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鸡血清与卵黄中抗中华眼镜蛇毒IgY动态变化研究被引量：2: 2006年; 目的探索特异性IgY的产生和变化规律。方法用眼镜蛇毒原毒免疫产蛋母鸡,ELISA定期检测卵黄中的抗体效价变化,小鼠体外中和实验检测其生物活性。第1次免疫40周后,眼镜蛇毒攻击已免疫母鸡,检测攻击前后鸡血清中抗体效价变化情况,未经眼镜蛇毒免疫的母鸡作阴性对照。结果经免疫后第7天蛋黄中即可检测到抗体,经多次加强免疫,40周时蛋黄中还能保持高效价的抗体,通过分离纯化,此抗体可保护实验小鼠免受4 LD50眼镜蛇毒的攻击;同时,鸡血清中也保留着较高效价的抗体,可中和4 LD50以上的眼镜蛇毒。结论用眼镜蛇毒免疫鸡,经多次加强免疫,卵黄和鸡血清中可持久保持高效价的特异性抗体,初步检测此抗体可中和4 LD50的蛇毒。; 刘四红孔天翰; 关键词：眼镜蛇毒鸡卵黄抗体免疫

抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备、纯化和保护性实验研究被引量：8: 2006年; 目的:探索抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体(IgY)的制备方法及其生物学活性,为替代马源性抗蛇毒血清奠定基础。方法:眼镜蛇毒原毒免疫母鸡,采用水稀释-硫酸铵盐析-阴离子交换层析三级提取法纯化IgY;SDS-PAGE测定各级提取物的抗体纯度;间接ELISA法和双向免疫扩散法观察效价变化;动物体外中和实验检测其生物活性。结果:卵黄经水稀释法及经60%硫酸铵盐析蛋白回收率为40.36%;进一步经阴离子交换层析,总蛋白回收率14.86%,效价提高24倍;IgY分子量约为220 kD,由两个亚基组成;体外中和试验表明,2.28 mg/kg特异性IgY能完全中和2 LD50的眼镜蛇毒,保护小鼠免受眼镜蛇毒的攻击。结论:以眼镜蛇毒原毒为免疫源,经水提、盐析、层析三级提取,可从鸡卵黄中获得高纯度、高活性的特异性IgY。; 刘四红孔天翰; 关键词：蛇毒鸡卵黄抗体眼镜蛇

眼镜蛇毒细胞毒素CTXn的致死毒性及药物依赖性研究被引量：3: 2010年; 目的研究眼镜蛇毒细胞毒素CTXn的致死毒性和药物依赖性,评价其安全性。方法检测CTXn的LD50和对肝细胞色素P450含量的影响,采用大鼠催促戒断模型、自然戒断模型及大鼠条件性位置偏爱模型检测CTXn的药物依赖性。结果 CTXn的LD50为19.61 mg/kg,长期给药对肝细胞色素P450含量无影响。在催促戒断试验中,大鼠连续腹腔注射不同剂量CTXn(0.5、1.0、2.0 mg/kg)10天后经纳洛酮催促,未出现戒断症状及体重下降现象;在大鼠自然戒断试验中,CTXn连续给药21天,停药后大鼠没有出现戒断反应及体重下降现象;在大鼠条件性位置偏爱试验中,CTXn不同剂量组分别连续用药15天后,大鼠在伴药盒的逗留时间均无明显延长,不形成条件性位置偏爱。结论 CTXn毒性较小,长期给药对肝脏药物代谢功能无影响。且不具有身体依赖性及精神依赖性,有潜在的药物开发价值。; 崔超伟李春霞董伟华孔天翰; 关键词：戒断身体依赖性

