湖南省自然科学基金(11JJ7005)
- 作品数：10 被引量：48H指数：3
- 相关作者：周智广黄干李霞罗说明向宇飞更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅二医院中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金长江学者和创新团队发展计划卫生部卫生公益性行业科研专项更多>>
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- 胰升糖素样肽1类似物利拉鲁肽对正常人和1型糖尿病患者CD4＋CD25-T细胞增殖的影响被引量：3
- 2013年
- 目的观察胰升糖素样肽1（GLP—1）类似物利拉鲁肽对正常人和新发1型糖尿病患者外周皿CD4＋CD25-T细胞增殖的影响，评价利拉鲁肽对1型糖尿病可能的免疫调节作用。方法免疫磁珠法分离10名正常人和10例新发1型糖尿病患者的外周血CD4＋CD25T细胞．用CD3／CD28单抗包被的T细胞扩增磁珠刺激增殖。以CFSE染色通过流式细胞术比较在不同浓度利拉鲁肽（0、25、50和100nmol／ml）干预后，对CD4＋CD25＋T细胞增殖的影响。结果（1）利拉鲁肽剂量依赖性抑制正常人和新发1型糖尿病患者的CD4＋CD25＋T细胞的增殖（各干预浓度组间P〈0．05）；（2）在利拉鲁肽各干预浓度组，1型糖尿病患者的CD4＋CD25T细胞的增殖作用显著强于正常人的CD4＋CD25T细胞（P〈0．01）：（3）利拉鲁肽对正常人和新发1型糖尿病患者的CD4＋CD25T细胞增殖的抑制程度则无明显差别（P〉0．05）。结论1型糖尿病患者的CD4＋CD25＋T细胞的增殖作用显著增强，提示1型糖尿病患者存在细胞免疫紊乱。利拉鲁肽在体外对CD4＋CD25-T细胞的增殖具有抑制作用，这种免疫负性调节作用使其在1型糖尿病治疗方面具有潜在的应用价值，
- 胡瑛苏欣刘灵佳向宇飞余琪琪易受南周智广
- 关键词：胰升糖素样肽1利拉鲁肽CD4+CD25+T细胞免疫调节
- 人天然CD4^+CD25^+调节性T细胞的体外扩增培养及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:建立有效的体外培养扩增人天然CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)的体系,并检测扩增细胞的表型及体外免疫抑制功能,为Treg应用于临床免疫治疗提供实验基础。方法:免疫磁珠分离(MACS)方法从人外周血单个核细胞中分离CD4+CD25+Treg,加入抗CD3/CD28包被磁珠刺激扩增;用台盼蓝染色法测定新鲜分选的和扩增的Treg的数量和活性,用流式细胞法检测新鲜的和扩增的Treg主要表型标志和纯度,用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)法检测扩增的Treg对羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酶(CFSE)标记的自体和异体的CD4+CD25–T细胞增殖的抑制作用。结果:扩增3周后Treg数目约为新鲜分选细胞数的2 000倍(由5.23×105±1.52×105扩增至1.02×109±0.20×109),活性>97%。扩增3周后的Treg与新鲜分选细胞保持了相似的表型特征:CD4+CD25+FoxP3+三阳细胞约占(94.22±2.12)%,与新鲜分选细胞相似。扩增3周后的Treg对自体和异体的CD4+CD25–T细胞的增殖均有明显的抑制作用,抑制率随着效靶比浓度的增高而增高(P<0.01),而且其各浓度梯度对自体和异体CD4+CD25–T细胞的抑制率无明显差异(P>0.05)。结论:创建的分离和体外扩增人CD4+CD25+Treg的方法,可以大量扩增出高纯度且保留其免疫抑制功能的Treg,解决了Treg数目少的问题,有利于进一步的免疫研究和治疗。
- 胡瑛苏欣刘灵佳向宇飞余琪琪易受南易受南
- 关键词：体外扩增免疫抑制
- 锌转运体8的临床意义及其作用机制被引量：1
- 2012年
- 糖尿病是一种由多种遗传因子和环境因素共同作用所引起的以慢性高血糖为特征的代谢紊乱性疾病。最近研究发现β细胞特异性锌转运体8（zinc transporter 8，ZnT8）既是1型糖尿病的一种主要自身靶抗原.
