河北科技支撑计划项目(07220401D)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
- 相关作者：刘玉芝李巍李秀锦仲飞刘龙飞更多>>
- 相关机构：燕山大学河北农业大学更多>>
- 发文基金：河北科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 狐狸生长激素基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2009年
- 为制备重组狐狸生长激素(fGH),采用RT-PCR方法,从银狐垂体中扩增fGHcDNA基因,利用SnaBI和NotI位点将fGH基因插入到酵母分泌型表达载体pPIC9K中α-因子信号肽的下游,构建成fGH基因的酵母分泌型表达载体pPIC9K/fGH,载体经SalI酶切线性化后,通过电转移将线性化的pPIC9K/fGH转化到组氨酸缺陷型酵母宿主菌GS115中。然后利用不含氨基酸的以葡萄糖为碳源的培养基(MD)和以甲醇为碳源的培养基(MM)筛选出组氨酸His+型和甲醇利用正型(Mut+)酵母重组体,再经G418加压筛选出高拷贝fGH基因的重组酵母,经摇瓶发酵培养和甲醇诱导使fGH进行分泌表达。结果表明本实验扩增的fGH基因序列与GenBank发表的序列基本一致,发酵液经SDS-PAGE和Western blotting检测证明构建的重组酵母能够分泌表达fGH,表达的fGH占发酵液总蛋白的34%,表达量达119mg/L发酵液。
- 李巍李秀锦仲飞靳慧君解民刘玉芝刘龙飞苏清洁
- 关键词：CDNA毕赤酵母分泌表达
