国家自然科学基金(39870330)
- 作品数：14 被引量：47H指数：5
- 相关作者：郭坤元李玉华李江琪段连宁曹东林更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第一军医大学第一军医大学南方医科大学更多>>
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- 人自然杀伤细胞抑制性受体P58.2基因克隆与鉴定被引量：2
- 2003年
- 目的 :P5 8.2基因克隆与鉴定。方法 :采用RT -PCR技术 ,从正常人外周血单个核细胞中扩增自然杀伤细胞抑制性受体P5 8.2基因全长cDNA ,经酶切后构建重组克隆载体 ,双酶切和测序鉴定。结果 :RT -PCR获得了预期的扩增产物P5 8.2全长cDNA ,成功构建了 pSPORT1-P5 8.2重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与GenBank登记的人P5 8.2cDNA全长碱基序列一致。结论 :pSPORT1-P5 8.2重组克隆载体构建成功 ;P5 8.2基因序列与文献报道一致 ,为下一步构建表达载体和基因转染等工作打下良好的基础。
- 曹东林郭坤元李江琪
- 关键词：基因克隆反转录聚合酶链式反应
- 异基因骨髓移植中T细胞表达Ly49A与移植物抗宿主病发生相关被引量：12
- 2000年
- 段连宁郭坤元刘明李玉华
- 关键词：异基因骨髓移植T细胞KIR移植物抗宿主病
- 免疫耐受的新认识与分子基础被引量：5
- 2000年
- 目前研究发现免疫耐受产生机制的克隆排除学说存在着不少缺陷 ,学者们试图通过双信号、三信号及“danger”假说对其进行更正和完善。在这些假说中树突状细胞对免疫耐受发挥着举足轻重的作用 ,不同的树突状细胞将导致不同的免疫效应。某些新的分子如FasL和杀伤细胞抑制性受体在外周免疫耐受中的作用也日益受到关注 ,并成为治疗免疫性疾病及预防移植排斥的新靶点。
- 李玉华
- 关键词：免疫耐受T细胞树突状细胞FASL
- 人杀伤抑制性受体CD158b cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达
- 2004年
- 目的 :CD1 5 8b基因克隆与表达。方法 :采用RT -PCR技术 ,从正常人外周血单个核细胞中扩增编码CD1 5 8b的cDNA ,经酶切后将其克隆于pMBP -c表达质粒上 ,酶切和测序鉴定。构建的高效表达克隆子经IPTG诱导后 ,表达的重组蛋白经SDS -PAGE电泳分析。结果 :RT -PCR获得了预期大小的cDNA ,DNA测序结果与GenBank登记的人CD1 5 8b编码序列一致。pMBP -c -CD1 5 8b表达质粒酶切后结果与预期相符。表达的重组蛋白经SDS -PAGE电泳分析 ,得到分子量为 5 8kD的蛋白质 ,与理论值一致 ,所获重组蛋白占菌体总蛋白 2 5 %。结论 :获得了CD1 5 8b基因 ,并成功在大肠杆菌中表达 ,所获重组蛋白为进一步研究CD1 5
- 曹东林周思朗白英明何肖娟
- 关键词：逆转录聚合酶链式反应表达质粒造血干细胞移植
- 同种异基因Th2细胞移植对GVHD和GVL效应的作用被引量：10
- 2000年
- 为探讨同种异基因Th2细胞移植是否可以减低移植物抗宿主病 (GVHD)的发生和保留移植物抗白血病 (GVL)效应的作用 ,在体外用rmIL 4 ,ConA和离子霉素把供鼠 (C5 7BL/ 6 H 2b)T细胞优势化诱导培养为Th2细胞 ,再把Th2细胞与供鼠骨髓细胞混合移植给红白血病受鼠模型(EL96 11H 2d)。结果表明 :未处理的对照组 ,受鼠平均存活时间为 (10 .6± 1 3)天 ,10只均死于白血病 ;环磷酰胺化疗组 ,小鼠平均存活 (18 7± 4 2 )天 ,10只小鼠最终均死于白血病 ;骨髓细胞和脾T淋巴细胞移植组 ,小鼠平均存活 (2 2 7± 7 4 )天 ,9/ 10只均死于GVHD ;骨髓细胞和Th2细胞移植组 ,3/ 10只在 2 8天内死于GVHD ,其余 7/ 10只无GVHD发生 ,白血病发病时间明显推迟 ,平均存活 (36 9± 10 8)天 ,在 5 0天时检查有 2只鼠无白血病证据。研究证明体外极向化诱导培养的Th2细胞移植可减低GVHD发生的同时保留了抗白血病的能力。
- 段连宁郭坤元袁进杜江王三斌张立成李玉华
- 关键词：TH2细胞细胞移植移植物抗宿主病
- Ly49A转基因淋巴细胞对异基因骨髓移植后GVHD和GVL的影响被引量：2
- 2003年
