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朊蛋白构象改变和种属突破机制的研究进展被引量：4: 2006年; 异常朊蛋白(P rP sc)是一种可引起人和动物传染性脑退化病的不含核酸的蛋白因子。P rP c是一个正常的蛋白,有正常的生理功能,主要分布于神经元表面,属于肌醇磷脂锚蛋白类。由P rP c向P rP sc转变即产生疾病。作者简单介绍了正常和异常朊蛋白结构、功能、构象改变及朊病毒种属屏障的研究进展,并提出了目前尚待研究的问题。; 张太翔赵德明; 关键词：朊蛋白

免疫治疗朊病的前景: 2007年; 神经元的死亡被认为是朊病的特点,这是由于细胞表面的唾液酸糖蛋白由正常的含有大量α螺旋的结构变成了异常的β折叠丰富的、具有蛋白酶抗性的结构。最近的研究结果表明,朊病的复制可以被抗PrP的单克隆抗体所抑制,能延长朊病毒的潜伏期,这增加了人们用抗体来治疗朊病的信心。; 张太翔赵德明; 关键词：中文关键词 PRPC PRPSC

金黄地鼠(Mesocricetus auratus)朊蛋白基因的克隆及其原核表达: 2008年; 采用RT-PCR技术从金黄地鼠(Mesocricetus auratus)脑组织获得朊蛋白基因(Prion protein nucleic acid,PRNP)开放阅读框(Open reading frame,ORF),截去其N端信号肽(66 bp)和C端GPI锚定位点(69 bp)形成朊蛋白编码区PRNPx;将编码区重组于融合表达质粒Pet-DsbA中,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中经IPTG诱导表达,并经Western-blot验证。结果表明,金黄地鼠PRNP基因ORF区全长为765 bp,编码254个氨基酸的前体蛋白,核苷酸序列与已发表金黄地鼠序列(M14054)同源性为99.87%,其第116个氨基酸发生了同义突变由GCT变为GCC;朊蛋白在大肠杆菌得到高效表达,产物是相对分子质量为47 000的融合蛋白。; 李玉荣霍桂桃周向梅尹晓敏赵德明; 关键词：金黄地鼠朊蛋白基因克隆原核表达

绵羊重组朊蛋白的原核表达与结构分析被引量：1: 2006年; 利用DNA重组技术,将绵羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrP^C插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21 (DE3)中高效表达,获得的表达产物为绵羊朊蛋白OvPrP(23～256)。经SDS-PAGE分析,表达产物以包涵体形式存在。将包涵体蛋白用8mol/L尿素溶解,在变性条件下经Ni-NTA柱亲和层析纯化,而镍柱能竞争性结合含有6×His标签的pET30a表达的目的蛋白。由于目的蛋白是在变性条件下纯化的,需要将其复性后才能恢复天然构象。采用梯度尿素透析复性后,复性率为25%左右。为了进行重组朊蛋白的结构分析,将重组蛋白进行超滤浓缩,至蛋白浓度为0．4mg/mL时,采用远紫外线圆二色谱(CD)分析其二级结构,并对其高级结构进行了预测。结果表明：通过Western-blotting鉴定,表达的绵羊朊病毒正常成熟蛋白OvPrP(23～256)的分子量为25172．80u左右。经过Jascow32软件分析后,测得OvPrP(23～256)的二级结构含量为：α螺旋为39．4%,β折叠为0%,转角为0%,无规卷曲为60．6%。绵羊重组朊蛋白高级结构的分析为朊病毒疾病的发生机理的探讨提供科学依据。; 刘美丽赵德明周向梅尹小敏; 关键词：原核表达圆二色谱

朊病毒外周传播机理的研究进展: 2007年; 朊病是一种神经退行性疾病,能造成大脑神经细胞的广泛性损伤,最终导致死亡。一些朊病因子在感染部位向大脑入侵时先在淋巴组织中沉积,如在肠道中。对鼠模型的研究结果表明,这种沉积是必需的,它能使朊病因子有效到达大脑,如果这种在淋巴组织的沉积被阻断,就使疾病的易感性减弱。因此,鉴定在朊病毒到达大脑过程中参与的细胞和分子可以筛选出治疗本病的药物。作者就目前对朊病毒外周传播机理的理解作一综述。; 张太翔赵德明; 关键词：朊病毒淋巴组织