抗眼镜蛇毒血清对中华眼镜蛇伤大鼠保护的时效性研究被引量：4: 2007年; 目的观察中华眼镜蛇伤后不同时期应用抗蛇毒血清对机体保护作用的差异,为探索临床抗蛇毒血清使用的最佳有效时段提供依据。方法将SD大鼠随机分成6组(蛇毒组、40、60、80、100、120 min血清保护组),每组30只。动物经戊巴比妥腹麻,于单侧背部皮下及双侧小腿腓肠肌注射眼镜蛇毒以制备中华眼镜蛇毒挑战剂量(4×LD50)大鼠模型,分5个不同时段分别注射抗蛇毒血清,于注毒后连续观察3 h,统计各组平均存活时间、成活率及保护率。结果蛇毒组大鼠注入挑战剂量的眼镜蛇毒后,平均存活时间为(148.8±11.4)min,成活率仅为20%;其他血清保护组分别于注毒后40、60、80、100、120 min经腹腔注射精制抗眼镜蛇毒血清(125 u血清/mg蛇毒),40 min血清组保护率达80%;60 min血清组存活率及保护率分别达到70%、50%,平均存活时间为(172.8±7.2)min,与蛇毒组相比有明显差异(P<0.01);而801、00 min血清组保护率依次下降,分别为40%、30%,但仍较蛇毒组显著提高(P<0.01);120 min血清组存活时间及保护率与蛇毒组比较差异无显著性。结论利用中华眼镜蛇毒挑战剂量大鼠模型,通过不同时段施予同剂量抗血清,可显示出明显的机体保护时效性,该研究为探讨临床正确使用抗蛇毒血清提供了新的实验依据。; 陈学文冯凤琼钟兆堂黄家杰庄园杨嘉琳祁俊华孔天翰; 关键词：中华眼镜蛇抗蛇毒血清

抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备及其效价测定被引量：7: 2006年; 目的探索免疫鸡制备高效价抗眼镜蛇毒抗体的新方法。方法用中华眼镜蛇原毒作抗原免疫22周龄的莱航母鸡,水溶法粗提抗体,DEAE Sepharos FF柱纯化,切向流超滤膜脱盐及浓缩,免疫电泳及双向免疫扩散法进行鉴定及效价测定,采用BCATMProte in Assay K it测定蛋白含量。结果鸡卵黄经水溶法的粗提物与中华眼镜蛇毒即有较明显沉淀反应,其效价随着纯度的提高而增强。将马源性抗血清的蛋白质含量调至与浓缩的IgY相同(2mg/m l),经双向免疫扩散及免疫电泳鉴定,该抗体不但对中华眼镜蛇毒有特异性结合,与孟加拉眼镜蛇毒亦有较强的交叉免疫活性,其效价较马抗眼镜蛇毒血清高4倍以上。结论用中华眼镜蛇原毒制备的IgY抗体,其效价较马抗血清有显著提高,并与孟加拉眼镜蛇毒有高度交叉免疫。本实验为抗眼镜蛇IgY的应用及其它抗蛇毒IgY的制备奠定了基础。; 刘四红侯力强孔天翰; 关键词：蛇毒卵黄抗体中华眼镜蛇

抗蝰蛇毒IgY灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用的研究被引量：1: 2008年; 目的探讨抗蝰蛇蛇毒鸡卵黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY)经腹腔注射或灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用,为其口服制剂的应用奠定理论基础。方法用蝰蛇原毒单一抗原免疫母鸡,收集第12天以后的鸡蛋,用水稀释法提取抗蝰蛇毒IgY;间接法ELISA检测IgY的效价和灌胃小鼠体内IgY的吸收时间;以胃排空率实验确定蛇伤前灌胃IgY的最佳时间,以腹腔注射和不同浓度IgY灌胃实验分别检验IgY对蝰蛇伤小鼠的保护作用。结果初次免疫后第12天开始收集抗体,水稀释法提取的IgY效价为1∶6400;不同浓度IgY灌胃后,2.5～3.5h胃排空率均达61.8%以上,血浆中抗体效价亦相应达高峰;腹腔注射和IgY灌胃实验对蛇伤小鼠的保护作用明显,小鼠的存活时间与阴性IgY组小鼠相比差异显著(P<0.05);同等效应下,灌胃IgY的有效剂量大约为腹腔注射的10～15倍。结论抗蝰蛇蛇毒IgY经腹腔注射和灌胃实验均能有效保护蝰蛇伤小鼠。; 祁俊华孔天翰; 关键词：蛇毒鸡卵黄抗体

