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山东省博士后创新项目(03BS044)

作品数：1 被引量：3H指数：1
相关作者：王海波刘春远周岩冰更多>>
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文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核表达载体
  • 1篇胃癌
  • 1篇胃癌细胞
  • 1篇细胞
  • 1篇基因
  • 1篇基因表达
  • 1篇核表达
  • 1篇癌细胞
  • 1篇P21^WA...
  • 1篇P27^KI...

机构

  • 1篇青岛大学医学...

作者

  • 1篇周岩冰
  • 1篇刘春远
  • 1篇王海波

传媒

  • 1篇中华实验外科...

年份

  • 1篇2008
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
p21^WAF1与p27^KIP1真核双表达载体的构建鉴定及在胃癌细胞中的表达被引量：3
2008年
目的构建p21^WAF1与p27^KIP1真核双表达载体，体外转染胃癌7901细胞，观察其在胃癌细胞中的表达及相关特性。方法提取人全血总RNA，利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增p21^WAF1和p27^KIP1基因并将其分别克隆到真核双表达载体pIRES中构建重组质粒pIRES-p27^KIP1-p21^WAP1，经酶切和测序鉴定重组质粒。脂质体介导重组质粒pIRES-p27^KIP1-p21^WAP1转染胃癌7901细胞，收集并提取转染后12、24、48、72h和5d各细胞的总RNA，逆转录成cDNA，荧光定量聚合酶链反应（FQ-PER）检测各细胞中p21^WAF1和p27^KIP1在RNA水平的表达。带有绿色荧光蛋白的pIRES-EGFP作为对照。结果RT-PCR扩增分别获得约500和600bp大小的产物，重组质粒pIRES-p27^KIP1-p21^WAF1经酶切和测序鉴定证实为p21^WAF1和p27^KIP1。基因。转染胃癌7901细胞48h时转染率为68％。与空质粒对照组比较，重组质粒转染胃癌7901细胞12、24、48、72h和5d后FQ-PCR证实p27^KIP1。的Ct值（cycle threshold，Ct）分别减少8．2、10、10、7、4和6．7，p21^WAF1的Ct值分别减少7．4、8．2、8．2、6．3和5．7。其中24h和48h的Ct值减少最大。结论真核双表达载体pIRES-p27^KIP1-p21^WAF1构建成功并能在胃癌7901细胞内高效表达。
王海波刘相萍杨堃隋爱华刘春远周岩冰
关键词：真核表达载体胃癌基因表达
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