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广东省科技计划工业攻关项目(2008B030301190)
广东省科技计划工业攻关项目(2008B030301190) 作品数:4 被引量:5 H指数:1 相关作者: 曾曙光 吴世卿 章锦才 郑俊发 陈少鹏 更多>> 相关机构: 广东省口腔医院 南方医科大学 中国科学院广州生物医药与健康研究院 更多>> 发文基金: 广东省科技计划工业攻关项目 广东省医学科学技术研究基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
人脐静脉内皮细胞的分离培养和鉴定及酪氨酸激酶受体-2在其中的表达 被引量:4 2009年 目的分离和培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),对其进行鉴定,并探讨酪氨酸激酶受体-2(Tie-2)基因在HUVECs中的表达情况。方法用胰蛋白酶消化、分离HUVECs并对其进行培养,根据细胞生长特点、形态特征和Ⅷ因子免疫荧光组化技术对细胞进行鉴定。分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和SABC免疫细胞化学染色对HUVECs中Tie-2mRNA和蛋白表达情况进行检测。结果原代培养的HUVECs约于24h完全贴壁,4~5d后融合成单层铺路石样结构。Ⅷ因子免疫荧光组化法证实细胞是HUVECs。RT-PCR检测到HUVECs中Tie-2mRNA条带明显,SABC免疫细胞组化法检测到Tie-2蛋白在HUVECs胞浆、核膜中呈强阳性表达,阳性率为85%以上。结论胰蛋白酶灌流消化法可获得高纯度的HUVECs,Tie-2在HUVECs中呈强阳性表达。 吴世卿 郑俊发 曾曙光 陈少鹏 薛国初 章锦才关键词:人脐静脉内皮细胞 肿瘤 单纯疱疹病毒胸苷激酶与绿色荧光蛋白基因真核共表达质粒的构建 被引量:1 2009年 【目的】构建含有人巨细胞病毒(CMV)调控表达的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达质粒pCMV-TK-IRES-EGFP。【方法】设计HSV-tkcDNA的特异引物,PCR扩增获得HSV-tk基因序列,将PCR产物进行T载体克隆获得重组质粒pMD18T-TK,测序分析选定序列正确的克隆提取质粒,用限制性内切酶SalⅠ和BamHⅠ分别酶切pMD18T-TK和pCMV-IRES-EGFP质粒,将HSV-tk基因定向亚克隆至pCMV-IRES-EGFP载体,酶切鉴定,构建获得含EGFP和HSV-tk基因的重组质粒,Lipofectin介导转染小鼠黑色素瘤B16细胞并检测其表达情况。【结果】酶切见特异酶切图谱,该质粒在瞬时表达时获得EGFP的良好表达。【结论】含HSV-tk和EGFP基因真核表达质粒pCMV-TK-IRES-EGFP构建成功,为利用绿色荧光蛋白标记在后续实验中进行自杀性基因治疗的深入研究奠定了基础。 曾曙光 吴世卿 张积仁 章锦才 刘启才 艾伟健关键词:内部核糖体进入位点 真核表达 RNA干扰酪氨酸激酶受体2对人脐静脉内皮细胞增殖的影响 2012年 目的研究抑制酪氨酸激酶受体2(Tie2)对内皮细胞凋亡和增殖活性的影响。方法采用RNA干扰技术,将含有Tie2基因的特异性短发夹状RNA(shRNA)片段的质粒转染入人脐静脉内皮细胞(HUVECs),采用实时定量逆转录聚合酶链反应和免疫印迹法检测细胞中Tie2 mRNA和蛋白表达的改变;噻唑蓝比色分析(MTT)法检测细胞的生长情况;显微镜下观察细胞凋亡情况。以转染了pGenesil-hk质粒组为阴性对照,未转染质粒组为空白对照。结果质粒转染入HUVECs后,实验组细胞中Tie2 mRNA和蛋白表达水平较阴性对照组和空白对照组下调,尤以转染后48 h Tie2的mRNA和蛋白表达水平下调更为明显(P<0.05)。MTT检测结果显示:实验组细胞的增殖活性受到明显抑制(P<0.05)。转染48 h后,实验组的细胞凋亡率明显高于两个对照组(P<0.05)。结论 RNA干扰技术沉默Tie2基因可致Tie2基因表达下调后诱导HUVECs凋亡,并抑制HUVECs的增殖。 吴世卿 曾曙光 温志欣 彭细毛 李玉兰 卿安蓉关键词:细胞凋亡 人脐静脉内皮细胞 增殖 抗血管生成 Tie-2在人脐静脉内皮细胞中的表达及意义 2009年 目的探讨酪氨酸激酶受体-2(tyrosine kinase with immunoglobulin-like and epidermal growth factor homology domains,Tie-2)基因在人脐静脉内皮细胞株ECV304中的表达,为进一步研究Tie-2在肿瘤血管生成中的作用提供实验基础。方法传代人脐静脉内皮细胞进行培养和形态学观察,采用免疫组化(SABC法、DAB显色)对人脐静脉内皮细胞株ECV304中的Tie-2基因的蛋白表达情况进行检测。结果相差显微镜下,培养的活细胞具有单层"卵石样"排列的典型特征,SABC法检测到Tie-2蛋白在人脐静脉内皮细胞株ECV304细胞膜、细胞浆和核膜中均呈深棕色颗粒。结论Tie-2在ECV304细胞株中呈强阳性表达。 吴世卿 曾曙光 郑俊发 艾伟建 章锦才关键词:内皮细胞 肿瘤