国家自然科学基金(31101197)
- 作品数：3 被引量：16H指数：2
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- 相关机构：中国热带农业科学院海南大学更多>>
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- Cry1Ab基因转化甘蔗及转基因抗虫植株的获得被引量：9
- 2011年
- 构建玉米UBI启动子驱动Bt Cry1Ab基因的高效植物表达载体pUBTB,通过农杆菌介导法导入甘蔗愈伤组织,经过除草剂PPT三次连续筛选,共获得67株抗性植株,经PCR扩增检测,得到22株阳性植株,并对其进行RT-PCR检测,证明外源基因已经成功整合到其中的15株甘蔗基因组中,且得到了有效的表达。
- 冯翠莲沈林波赵婷婷王俊刚熊国如张树珍
- 关键词：甘蔗植物表达载体
- 抗真菌KP4蛋白的原核表达载体构建与表达
- 2012年
- 为制备KP4的多克隆抗体,将KP4编码框克隆到pMD19-T中,载体经测序后,亚克隆到原核表达载体pET32a中,获得了KP4的原核表达载体PET-KP4。将构建成功的KP4原核表达载体转化宿主菌BL21(DE3)并用IPTG对重组菌进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析诱导后重组菌的总蛋白显示,融合蛋白大小约为31 ku,以包涵体形式存在;对融合蛋白的表达条件进行了优化,KP4大量表达最佳培养温度为37℃,诱导剂IPTG的最佳浓度为1.0 mmol/L,最佳诱导培养时间为8 h;对目标蛋白进行包涵体破碎,用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析对总蛋白进行了纯化。SDS-PAGE电泳分析与蛋白浓度测定结果显示,目的蛋白纯度好,浓度达到了236μg/mL。
- 孔冉冯翠莲李晓君郭婷张树珍
- 关键词：包涵体IPTG纯化
- 转基因甘蔗植株Southern杂交体系的优化被引量：7
- 2015年
- 对甘蔗Southern杂交体系的优化,旨为转基因甘蔗Southern杂交鉴定分析提供参考。以转基因甘蔗为材料,就探针不同标记方法的比较、甘蔗基因组DNA的提取、基因组DNA酶切量、酶切时间及杂交过程等方面,对地高辛标记的Southern杂交技术进行了优化研究。结果表明,改良的CTAB法提取的甘蔗DNA能满足后期实验的要求;PCR法标记探针的效率较随机引物法标记探针的效率高,更适合用于Southern杂交;40μg的DNA在400μL酶切体系中,酶切10 h可获得良好的酶切效果;杂交温度40℃,杂交18 h,可获得清晰的杂交条带。
- 崔学强张树珍沈林波冯翠莲
- 关键词：甘蔗SOUTHERN杂交地高辛酶切