- 罗说明黄干周智广
- 关键词：锌转运体代谢紊乱性疾病1型糖尿病慢性高血糖细胞特异性环境因素
- 人白细胞抗原DQ单体型对特发性1型糖尿病免疫病因分型的意义被引量：3
- 2014年
- 目的 通过对临床特征、锌转运体8自身抗体（ZnT8A）、分泌干扰素γ的谷氨酸脱羧酶65反应性T细胞（GAD65-IFN-γ-T细胞）检测情况的比较,探讨人白细胞抗原（HLA） DQ单体型对初诊特发性1型糖尿病免疫病因分型的价值.方法 将2000年3月至2011年12月收治的52例自发酮症或酮症酸中毒起病,谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体（IA-2A）及胰岛素自身抗体（IAA）均阴性,且依赖胰岛素治疗的湖南省汉族新发1型糖尿病患者纳入本研究.放射配体法检测锌转运体8自身抗体（ZnT8A）,酶联免疫斑点技术（ELISPOT）检测GAD65-IFN-γ-T细胞,聚合酶链反应（PCR）直接测序法测定HLA-DQ基因型.将研究对象分为HLA-DQ易感单体型携带组和HLA-DQ易感单体型不携带组,并以1年为间隔随访3年.比较两组起病初期的临床特征、ZnT8A及GAD65-IFN-γ-T细胞检测情况,随访时胰岛自身抗体的变化.两组间计数资料比较采用x2检验.结果 52例初诊特发性1型糖尿病患者中5例ZnT8A阳性,阳性率9.6％;16例ZnT8A阴性且接受GAD65-IFN-γ-T检测的患者中,2例GAD65-IFN-γ-T阳性,阳性率12.5％.与HLA-DQ易感单体型不携带组相比,携带组起病初期酮症程度更严重（Z=-2.84,P＜0.05）,空腹C肽水平更低（x2 =0.38,P＜0.05）.起病初期,携带组中1例患者GAD65-IFN-γ-T细胞检测呈阳性反应（1/5）,而不携带组未检测到该细胞呈阳性患者.随访时,携带组中1例患者ZnT8A和IA-2A由阴转阳（1/18）,不携带组中未有检测到抗体转阳患者.结论 部分特发性1型糖尿病患者体内存在ZnT8A和GAD65-IFN-γ-T细胞；携带HLA-DQ易感单体型的特发性1型糖尿病患者,较不携带者更加具有自身免疫倾向.胰岛自身免疫是部分初诊特发性1型糖尿病的病因,可能通过HLA-DQ单体型介导.
- 何予李霞黄干杨琳周智广
- 关键词：人白细胞抗原免疫学
- IFIHl基因多态性与自身免疫性疾病
- 2012年
- 自身免疫性疾病的发生是多种环境与遗传因素相互作用的结果，其确切病因仍不清楚，但已有充分证据表明遗传因素在其发病过程中起着重要作用。除人类主要组织相容复合体（HLA）是其主要遗传易感因素外，其他一些非HLA基因也起着重要的作用，如细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4（CTLA4）位点与蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22（PTPN22）等。
- 罗说明林健周智广
- 关键词：自身免疫性疾病基因多态性细胞毒性T淋巴细胞相关抗原蛋白酪氨酸磷酸酶遗传易感因素HLA基因
- 1α，25一二羟维生素D3对胰岛β细胞的保护作用及其机制探讨被引量：17
- 2012年
- 目的观察1α，25一二羟维生素D3（简称VitD3）抑制白介素1B（IL-1β）和干扰素y（IFN-y）诱导胰岛β细胞凋亡的作用及对胰岛素分泌功能的影响，探讨其可能的作用机制。方法将VitD3和IL-y／IFN-y作用于细胞后，采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞的生长增殖率、赫斯特荧光染色观察细胞凋亡形态变化、磷脂结合蛋白v／碘化丙啶双染色流式检测细胞凋亡率、酶联免疫分析检测葡萄糖刺激胰岛素分泌（GSIS）。结果IL-1β／IFN-y组细胞生长增殖率为32．O％±2．7％，不同浓度VitD3（10-10、10-9、10-8mol／L）＋IL-β／IFN-1β/IFN-Y组细胞生长增殖率分别为54．0％±3．2％、59．0％±1．5％，73．0％±2．1％，与IL-β／IFN-1组比较差异均有统计学意义（均P〈0．01）；
