgG为模式蛋白质,对其在醛基修饰玻片表面的固定浓度、固定时间和温度等条件进行了优化,结果表明:在室温下,当固定蛋白质的浓度为 1g/L、固定时间为 4h时,可获得理想的蛋白质固定效果;蛋白质的定量检测范围为 1μg/L^10mg/L。按优化的蛋白质微阵列芯片制作条件将规模化制备的抗体制作成抗体微阵列芯片,通过与荧光标记的人球蛋白和人白蛋白的相互作用,实现了对不同抗体株抗球蛋白和抗白蛋白活性的快速筛选与比较。
- 何为许丹科刘志红刘泽源黄英李明宁云山王云丹孙启鸿
- 关键词：微阵列荧光标记分析技术
- 肝癌转移相关的核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的研究被引量：8
- 2005年
- 通过比较研究不同转移潜能肝癌细胞系中核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的差别,筛查与转移相关的重要糖蛋白.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向电泳(2-DE)和凝集素印迹技术联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析,建立3种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L和MHCC97H的核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱.比较研究发现,不同转移潜能肝癌细胞呈现不同的SDS-PAGE/LCA凝集素印迹图谱,MHCC-97H和MHCC-97L在35～45 ku和45～60 ku间出现了Hep3B未见的条带.在核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱中,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别平均检测到(55±7)个蛋白质点(n=3),(60±6)个蛋白质点(n=3),(61±4)个蛋白质点(n=3);以各自双向电泳图谱为参考胶,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别与其匹配的平均匹配点数为(25±3)个(n=3),(30±4)个(n=3),(28±3)个(n=3).该图谱中,与Hep3B相比,MHCC97L有13个点未匹配,其中9个点为Hep3B(-)/MHCC97L(+);MHCC97H有9个点未匹配,其中6个点为Hep3B(-)/MHCC97H(+),MALDI-TOF-MS/MS可鉴定出Annexin1、Keratin 8等12种差异蛋白质.这些结果证实了不同转移潜能的肝癌细胞有明显的核心岩藻基化糖蛋白差异性表达.提示肝癌转移可能与这些差异糖蛋白及其核心岩藻糖基化有关.
- 代智刘银坤崔杰峰冯钜涛宋海燕陈洁孙瑞霞李娜申华莉张予杨芃原
- 关键词：肝癌细胞
- 人类蛋白质组表达谱蛋白质鉴定的分步搜索策略被引量：6
- 2005年
- 大规模蛋白质组表达谱研究的蛋白质鉴定一般采取基于数据库搜索的策略,因此数据库的选择及搜索策略在蛋白质鉴定中非常重要。现有的人类蛋白质数据库远不够完善,而从其他物种的蛋白质数据库中所能得到的补充非常有限,但人类基因组数据库中却可能存在很大的补充空间。在对国际人类蛋白质数据库充分调研、比较的基础上,提出了一种分步搜索的策略。这种策略首先利用一个质量较高、覆盖率相对较大的非冗余数据库进行基本鉴定,随后利用其他蛋白和核酸数据库进行补充鉴定和新蛋白挖掘。该策略能有效地鉴定尽可能多的高可靠蛋白,并能进一步充分利用质谱数据进行补充鉴定和新蛋白挖掘,对大规模蛋白质组表达谱研究具有重要的意义。
- 吴松锋朱云平贺福初
- 关键词：蛋白质组蛋白质鉴定蛋白质数据库