- 目的 观察Ly49A基因转染淋巴细胞对异基因骨髓移植后移植物抗宿主病 (GVHD)和移植物抗白血病效应 (GVL)的影响。方法 经逆转录病毒介导将Ly49A基因转染至C57BL/ 6小鼠的淋巴细胞 ,以C57BL/ 6(H 2 b)小鼠为供者 ,以接种EL961 1红白血病细胞的BALB/c(H 2 d)小鼠为受者 ,进行脾淋巴细胞和骨髓细胞联合移植 ,建立异基因急性GVHD模型 ,观察Ly49A基因转染的淋巴细胞对GVHD和GVL的影响。结果 在未进行移植的单纯照射组 ,小鼠的存活时间为 (6 .50±2 .41 )d ;仅以环磷酰胺治疗的小鼠存活时间为 (2 0 .90± 2 .88)d ;非转染淋巴细胞和骨髓细胞联合移植组的存活时间为 (1 7.1 0± 4 .65)d ;空载体转染淋巴细胞和骨髓细胞联合移植组的存活时间为(1 7.40± 5 .32 )d ;Ly49A转染淋巴细胞与骨髓细胞联合移植组的存活时间为 (35 .2 0± 1 2 .52 )d ,较上述各组明显延长 (P =0 .0 0 0 )。
- 李玉华郭坤元陈永乐宋朝阳李江琪邓兰
- 关键词：GVL异基因杀伤细胞细胞表面受体GVHD
- Ly49A转基因小鼠脾细胞对半相合异基因骨髓移植后GVHD和GVL的作用被引量：2
- 2002年
- 目的 观察Ly4 9A基因转染的C5 7BL 6小鼠脾细胞对半相合异基因骨髓移植 (allo BMT)后移植物抗宿主病 (GVHD)和移植物抗白血病效应 (GVL)的影响。方法 经由逆转录病毒介导将Ly4 9A基因转染至C5 7BL 6小鼠的脾细胞 ;流式细胞仪检测Ly4 9A受体在转染后脾细胞上的表达率 ;以亲代C5 7BL 6H 2 b 小鼠为供者 ,以接种EL96 11红白血病细胞的 (BALB c×C5 7BL 6 )F1H 2 d b(CB6F1)小鼠为受者 ,预处理条件为全身照射 (TBI,6 0 Co照射 10 .5Gy) ,进行脾细胞混合骨髓细胞移植 ,建立半相合异基因急性GVHD模型并在该模型基础上观察Ly4 9A基因转染的脾细胞对GVHD和GVL的作用。结果 Ly4 9A基因转染的C5 7BL 6小鼠的脾细胞 2 4h后蛋白表达率为 (42 .2 0± 4 .87) % ,空载体转染组为(18.6 7± 2 4 8) % ,未转染对照组为 (18.73± 3.82 ) % ,在半相合异基因移植中 (C5 7BL 6 H 2b →CB6F1H 2d b) ,未进行移植的单纯照射组生存期为 (7.80± 3.36 )d ;环磷酰胺治疗组生存期为 (2 1.70±2 87)d ;脾细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 (2 9.4 0± 6 .4 3)d ;空载体转染的脾细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 (2 9.10± 7.39)d ;Ly4 9A转染的脾细胞混合骨髓细胞移植组生存期为 (45 .0 0± 12 .38)d ,较上述各组生存期明显延长
- 李玉华郭坤元陈永乐宋朝阳李江琪邓兰
- 关键词：小鼠脾细胞异基因骨髓移植移植物抗白血病效应
- Th2细胞移植减低异基因骨髓移植后移植物抗宿主病的实验研究被引量：7
- 2000年
- 段连宁郭坤元刘明杜江王三斌李江琪李玉华
- 关键词：异基因骨髓移植移植物抗宿主病
- CD158b基因转染的淋巴细胞对正常和HL-60细胞杀伤活性的实验研究被引量：1
- 2004年
- 曹东林郭坤元周思朗李玉华王春燕涂晓文
- 关键词：CD15KIR杀伤活性异基因骨髓移植
- 人p58.2重组逆转录病毒载体的构建及稳定包装细胞系的鉴定被引量：2
- 2003年
- 目的 构建并鉴定携带人p5 8 2基因的重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系。方法 用PCR技术从pSPORT1-p5 8 2扩增出编码p5 8 2N端 1～ 3 45个氨基酸的全长基因 ,定向克隆入逆转录病毒载体pMSCVneo中 ,酶切鉴定 ;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定产病毒的细胞株。结果 双酶切鉴定 ,成功构建重组逆转录病毒载体 ;重组逆录病毒载体转入包装细胞 ,经G418筛选 ,形成了抗性克隆 ,并测得病毒滴度为 3×10 5cfu/ml,提示构建携带人p5 8 2基因的逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论 构建人p5 8 2基因的逆转录病毒载体可行 。
- 曹东林郭坤元李江琪
- 关键词：逆转录病毒载体造血干细胞移植