- 王安平李霞超晨黄干刘碧莲彭健周智广
- 关键词：胰岛Β细胞凋亡二羟维生素D3四甲基偶氮唑盐比色法胰岛素分泌功能磷脂结合蛋白
- Shh基因转染大鼠骨髓间充质干细胞的可行性被引量：1
- 2012年
- 目的探讨SonicHedgehog（Shh）基因有效转染大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）的可行性。方法构建pcDNA3．1-Shh真核表达质粒，酶切和测序鉴定。密度梯度离心．贴壁培养法获取Wistar大鼠BMSC，电击穿孔法将pcDNA3．1-Shh、pcDNA3．1（-）空质粒和pmaxGFP报告质粒转染进BMSC，48h后Western印迹法检测Shh基因的表达情况。结果酶切和测序结果证实pcDNA3．1．Shh正确性。转染48h后，荧光显微镜可观察到绿色荧光蛋白（GFP）的表达，有40％以上的细胞发出绿色荧光。Western印迹法检测证实有Shh基因表达，而转染pcDNA3．1（-）空质粒的BBMSC未检测到表达。结论重组真核表达质粒pcDNA3．1-Shh转染大鼠BMSC后能有效表达Shh基因，为进一步Shh基因与细胞联合治疗大鼠心肌缺血模型提供了实验依据。
- 杨进福吴晓明唐滔谭志平张伟
- 关键词：基因间质干细胞基因疗法
- 关于中国成人自身免疫糖尿病的首项全国性多中心研究——LADAChina研究的结果与意义被引量：8
- 2013年
- LADAChina研究是在中国新诊断2型糖尿病患者中首次开展的一项全国多中心调查。该项研究的最新研究成果已在Diabetes杂志（2013）发表。本文介绍LADAChina研究的主要成果，并进一步讨论其重要的临床意义。
- 向宇飞周智广
- 关键词：LADA糖尿病
- 妊娠相关性暴发性1型糖尿病临床特征分析被引量：11
- 2012年
- 暴发性1型糖尿病（fulminanttype1diabetes，F1D）是近年由日本学者Imagawa等^[1]首先提出的1型糖尿病的一个新亚型。该病患者胰岛B细胞受到破坏、高血糖症状和酮症酸中毒进展都十分迅速，病情危重，预后凶险。
- 章臻翊罗说明王臻李霞郑超黄干周智广
- 关键词：暴发性1型糖尿病妊娠胰岛B细胞酮症酸中毒病情危重新亚型
- Ghrelin对棕榈酸诱导的THP-1巨噬细胞上TLR4/NF-κB信号通路活化的作用被引量：3
- 2012年
- 目的探讨酰基化Ghrelin对棕榈酸(PA)诱导的人源单核巨噬细胞(THP-1巨噬细胞)上TLR4-NF-κB信号通路的作用。方法用不同浓度的PA孵育THP-1巨噬细胞株12h;用不同浓度的酰基化Ghrelin孵育THP-1巨噬细胞株4h后,再加入PA(200μmol/L)孵育12h。用实时定量PCR检测THP-1巨噬细胞上TLR4mRNA的表达水平;用Western印记检测TLR4蛋白和细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白水平;用ELISA方法检测细胞上清液中IL-1β和TNF-α的浓度。结果与对照组比较,PA呈剂量依赖性增强THP-1巨噬细胞TLR4mRNA和蛋白的表达水平,以及NF-κB p65磷酸化蛋白水平和分泌TNF-α、IL-1β的能力(P均<0.05)。与PA(200μmol/L)组比较,酰基化Ghrelin呈剂量依赖性抑制THP-1巨噬细胞TLR4mRNA(P均<0.05)、TLR4蛋白和NF-κB p65磷酸化蛋白的水平(P均<0.01),以及降低THP-1巨噬细胞分泌TNF-α水平(P均<0.05)和IL-1β的水平(P均<0.01)。结论PA可剂量依赖性诱导THP-1巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路的活化;酰基化Ghrelin可剂量依赖性抑制PA诱导的THP-1巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路的活化。
- 李欣颖刘石平姚岚肖扬李卉周智广
- 关键词：GHRELIN棕榈酸TOLL样受体