Westernblot检测奶牛生殖系统朊蛋白的分布: 2008年; 张太翔田国宁张金玲田国华赵德明; 关键词：生殖系统传染性海绵状脑病慢性消耗性疾病朊蛋白奶牛牛海绵状脑病

牛分枝杆菌MPB83基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：2: 2006年; 为观察重组MPB83蛋白的免疫活性,揭示该蛋白在牛结核病的诊断和防治中的作用,克隆了牛分枝杆菌MPB83基因,构建了克隆载体pGEM-MPB83和表达载体pET30a-MPB83,经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。试验结果表明:牛分枝杆菌MPB83基因体外扩增产物与预期值相符,约600 bp;所构建表达质粒pET30a-MPB83经测序,结果与预期一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体的形式表达,其分子质量约为26 ku,蛋白表达量占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达95%以上;免疫印迹分析表明,原核表达的融合蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,并且具特异的免疫反应性。; 李晶晶赵德明徐广贤周向梅尹晓敏; 关键词：牛分枝杆菌克隆原核表达免疫印迹蛋白纯化

朊蛋白基因在奶牛生殖系统不同组织中的表达量测定被引量：2: 2007年; 为了研究疯牛病能够垂直传播的理论基础,我们采用PrP基因做目的基因,GAPDH基因做内参照的相对荧光定量RT-PCR方法,对目的基因和内参基因分别构建标准重组质粒,制备标准曲线,利用标准曲线对采集雌雄奶牛生殖系统的12个不同组织PrP基因表达进行定量。试验结果表明雌雄奶牛的生殖系统各部分组织都有PrP基因表达,其中雄性奶牛的睾丸、附睾和输精管呈现高的表达量,分别为1.16±0.0010、1.81±0.0056、0.68±0.0038;前列腺、精囊腺和尿道球腺呈现中等表达量,分别为0.47±0.0018、0.25±0.0007、0.28±0.0007;阴茎呈现低的表达量为0.18±0.0017;雌性奶牛的子宫、子宫阜呈现高的表达量,分别为2.53±0.0008、1.75±0.0098;卵巢和输卵管呈现中等表达量,分别为1.55±0.0038、1.45±0.0064;阴道呈现低表达量为0.57±0.0036。本研究为阐释PrP基因在奶牛生殖系统的正常表达和正常的生理功能,以及为确定生殖系统在疯牛病垂直传播中的地位和其分子机理奠定了基础。; 张太翔杨建民周向梅尹晓敏赵德明; 关键词：朊蛋白基因奶牛生殖系统 MRNA表达实时荧光定量RT-PCR

牛分支杆菌与肺结核分支杆菌基因组的比较被引量：12: 2006年; 通过比较基因组学的方法研究发现,牛分支杆菌与肺结核杆菌基因组的同源性为99.95%,但在牛分枝杆菌基因组中有11个缺失区,大小从1kb到12.7kb,遗传信息的缺失引起牛分枝杆菌的基因组减小;牛分枝杆菌与肺结核分枝杆菌H37Rv间存在着2437个单核苷酸多态性(SNPs),与肺结核分枝杆菌CDC1551间存在着2423个单核苷酸多态性(SNPs),牛分支杆菌与肺结核分枝杆菌在编码细胞壁和分泌蛋白上变异程度也是巨大的。研究结果揭示了牛分支杆菌与肺结核分枝杆菌的遗传关系,为研究分支杆菌疫苗和诊断试剂提供理论依据,对牛肺结核病的防治有着非常重要的意义。; 徐广贤赵德明; 关键词：牛分支杆菌比较基因组学

朊蛋白在奶牛生殖系统特异性表达的研究: 利用实时荧光定量RT-PCR技术,采用GAPDH基因做内参照,对奶牛生殖系统的12个不同部位组织提取总RNA,进行PrP基因表达的定量研究。结果发现,雌雄奶牛的生殖系统各部分组织都有PrP基因表达,其中雌性奶牛的卵巢、子...; 张太翔赵德明; 关键词：实时荧光定量RT-PCR; 文献传递

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国家教育部博士点基金(20050019031)

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