圆斑蝰泰国亚种蛇伤大鼠模型多项指标动态观察被引量：3: 2008年; 目的建立圆斑蝰泰国亚种蛇伤大鼠模型，通过对其中毒后电生理、出血时间（Bleeding Time，BT）、皮下出血区（subcutaneous hemorrhagic region，SHR）及血液生化等多项指标的动态观察，为蛇毒毒理及抗蛇毒制剂的研究提供实验数据。方法SD大鼠分为圆斑蝰泰国亚种蛇毒（Daboia russellii siamensis Venom，DRSV）组和生理盐水（NS）组，戊巴比妥腹麻，注入DRSV或NS后，连续3h监测心率（heartrate，HR）、呼吸频率（respiratoryrate，RF）及腹肌反射阈（abdominal muscle reflex threshold，AMRT），定期测定BT；电生理记录结束后，经心脏取血进行血液生化检测，暴露背部注射点，测量皮下出血区。结果腹腔注入1．5倍LD50的DRSV，大鼠平均生存时间为（3．7士0．53）h。与NS组比较，DRSV组大鼠于注毒后45min，HR、AMRT均显著下降（P〈0．05～0．01），RF呈先微升后缓降的变化过程，BT明显缩短（P〈0．01）；180min后，尿素氮、肌酐、尿酸、总胆红素、磷酸肌酸激酶、磷酸肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶等检测值均显著升高（P〈0．05～0．01），DRSV组的SHR约为3．0cm×3．0cm。结论蝰蛇伤大鼠模型有关电生理、BT的动态指标及血液生化等多项检验数据与蛇伤临床症状基本相符，在蝰蛇伤临床诊治及蝰蛇毒的实验研究方面有一定的参考价值。; 陈艳芳许泽明区焕桃邓靖文黄群娣孔天翰; 关键词：蛇毒电生理出血时间生化检测

蝰蛇毒压电免疫传感器固定方法的研究: 2008年; 目的:为研制蝰蛇毒压电免疫传感器,研究抗蛇毒抗体固定于石英晶体银电极表面的固定技术。方法:采用马抗蝰蛇毒血清抗体和抗蝰蛇毒鸡卵黄抗体作为生物敏感材料,对比研究了胱胺自组装-PSS反相吸附法和PEI粘附-戊二醛交联法;比较了采用两种固定方法所制的压电免疫传感器的性能。结果:鸡卵黄抗体采用PEI粘附-戊二醛交联法效果较好,其制备的IgY压电免疫传感器检测蝰蛇毒灵敏度为0.5μg/mL;而马血清抗体用胱胺自组装-PSS反相吸附法较好,其制备的IgG’免疫传感器检测蝰蛇毒灵敏度为10μg/mL。结论:以PEI粘附-戊二醛交联法固定抗蝰蛇毒鸡卵黄抗体所制备的蝰蛇毒压电免疫传感器的性能稳定,特异性好,可实现蛇毒的快速检测。; 刘仲明浦金辉杨泳仪孔天翰; 关键词：压电免疫传感器蝰蛇毒鸡卵黄抗体

双价抗蛇毒鸡卵黄抗体制备与生物活性研究: 2009年; 目的通过双价抗蛇毒鸡卵黄抗体（bivalent anti—snake venom immunoglobulin yolk，双价IgY）的制备及其相关特性研究，为多价抗蛇毒IgY的制备和应用奠定基础。方法两种单一抗原（舟山眼镜蛇、圆斑蝰泰国亚种）按顺序依次交替注入单只鸡体内，水稀释法制备双价IgY；测定双价IgY效价（间接ELISA法）、交叉免疫特性（双向免疫扩散试验）及对溶膜活性（溶膜试验）、半数致死量（LD50）的中和作用。结果初次免疫后第28～42天，以水稀释法提取的双价IgY对眼镜蛇毒及蝰蛇毒的效价分别为1：12800和1：6400。双价IgY与眼镜蛇亚科、蝰亚科6种蛇毒有明显的交叉免疫反应，而与蝮亚科4种蛇毒的交叉免疫反应不明显。双价IgY能显著降低眼镜蛇、蝰蛇毒对鸡卵黄膜的溶膜作用，也能显著延长眼镜蛇和蝰蛇伤小鼠的存活时间（P〈0．05），同等剂量的双价IgY提高眼镜蛇伤存活率优于蝰蛇伤。结论双价IgY能够显著中和眼镜蛇、蝰蛇毒的溶膜和致死活性，能有效保护机体免受眼镜蛇毒和蝰蛇毒的攻击。; 祁俊华孔天翰; 关键词：眼镜蛇毒蝰蛇毒交叉免疫

蝰蛇毒压电免疫传感器的研制: 2008年; 采用聚乙烯亚胺（PEI）科学仪黏附、戊二醛（Glu）交联的方法，将抗蝰蛇毒IgY固定于石英晶体表面，制成蝰蛇毒压电免疫传感器。该传感器用于检测浓度范围为0．5～100ug／mL的蝰蛇毒时，呈线性相关，相关系数为0．962，具有良好的选择性。; 杨泳仪浦金辉刘仲明孔天翰; 关键词：压电免疫传感器蝰蛇毒鸡卵黄抗体

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广东省自然科学基金(204102537)

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